本發(fā)明專利技術(shù)公開(kāi)了一種從中藥中分離制備五沒(méi)食子酰基葡萄糖的方法。其包括以下步驟：１．提?。簩⒅兴幏鬯椋靡掖迹芤夯虮芤簽槿軇┙葜兴幏勰┎⒊曁崛?，將得到的提取液減壓濃縮獲得棕色稠膏；用水溶解該稠膏，再用乙酸乙酯萃?。常荡魏?，將萃取液減壓蒸干，得到五沒(méi)食子?；咸烟堑拇痔嵛?。２．純化：將五沒(méi)食子酰基葡萄糖的粗提物溶解，分別使用兩種不同的溶劑體系，經(jīng)過(guò)高速逆流色譜對(duì)粗提物的兩次分離，最終得到高純度的五沒(méi)食子?；咸烟菃误w，純度可達(dá)９５％以上。本發(fā)明專利技術(shù)工藝簡(jiǎn)單易行，提取效率高、分離效果好，回收率高，具有很好的推廣應(yīng)用價(jià)值。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及從中藥提取分離五沒(méi)食子?；咸烟堑姆椒ǎ貏e是采用高速逆流色譜分離 制備五沒(méi)食子酰基葡萄糖的方法。
技術(shù)介紹
五沒(méi)食子?；咸烟鞘且环N具有多種藥理作用的生物活性組分。最近有研究顯示它具有 明顯的抗癌作用和減少糖尿病伴隨的肥胖等功效。這些研究提示五沒(méi)食子?；咸烟菍⒖赡?成為種具有巨大開(kāi)發(fā)潛力的天然藥物。有文獻(xiàn)報(bào)道(Ren Yulta， et al. J Med Chem. 2006， 49 (9): 2829.)，可以通過(guò)化學(xué)合成的方法制備 五沒(méi)食子?；咸烟?。但工藝繁雜、成本昂貴使其應(yīng)用受到很大限制。本專利技術(shù)人已研究證實(shí) 在一些中藥中含有五沒(méi)食子?；咸烟?，因而從中藥中提取、分離和純化五沒(méi)食子?；咸烟蔷哂袕V泛的應(yīng)用前景。但五沒(méi)食子?；咸烟堑幕瘜W(xué)結(jié)構(gòu)復(fù)雜，溶解性較差，分離純化較 難。通常從中藥中提取有效成分的方法多采用固相填充柱色譜法進(jìn)行分離，然而由于在五沒(méi) 食子?；咸烟欠肿又泻卸鄠€(gè)酚羥基會(huì)與固體介質(zhì)表面產(chǎn)生很強(qiáng)的吸附作用，導(dǎo)致嚴(yán)重不 可逆吸附，不僅造成回收率很低，而且分離工藝繁瑣。采用高速逆流色譜分離技術(shù)可以提高 樣品的回收率，同時(shí)具有操作簡(jiǎn)單、重現(xiàn)性好、分離效率高、分離量較大等特點(diǎn)，可以有效 地解決傳統(tǒng)分離方法的缺陷。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的是提供。 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，采用以下技術(shù)方案(1) 五沒(méi)食子?；咸烟堑奶崛⒅兴幏鬯?，用乙醇-水溶液或丙酮-水溶液為溶劑浸泡中藥粉末并超聲提取，得到的提 取液進(jìn)行減壓濃縮獲得棕色稠膏；用水溶解該稠膏，再用乙酸乙酯萃取3-5次后，將萃取液 減壓蒸干，得到五沒(méi)食子?；咸烟堑拇痔嵛?。(2) 五沒(méi)食子酰基葡萄糖的初步純化將五沒(méi)食子?；咸烟堑拇痔嵛镉酶咚倌媪魃V分離法進(jìn)行初步分離。收集含五沒(méi)食子 ?；咸烟堑慕M分，減壓蒸干溶劑，得到五沒(méi)食子?；咸烟堑某醴治?。 .(3)五沒(méi)食子?；咸烟堑木茖?2)所得到的五沒(méi)食子酰基葡萄糖的初分物用高速逆流色譜分離法再一次進(jìn)行分離 純化，最終得到高純度的五沒(méi)食子?；咸烟菃误w。作為提取原料的中藥為白芍、赤芍、五倍子、牡丹皮、黃芩、蘆薈、決明子、地錦草、 第枝核、菊花、紅花、杜仲和大黃等。所用的乙醇-水溶液或丙酮-水溶液中，乙醇或丙酮的體積百分比為40-60%;并按每克白 芍粉末用5-10ml溶劑的比例進(jìn)行浸泡。