選育高繁殖力對蝦群體的分子標記27W1及其應用制造技術

本發明專利技術提供了選育高繁殖力對蝦群體的分子標記27W1及其應用。所述分子標記27W1的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，其中第301位堿基G在凡納濱對蝦高繁殖力群體中的等位基因頻率≥98.33%。本發明專利技術還提供了所述的分子標記27W1的引物，包括核苷酸序列如SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示的擴增引物以及核苷酸序列如SEQ ID No.4所示的延伸引物。凡納濱對蝦高繁殖力分子標記27W1可以不受生長階段的限制，能夠用于凡納濱對蝦早期選育，快速選育出繁殖性狀優良的親本群體，促進凡納濱對蝦高繁殖力新品種的選育進程。的選育進程。的選育進程。

【技術實現步驟摘要】
選育高繁殖力對蝦群體的分子標記27W1及其應用


[0001]本專利技術屬于水產動物分子標記輔助育種領域，具體涉及選育高繁殖力對蝦群體的分子標記27W1及其應用。

技術介紹

[0002]凡納濱對蝦(Penaeus vannamei)又稱南美白對蝦、太平洋白蝦，隸屬于節肢動物門(Arthropoda)、甲殼綱(Crustaeea)、十足目(Deeapoda)、對蝦科(Penaeidae)、對蝦屬(Penaeus)，是我國和世界養殖產量最高的對蝦種類，也是單一產值最高的水產養殖種類之一。2020年我國養殖產量超過180萬噸，產值超過700億元，約占世界總產量的40％。我國每年種蝦需求量超過100萬對，苗種需求量超過1.5萬億尾。凡納濱對蝦具有產卵量高，可多次產卵的特性。然而在苗種生產中，雌蝦的繁殖能力存在巨大個體差異。在一個生產周期中，部分雌蝦從未產卵，而有的雌蝦能夠多次產卵。培育高繁殖力(產卵和產卵量)新品種，對于提高育苗效率，節省生產成本具有重要意義。繁殖性狀屬中低遺傳力性狀，傳統的育種方法進展緩慢，借助分子標記輔助育種技術可有效加快選育進程。
[0003]作為第三代分子標記，單核苷酸多態性標記(SNP)具有豐富度高、密度大、穩定性強、共顯性等特點，成為目前蝦、蟹等經濟甲殼動物中應用最廣泛的分子標記技術。目前，有關凡納濱對蝦繁殖相關SNP標記的開發較少，并且產業中缺乏可應用于分子標記輔助育種的標記。因此，開發高繁殖力的分子標記對凡納濱對蝦的新品種培育具有重要意義。

