一種分離三七總皂苷中單一組分的方法技術

本發明專利技術公開一種分離三七總皂苷中單一組分的方法，以甲基丙烯酸甲酯為單體，富馬海松酸三(丙烯酸乙二醇)酯為交聯劑，與自由基引發劑充分混合后涂覆到硅膠表面，然后使其進行自由基聚合反應得到核殼型二氧化硅@高度交聯的松香基高分子微球，將其作為固定相填料，采用濕法裝柱制備得到核殼型二氧化硅@高度交聯的松香基高分子色譜柱，對三七總皂苷進行HPLC分離，對三七皂苷R1和人參皂苷Rg1的分離度可達到3.02，對人參皂苷Rg1和人參皂苷Re的分離度可達到3.62，對人參皂苷Re和人參皂苷Rb1的分離度可達到25.43，對人參皂苷Rb1和人參皂苷Rd的分離度可達到8.42。本發明專利技術的方法能將三七總皂苷中各組分完全分開，且分離效果較好。

A method for the separation of single component in total saponins of notoginseng

【技術實現步驟摘要】
一種分離三七總皂苷中單一組分的方法
本專利技術屬于高效液相色譜法領域，具體涉及一種分離三七總皂苷中單一組分的方法。
技術介紹
三七總皂苷包括三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1和人參皂苷Rd，化學結構式分別為：三七又名田七，性溫、味甘，歸肝、胃經，其莖、葉、花等均可入藥，藥用價值極高，在我國中藥材體系中具有極高的地位。三七中的三七皂苷含量超過13％，是發揮藥用價值的重要成分，其中主要活性成分為三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1和人參皂苷Rd，因此將其分離開進行提取具有重要意義。液相色譜分析是指流動相為液體的色譜技術。通過改進填料的粒度及柱壓，在經典的液相柱色譜的基礎上引入了氣相色譜的塔板理論，在技術上采用了高壓輸液泵，高效固定相和高靈敏度的檢測器，實現了分析速度快、分離效率高和操作自動化，這種色譜技術被稱為高效液相色譜法(Highperformanceliquidchromatography，簡稱HPLC)。HPLC具有分離效能高、選擇性高、靈敏度高、分析速度快和應用范圍廣的優勢。目前，關于三七總皂苷分離的方法報道，我們查到如下一些文獻：1.周迎春，趙懷清，梁寧，etal.高效液相色譜法同時測定三七總皂苷中人參皂苷Rg1、Re、Rb1與三七皂苷R1含量[J].沈陽藥科大學學報，2003，20(1):27-31；其中提到三七總皂苷中人參皂苷Rg1、Re、Rb1與三七皂苷R1的液相色譜條件，用AsahipakNH2P-50色譜柱(250mm×4.0mm)，以乙腈-水(81：19，V:V)為流動相，流速1.2mL/min，檢測波長203nm，柱溫為室溫。2.梁寧，趙懷清，周迎春，etal.HPLC法同時測定三七總皂苷中人參皂苷Rg1與Rb1的含量[J].中草藥，2002，33(8)：704-705；其中提到測定三七總皂苷中人參皂苷Rg1與Rb1的含量的液相色譜條件，用AsahipakNH2P-50色譜柱(250mm×4.0mm)，以乙腈-水(80：20，V:V)為流動相，流速1.0mL/min，檢測波長203nm，柱溫為室溫。3.申請號：200610093606.X，專利技術名稱：一種三醇組人參皂苷和二醇組人參皂苷的制備方法，其中提到人參皂苷Re、Rb1、Rg1的提取，將人參或紅參提取物大孔吸附樹脂吸附后用低濃度有機溶劑的水溶液洗脫，然后用高濃度有機溶劑的水溶液洗脫，分別收集洗脫液，回收溶劑，即得。然而，上述方法對三七總皂苷的分離提取不太理想，因此有必要探索一種更好的分離三七總皂苷中單一組分的方法。
技術實現思路