超聲提取的溫度是40-6CTC，超聲時(shí)間為1-2小吋。 溶劑濃縮、干燥的溫度均小于6(TC。用高速逆流色譜分離純化時(shí)，溶劑體系由烷烴-脂肪酸酯-脂肪醇-水組成的體系，其中垸 烴可選用正己烷或環(huán)己垸等；脂肪酸酯可選用乙酸乙酯或乙酸甲酯等；脂肪醇可選用甲醇、 乙醇、丙醇、異丙醇或正丁醇等，烷烴-脂肪酸酯-脂肪醇-水的配比為(0.5-2): (8-12): (1-3): 10;采用上相作固定相，下相作流動(dòng)相的反相洗脫方式。分別使用兩種不同的溶劑體系，經(jīng)過(guò)高速逆流色譜對(duì)粗提物的兩次分離，最終得到高純 度的五沒(méi)食子?；咸烟菃误w。與柱色譜法相比，采用本專利技術(shù)方法工藝簡(jiǎn)單、樣品無(wú)損失、目的產(chǎn)物收率高、分離效果好，可以從白芍中分離純化得到純度在95%以上的五沒(méi)食子?；咸烟菃误w。具體實(shí)施例方式實(shí)施例l用乙醇-水溶液提取粗提物1. 將白芍粉碎過(guò)40目篩，稱取20g白芍粉末，加入100ml乙醇-水溶液(乙醇的體積分 數(shù)為50%)浸泡并進(jìn)行超聲提取。提取溫度為60'C，超聲時(shí)間為lh,過(guò)濾，保留濾液。 在同樣條件下再次加入乙醇-水溶液，對(duì)濾渣再提取，反復(fù)3次，將三次濾液合并。在 50'C下，減壓蒸發(fā)濃縮，除去有機(jī)溶劑得到棕色稠膏。2. 加入適量水將稠膏溶解，用水飽和的乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯層萃取液，在 50'C下，減壓蒸發(fā)濃縮至蒸干溶劑，得到五沒(méi)食子?；咸烟谴痔嵛?。實(shí)施例2用丙酮-水溶液提取粗提物1. 將赤芍粉碎過(guò)40目篩，稱取20g赤芍粉末，加入100ml丙酮-水溶液(丙酮的體積分 數(shù)為60%)浸泡并進(jìn)行超聲提取。提取溫度為6(TC，超聲時(shí)間為lh，過(guò)濾，保留濾液。 在同樣條件下，再次加入丙酮-水溶液，對(duì)濾渣再提取，反復(fù)3次，將三次濾液合并。在 50'C下，減壓蒸發(fā)濃縮，除去有機(jī)溶劑得到棕色稠膏。2. 加入適量水將稠膏溶解，用水飽和的乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯層萃取液，在5(TC下，減壓蒸發(fā)濃縮至蒸干溶劑，得到五沒(méi)食子?；咸烟谴痔嵛铩?實(shí)施例3五沒(méi)食子?；咸烟谴痔崛∥锏某醪郊兓咳≌痕?7ml、乙酸乙酯870ml、甲醇174ml和水870ml，置于2000ml分液漏 斗中，充分搖勻，靜置分層后，取上相作固定相，下相作流動(dòng)相。將上相以25ml/min 的流速注入高速逆流色譜儀的色譜柱中。開(kāi)啟逆流色譜儀至800轉(zhuǎn)/min，然后以 2.0ml/min的流速泵入流動(dòng)相，平衡高速逆流色譜系統(tǒng)。用20ml下相溶液溶解200mg 五沒(méi)食子?；咸烟谴痔嵛铮w系平衡后，由進(jìn)樣闊進(jìn)樣，用紫外一可見(jiàn)檢測(cè)器在 280nm下監(jiān)測(cè)洗出液。根據(jù)檢測(cè)器采集的圖譜，收集含有五沒(méi)食子酰基葡萄糖的組分。 在5(TC下，減壓蒸發(fā)濃縮至蒸干溶劑，得到五沒(méi)食子酰基葡萄糖初分物，其中五沒(méi)食 子?；咸烟呛考s為40%。實(shí)施例3五沒(méi)食子?；咸烟谴痔崛∥锏木屏咳≌痕?0ml、乙酸乙酯900ml、甲醇90ml和水900ml，置于2000ml分液漏斗 中，充分搖勻，靜置分層后，取上相作固定相，下相作流動(dòng)相。將上相以25ml/min的流 速注入高速逆流色譜儀的色譜柱中。開(kāi)啟逆流色譜儀至800轉(zhuǎn)/min，然后以2ml/min的 流速泵入流動(dòng)相，平衡高速逆流色譜系統(tǒng)。