技術實現思路

[0004]本專利技術提供了選育高繁殖力對蝦群體的分子標記27W1及其應用。分子標記27W1能夠用于凡納濱對蝦高繁殖力群體的篩選中，其鑒定效率及準確率高。
[0005]為實現上述專利技術目的，本專利技術采用以下技術方案予以實現：
[0006]本專利技術提供了選育高繁殖力對蝦群體的分子標記27W1，所述分子標記27W1的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
[0007]進一步的，在凡納濱對蝦高繁殖力群體中，所述分子標記27W1的第301位堿基G為候選27W1_SNP位點。
[0008]進一步的，所述堿基G凡納濱對蝦高繁殖力群體中的等位基因頻率>98％。
[0009]優選的，所述堿基G凡納濱對蝦高繁殖力群體中的等位基因頻率≥98.33％。
[0010]本專利技術還提供了所述的分子標記27W1的引物，所述引物包括核苷酸序列如SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示的擴增引物以及核苷酸序列如SEQ ID No.4所示的延伸引物。
[0011]本專利技術還提供了所述的分子標記27W1或者所述的分子標記27W1的引物在用于篩選具有高繁殖力的凡納濱對蝦群體中的應用。
[0012]進一步的，篩選具有高繁殖力的凡納濱對蝦群體的具體步驟為：提取凡納濱對蝦群體內(家系、品系或地理群體)測試樣品的DNA，并將其作為模板，利用所述引物進行飛行質譜分型，若分型結果中分子標記的第301位堿基G的等位基因頻率≥98.33％，則選擇該凡
納濱對蝦群體作為培育凡納濱對蝦高繁殖力的親本。
[0013]進一步的，所述凡納濱對蝦家系或群體測試樣品的數量在30尾以上。
[0014]進一步的，在飛行質譜分型中，PCR擴增的條件為預變性94℃3min；變性94℃30s，退火56℃25s，延伸72℃30s，共重復40個循環；最后延伸72℃4min；4℃保存。
[0015]進一步的，在飛行質譜分型中，延伸反應的條件為預變性94℃ 30s；變性94℃ 5s，退火52℃ 5s，延伸80℃ 5s，共重復40個循環；最后延伸72℃ 3min；4℃保存。
[0016]本專利技術還提供了所述的分子標記27W1在凡納濱對蝦遺傳多樣性分析、種質鑒定和遺傳圖譜構建中的應用。
[0017]本專利技術與現有技術相比，具有以下優點和有益效果：
[0018]1、本專利技術提供的凡納濱對蝦高繁殖力分子標記27W1可以不受生長階段的限制，能夠用于凡納濱對蝦早期選育，快速選育出繁殖性狀優良的親本群體，促進凡納濱對蝦高繁殖力新品種的選育進程。
[0019]2、利用本專利技術提供的分子標記27W1檢測凡納濱對蝦繁殖性狀，方法準確可靠、操作簡單，能夠有效、快速的篩選出高繁殖力群體，輔助早期育種，增加優良品質的凡納濱對蝦親蝦的使用效率，提高苗種產量，促進凡納濱對蝦的健康繁育，對凡納濱對蝦的健康養殖與發展具有重要的意義，具有廣闊的應用前景。
附圖說明
[0020]圖1為本專利技術中在驗證群體中進行飛行質譜分型驗證結果。
具體實施方式
[0021]以下結合具體實施例對本專利技術的技術方案作進一步詳細說明。
[0022]本專利技術所用凡納濱對蝦均來自中國水產科學研究院黃海水產研究所合作基地邦普種業科技有限公司。將來自57個家系的10月齡健康雌性種蝦進行單側眼柄切除以促進卵巢同步成熟，8～10尾/家系，共604尾，體重50
±
5g。切眼柄后的雌蝦放入6個16m3大池，密度6～7尾/m2。雄性親蝦來自相同家系，8～9尾/家系，共500尾，體重45
±
5g。雄蝦以家系為單位放入3m3水泥池，密度2～3尾/m2。親蝦每天投喂3餐沙蠶和2餐魷魚進行營養強化，每日投喂總量達親蝦總體重的20％，每天分5次投喂，保證沙蠶24小時可見。強化期間保持水溫28～29℃，鹽度30～31
‰
，pH 7.8～8.2，持續供氧，日換水量80％。強化20天后，挑選卵巢發育飽滿，顏色橘紅的雌蝦放入雄蝦池進行自然交尾，交配時避免近親交配。記錄30天內所有雌蝦的產卵次數及每次產卵量。建立雌蝦繁殖力選擇指數，計算公式如下：
[0023]y
i
＝0.5*(a
elfi
?
μ
elf
)*σ
elf
?1+0.5*(a
aeni
?
μ
aen
)*σ
aen
?1?????????????????
(1)
[0024]式中，y
i
是第i尾雌蝦的繁殖力指數；a
elfi
和a
aeni
分別是第i尾雌蝦的產卵頻次和產卵量；μ
elf
和μ
aen
是全部雌蝦產卵頻次和產卵量的平均值；σ
elf
和σ
aen
是全部雌蝦的產卵頻次和產卵量的標準誤差。
[0025]選擇指數最高的30尾雌蝦認為是高繁殖力組，選擇指數最低的30尾雌蝦(從未發現性腺成熟)認為是低繁殖力組。選擇高繁殖力和低繁殖力雌蝦各30尾組建繁殖力差異群體。解剖取肌肉組織于凍存管中，液氮保存。
[0026]實施例1
[0027]一、雌蝦繁殖力相關候選分子標記篩選
[0028]1、測序數據過濾和比對
[0029]采用CTAB法進行凡納濱對蝦本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
1.選育高繁殖力對蝦群體的分子標記27W1，其特征在于，所述分子標記27W1的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。2.根據權利要求1所述的分子標記27W1，其特征在于，在凡納濱對蝦高繁殖力群體中，所述分子標記27W1的第301位堿基G為候選27W1_SNP位點。3.根據權利要求2所述的分子標記27W1，其特征在于，所述堿基G凡納濱對蝦高繁殖力群體中的等位基因頻率>98%。4.權利要求1所述的分子標記27W1的引物，其特征在于，所述引物包括核苷酸序列如SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示的擴增引物以及核苷酸序列如SEQ ID No.4所示的延伸引物。5.權利要求1所述的分子標記27W1或者權利要求4所述的分子標記27W1的引物在用于篩選具有高繁殖力的凡納濱對蝦群體中的應用。6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，篩選具有高繁殖力的凡納濱對蝦群體的具體步驟為：提取凡納濱對蝦群體內測試樣品的DNA，并將其作為模板，利用所述引物進行飛行質譜分型，若分型結果中分子標記的第3...

【專利技術屬性】
技術研發人員：隋娟，欒生，孔杰，代平，孟憲紅，羅坤，曹家旺，譚建，陳寶龍，
申請(專利權)人：中國水產科學研究院黃海水產研究所，
類型：發明
國別省市：