針對現有技術存在的問題，本專利技術提供一種分離三七總皂苷中單一組分的方法，該方法對三七總皂苷中各組分具有較好的分離度和選擇性，且色譜柱機械強度更大，溶劑耐受度更高。本專利技術的技術方案如下：一種分離三七總皂苷中單一組分的方法，將核殼型二氧化硅@高度交聯的松香基高分子微球作為固定相填料，采用濕法裝柱制備得到核殼型二氧化硅@高度交聯的松香基高分子色譜柱；將核殼型二氧化硅@高度交聯的松香基高分子色譜柱接入液相色譜儀，設置液相色譜儀的流動相流速為1.0-2.0mL/min，檢測波長203nm，柱溫箱35±10℃；啟動進樣閥使流動相將三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1和人參皂苷Rd的混合溶液帶入核殼型二氧化硅@高度交聯的松香基高分子色譜柱中，實現三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1和人參皂苷Rd的分離；所述核殼型二氧化硅@高度交聯的松香基高分子微球的結構為以二氧化硅為核，以松香基高分子為殼，并高度交聯在一起的結構，其中松香基高分子的結構式為：式中R為：作為技術方案的優選，所述核殼型二氧化硅@高度交聯的松香基高分子微球粒徑分布為2-50μm，孔徑分布為0.5-15nm，比表面積為150-350m2/g。作為技術方案的優選，所述的濕法裝柱為用恒壓泵將核殼型二氧化硅@高度交聯的松香基高分子微球填充于空色譜柱中，在3000-6000psi的壓力下裝柱50-100min，待柱壓平衡后，將色譜柱卸下并裝上柱頭，即得到核殼型二氧化硅@高度交聯的松香基高分子色譜柱。作為技術方案的優選，所述流動相為乙腈水。作為技術方案的優選，所述核殼型二氧化硅@高度交聯的松香基高分子微球的制備方法為：以甲基丙烯酸甲酯為單體，富馬海松酸三(丙烯酸乙二醇)酯為交聯劑，與自由基引發劑充分混合后，均勻涂覆到硅膠表面，然后置于水相中進行自由基聚合反應，即可制得核殼型二氧化硅@高度交聯的松香基高分子微球。作為技術方案的優選，所述單體、交聯劑與自由基引發劑的質量比為1-50：1-100：0.1-5。作為技術方案的優選，所述交聯劑及單體與硅膠的質量比1：1-100。作為技術方案的優選，所述水相為質量分數為1-15％的十二烷基硫酸鈉水溶液。作為技術方案的優選，所述自由基引發劑為有機過氧化物類引發劑或偶氮類引發劑。作為技術方案的進一步優選，所述自由基引發劑為過氧化二苯甲酰、偶氮二異丁腈或偶氮二異庚腈。核殼型二氧化硅@高度交聯的松香基高分子微球分離三七總皂苷的機理：本專利技術使用的色譜柱的固定相填料核殼型二氧化硅@高度交聯的松香基高分子微球由甲基丙烯酸甲酯與富馬海松酸三(丙烯酸乙二醇)酯交聯聚合而成，核殼型二氧化硅@高度交聯的松香基高分子微球的結構模型圖如圖7所示。一方面，富馬海松酸三(丙烯酸乙二醇)酯上面含有與三七皂苷相似的甾環結構，并且其上的手性C原子使得合成的松香基高分子色譜柱具有更好的立體選擇性用于分離結果相似物，另一方面，富馬海松酸三(丙烯酸乙二醇)酯具有三個酯基，交聯度更高，能形成更致密的網狀結構，有利于提高色譜柱的耐壓性能；微球表面孔結構可以根據被分離物質尺寸大小進行調整，有利于分離過程的吸附解析。與現有技術相比，本專利技術的有益效果為：(1)本專利技術使用的高度交聯的松香基高分子微球以天然產物松香的衍生物富馬海松酸三(丙烯酸乙二醇)酯為原料，可再生，機械強度高，安全無毒，可以用于食品級的分離。(2)本專利技術使用的高度交聯的松香基高分子微球為弱極性，與現有的松香基高分子微球比較，其酸值更低，屬于完全中性的微球，有更好的耐堿性、膨脹度小、粒徑均一、比表面積大等特點，與申請人的在先申請201710710292.1采用兩個丙烯基制備的松香基高分子微球相比，機械強度高，作為色譜柱填料耐壓性更高、極性更小，不會因膨脹而破壞微球的網絡結構，耐壓性能從8MPa提高至20MPa。(3)本專利技術使用的色譜柱的固定相填料核殼型二氧化硅@高度交聯的松香基高分子微球既保持了二氧化硅微球粒徑均一，球形度良好的特點，同時又兼顧了高度交聯的松香基高分子微球孔結構規整，表面官能團豐富，機械強度大，溶劑耐受度高的優勢，所以以該微球作為固定相制備得到的核殼型二氧化硅@高度交聯的松香基高分子色譜柱機械強度大，溶劑耐受度高，在較高的流速和壓力下本文檔來自技高網...

