一株甲基營養型芽孢桿菌菌株L-39及其應用制造技術

本發明專利技術屬于微生物技術領域，具體公開了一株甲基營養型芽孢桿菌菌株L?39及其應用。所述甲基營養型芽孢桿菌菌株L?39的保藏編號為CGMCC?No.14926。由該芽孢桿菌菌株制備的微生物菌劑或微生物肥料，可對蔬菜的生長具有顯著的促進作用，能有效降低化學肥料的使用量，可在農業生產中推廣使用。

A strain of Bacillus subtilis strain L-39 and its application

The invention belongs to the field of microbial technology, and discloses a strain of Bacillus cereus strain L 39 and its application. The preservation number of Bacillus subtilis strain L 39 is CGMCC No.14926. Microbial and microbial fertilizers, prepared by Bacillus spore bacillus, can significantly promote the growth of vegetables and can effectively reduce the use of chemical fertilizers, and can be used in agricultural production.

【技術實現步驟摘要】
一株甲基營養型芽孢桿菌菌株L-39及其應用
本專利技術屬于微生物
，具體地說，涉及一株具有解磷作用的芽孢桿菌菌株及其應用。
技術介紹
近年來隨著人口的增長，糧食需求量越來越大，而化肥的輸入也與日俱增，大量施用化肥導致了一系列嚴重的生態環境問題，阻礙了農業經濟的可持續發展。而土壤中的有益微生物可以通過固氮、產IAA等直接促進農作物生長和改善根際微生態系統，從而降低農業生產成本，實現農業的可持續發展。芽孢桿菌具有存活期長和抗逆性強等特點，廣泛分布在不同的土壤和植物根際中，有的也可以侵入植物組織內部。該屬中的許多菌株以其固氮、溶磷能力以及對致病菌的抗性和對植物的促生作用使得其受到了研究者的廣泛關注。微生物肥料是指含有活的微生物，并通過微生物的特定作用給植物提供營養、調節植物生長的特定制品。微生物肥料是未來農林業可持續發展的重要方向之一。但是菌種單一、功能單一和保質期短等突出的問題仍然有待解決。因此微生物肥料的發展趨勢是：由單一菌種向復合菌種發展；由單功能向多功能方面發展；由無芽孢菌向芽孢菌種發展。
技術實現思路
為了解決現有技術中存在的問題，本專利技術的目的是提供一株甲基營養型芽孢桿菌菌株L-39及其制備的微生物菌劑或菌肥在蔬菜等種植中的應用。為了實現本專利技術目的，本專利技術的技術方案如下：第一方面，本專利技術提供了一株甲基營養型芽孢桿菌菌株L-39，經鑒定為甲基營養型芽孢桿菌(Bacillusmethylotrophicus)，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，郵政編碼：100101)，保藏日期為2017年11月17日，保藏編號為CGMCCNo.14926。本專利技術提供的甲基營養型芽孢桿菌菌株L-39在LD固體培養基上生長良好，菌落成白色，邊緣光滑沒有皺褶，直徑1mm-2.5mm，為革蘭氏陽性菌，生長溫度25-55℃，最佳生長溫度37℃，最適PH6.8-7.0。在不良條件下，菌體轉化產生芽孢，芽孢對不良環境抗逆性強，可短時間耐受100℃高溫。本專利技術所提供的甲基營養型芽孢桿菌菌株L-39，相比現有技術中的其他芽孢桿菌，可明顯促進植物生長。第二方面，本專利技術提供了一種含有甲基營養型芽孢桿菌菌株L-39的微生物菌劑或微生物肥料。進一步地，所述微生物菌劑可以為所述甲基營養型芽孢桿菌菌株L-39的發酵液或培養液，具體制備方法可為：將甲基營養型芽孢桿菌菌株L-39接種到液體培養基中，30℃培養箱培養，待85％菌體產生芽孢后停止培養，獲得發酵液或培養液。其中，所述液體培養基的配方為：10g/L蛋白胨、5.0g/L酵母提取物、5.0g/LNaCl2，pH7.0。121℃滅菌25min。當所述甲基營養型芽孢桿菌菌株L-39需要進行固體培養時，所采用的固體培養基可在前述每升液體培養基中加入14g瓊脂。需要說明的是，上述微生物菌劑的制備方法，同時也是培養本專利技術所述菌株的方法，該方法同樣屬于本專利技術的保護范圍。進一步地，所述微生物肥料包括如下重量份計的組分：玉米秸稈10份、草炭土15份、硅藻土5份、氨基酸0.5-1份；所述微生物肥料中還含有本專利技術所述甲基營養型芽孢桿菌菌群，微生物肥料中總有效活菌總數≥5億/克。本專利技術還進一步提供了所述微生物肥料的制備方法，包括以下步驟：1)按配比將玉米秸稈、草炭混勻，粉碎后過80-100目篩，滅菌，冷卻，備用；2)按配比將步驟1)所得物料與硅藻土、氨基酸混合均勻，備用；3)將含所述甲基營養型芽孢桿菌的菌劑按所需有效活菌數加入到步驟2)所得物料中，混合均勻，烘干，即可。所述的微生物肥料優選施用于種植小麥、玉米、土豆、黃瓜、番茄、大蔥等的土壤中。第三方面，本專利技術提供了所述甲基營養型芽孢桿菌菌株L-39在制備解磷制劑方面的應用。以及，所述甲基營養型芽孢桿菌菌株L-39作為有效成分的制劑在農業生產方面的應用。以及，前述微生物菌劑或微生物肥料在蔬菜種植中的應用。本專利技術所述微生物肥料對蔬菜的生長具有顯著的促進作用，能有效降低化學磷肥的使用量，可在農業生產中推廣使用。經檢測，本專利技術所提供的甲基營養型芽孢桿菌菌株L-39及由其制備的微生物菌劑或微生物菌肥對人蓄無毒，無致病性。本專利技術涉及到的原料或試劑均為普通市售產品，涉及到的操作如無特殊說明均為本領域常規操作。本專利技術的有益效果在于：本專利技術所提供的甲基營養型芽孢桿菌菌株L-39是從禾本科植物玉米根際土中分離得到的，將其制備成微生物菌劑或微生物肥料在蔬菜種植中應用，可對蔬菜生長產生顯著的促進作用，能有效降低化學磷肥的使用量，可在農業生產中推廣使用。具體實施方式下面結合實施例對本專利技術做進一步的解釋說明。需要理解的是以下實施例的給出僅是為了起到說明的目的，并不是用于對本專利技術的范圍進行限制。本領域的技術人員在不背離本專利技術的宗旨和精神的情況下，可以對本專利技術進行各種修改和替換。下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規方法。下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業途徑得到。實施例1微生物菌劑的制備本實施例用于說明甲基營養型芽孢桿菌菌株L-39的培養及菌劑的制備。將甲基營養型芽孢桿菌(Bacillusmethylotrophicus)菌株L-39接種到液體培養基中，30℃培養箱培養，待85％菌體產生芽孢后停止培養。其中，所述液體培養基的配方為：10g/L蛋白胨、5.0g/L酵母提取物、5.0g/LNaCl2，pH7.0。121℃滅菌25min。所得發酵液中，菌落濃度為5×108CFU/mL。實施例2微生物肥料的制備本實施例用于說明一種提高作物抗旱性的復合固氮微生物肥料。所述微生物肥料包括如下重量份計的組分：玉米秸稈10份、草炭土15份、硅藻土5份、氨基酸0.5-1份，所述微生物肥料中還含有所述甲基營養型芽孢桿菌菌群。微生物肥料中總有效活菌總數≥5×108CFU/mL。制備方法具體如下：1)按配比將玉米秸稈、草炭混勻，粉碎后過80-100目篩，滅菌，冷卻，備用；2)按配比將步驟1)所得物料與硅藻土、氨基酸混合均勻，備用；3)將含所述甲基營養型芽孢桿菌的菌劑按所需有效活菌數加入到步驟2)所得物料中，混合均勻，烘干，即得。實施例3微生物肥料的應用將玉米種子經消毒處理后放于鋪有濕潤濾紙的無菌平皿中，至于25℃恒溫箱催芽。發芽后挑取發育一致的幼苗移栽到塑料盆中，每盆種三棵幼苗。將含有甲基營養型芽孢桿菌L-39微生物肥料以底肥的形式施用(0.4g/盆)，施用吸附載體作空白對照，同時以分別含有枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)為ATCC6051，枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)ATCC6633，銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)ATCC9027的微生物肥料作為陽性對照。實驗設置三個重復。移栽第四周后分別記錄株高和總鮮重。結果表明，使用含有甲基營養型芽孢桿菌L-39微生物肥料比空白對照分別增加株高和總鮮重達91％和119％，比枯草芽孢桿菌ATCC6051分別增加株高和總鮮重達60％和65％，比枯草芽孢桿菌ATCC6051分別增加株高和總鮮重達54％和84％，比枯草芽孢桿菌ATCC6051分別增加株高和總鮮重達27％和49％。可見，本本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種甲基營養型芽孢桿菌菌株L?39，其特征在于，其保藏編號為CGMCC?No.14926。