用20ml下相溶液溶解10mg五沒(méi)食子?；?萄糖初分物，待體系平衡后，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，用紫外一可見(jiàn)檢測(cè)器在280nm監(jiān)測(cè)洗出液。 根據(jù)檢測(cè)器采集的圖譜，收集含五沒(méi)食子?；咸烟欠宓慕M分。在5(TC下，減壓蒸發(fā)濃 縮至蒸干溶劑，得到棕色五沒(méi)食子酰基葡萄糖固體，經(jīng)HPLC檢驗(yàn)，純度為95.8%。權(quán)利要求1.，其特征在于，步驟如下(1)五沒(méi)食子酰基葡萄糖的提取將中藥粉碎，用乙醇-水溶液或丙酮-水溶液為溶劑浸泡中藥粉末并超聲提取，得到的提取液進(jìn)行減壓濃縮獲得棕色稠膏；用水溶解該稠膏，再用乙酸乙酯萃取3-5次后，將萃取液減壓蒸干，得到五沒(méi)食子?；咸烟堑拇痔嵛?。(2)五沒(méi)食子酰基葡萄糖的初步純化將五沒(méi)食子?；咸烟堑拇痔嵛镉酶咚倌媪魃V分離法進(jìn)行初步分離。收集含五沒(méi)食子?；咸烟堑慕M分，減壓蒸干溶劑，得到五沒(méi)食子酰基葡萄糖的初分物。(3)五沒(méi)食子?；咸烟堑木茖?2)所得五沒(méi)食子?；咸烟堑某醴治镉酶咚倌媪魃V分離法再一次進(jìn)行分離純化，最終得到高純度的五沒(méi)食子?；咸烟菃误w。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從中藥中分離制備五沒(méi)食子酰基葡萄糖的方法，其特征在于.-作為提取原料的中藥為白芍、赤芍、五倍子、牡丹皮、黃芩、蘆薈、決明子、地錦草、荔 枝核、菊花、紅花、杜仲和大黃等。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從中藥中分離制備五沒(méi)食子?；咸烟堑姆椒?，其特征在于所用的乙醇-水溶液或丙酮-水溶液中，乙醇或丙酮的體積百分比為40-60%;并按每克中藥 粉末用5-10ml的比例進(jìn)行浸泡。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從中藥中分離制備五沒(méi)食子?；咸烟堑姆椒ǎ涮卣髟谟?-超聲提取的溫度是40-6(TC，超聲時(shí)本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種從中藥中分離制備五沒(méi)食子?；咸烟堑姆椒ǎ涮卣髟谟?，步驟如下：?。ǎ保┪鍥](méi)食子酰基葡萄糖的提取 將中藥粉碎，用乙醇－水溶液或丙酮－水溶液為溶劑浸泡中藥粉末并超聲提取，得到的提取液進(jìn)行減壓濃縮獲得棕色稠膏；用水溶解該稠膏，再 用乙酸乙酯萃?。常荡魏?，將萃取液減壓蒸干，得到五沒(méi)食子?；咸烟堑拇痔嵛铩！。ǎ玻┪鍥](méi)食子?；咸烟堑某醪郊兓⑽鍥](méi)食子?；咸烟堑拇痔嵛镉酶咚倌媪魃V分離法進(jìn)行初步分離。收集含五沒(méi)食子酰基葡萄糖的組分，減壓蒸干溶劑，得到五 沒(méi)食子?；咸烟堑某醴治?。 （３）五沒(méi)食子?；咸烟堑木啤ⅲǎ玻┧梦鍥](méi)食子?；咸烟堑某醴治镉酶咚倌媪魃V分離法再一次進(jìn)行分離純化，最終得到高純度的五沒(méi)食子酰基葡萄糖單體。
【技術(shù)特征摘要】
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：王橋，殷志爽，宋學(xué)英，王維聰，王潮，楊華，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：首都醫(yī)科大學(xué)，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：11[中國(guó)|北京]
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