【技術保護點】
1.一種分離三七總皂苷中單一組分的方法，其特征在于，將核殼型二氧化硅@高度交聯的松香基高分子微球作為固定相填料，采用濕法裝柱制備得到核殼型二氧化硅@高度交聯的松香基高分子色譜柱；將核殼型二氧化硅@高度交聯的松香基高分子色譜柱接入液相色譜儀，設置液相色譜儀的流動相流速為1.0-2.0mL/min，檢測波長203nm，柱溫箱35±10℃；啟動進樣閥使流動相將三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1和人參皂苷Rd的混合溶液帶入核殼型二氧化硅@高度交聯的松香基高分子色譜柱中，實現三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1和人參皂苷Rd的分離；所述核殼型二氧化硅@高度交聯的松香基高分子微球的結構為以二氧化硅為核，以松香基高分子為殼，并高度交聯在一起的結構，其中松香基高分子的結構式為：/n

【技術特征摘要】
1.一種分離三七總皂苷中單一組分的方法，其特征在于，將核殼型二氧化硅@高度交聯的松香基高分子微球作為固定相填料，采用濕法裝柱制備得到核殼型二氧化硅@高度交聯的松香基高分子色譜柱；將核殼型二氧化硅@高度交聯的松香基高分子色譜柱接入液相色譜儀，設置液相色譜儀的流動相流速為1.0-2.0mL/min，檢測波長203nm，柱溫箱35±10℃；啟動進樣閥使流動相將三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1和人參皂苷Rd的混合溶液帶入核殼型二氧化硅@高度交聯的松香基高分子色譜柱中，實現三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1和人參皂苷Rd的分離；所述核殼型二氧化硅@高度交聯的松香基高分子微球的結構為以二氧化硅為核，以松香基高分子為殼，并高度交聯在一起的結構，其中松香基高分子的結構式為：



式中R為：


2.根據權利要求1所述的分離三七總皂苷中單一組分的方法，其特征在于，所述核殼型二氧化硅@高度交聯的松香基高分子微球粒徑分布為2-50μm，孔徑分布為0.5-15nm，比表面積為150-350m2/g。


3.根據權利要求1或2所述的分離三七總皂苷中單一組分的方法，其特征在于，所述的濕法裝柱為用恒壓泵將核殼型二氧化硅@高度交聯的松香基高分子微球填充于空色譜柱中，在3000-6000psi的壓力下裝柱50-100min，待柱壓平衡后，將色譜柱卸下并裝上柱頭，即得到...

【專利技術屬性】
技術研發人員：雷福厚，謝文博，夏璐，李浩，李文，孫耀，程格格，鄧杰，王婷，覃麗婷，易馮梅，
申請(專利權)人：廣西民族大學，
類型：發明
國別省市：廣西;45