【技術特征摘要】
1.一種甲基營養型芽孢桿菌菌株L-39，其特征在于，其保藏編號為CGMCCNo.14926。2.一種含有權利要求1所述菌株的微生物菌劑。3.根據權利要求2所述的微生物菌劑，其特征在于，其制備方法為：將甲基營養型芽孢桿菌菌株L-39接種到液體培養基中，30℃培養箱培養，待85％菌體產生芽孢后停止培養，獲得發酵液或培養液；其中，所述液體培養基的配方為：10g/L蛋白胨、5.0g/L酵母提取物、5.0g/LNaCl2，pH7.0，121℃滅菌25min。4.一種含有權利要求1所述菌株的微生物肥料。5.根據權利要求4所述的微生物肥料，其特征在于，所述微生物肥料包括如下重量份計的組分：玉米秸稈10份、草炭土15份、硅藻土5份、氨基酸0.5-1份；所述微生物肥料中還含有所述甲基營養型芽孢桿菌菌群，總有效活菌總數≥5億/克。6.根據權利要求5所述的微生物肥料，其特征在于，其制備方法包括如下步驟：1)按配比將玉米秸稈、草炭混勻，粉碎后過80-...

【專利技術屬性】
技術研發人員：陳三鳳，李永斌，石皓文，
申請(專利權)人：中國農業大學，
類型：發明
國別省市：北京,11