【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于水稻基因工程，尤其涉及gl6.1基因在調控水稻粒型中的應用。
技術介紹
1、水稻(oryza?sativa?l.)是主要的糧食作物之一，在我國65％以上的人口以稻米為主食，因此，水稻的產量關系到國家糧食安全和社會穩定。水稻的產量是由有效穗數、穗粒數、結實率和千粒重所決定的，千粒重是由粒型和灌漿程度決定的，而粒型又包括粒長、粒寬、粒厚以及籽粒長寬比，其中粒長、粒寬和粒厚對粒重的影響力達94.4％，因此，研究粒型相關性狀的遺傳規律，挖掘粒型調控的有利基因將有助于高產優質水稻新品種的培育。
2、水稻粒型是受多基因調控的，這些基因在12條染色體上均有分布，其中已被克隆的調控水稻粒長的主效基因有gs3、pgl1、pgl2、tgw6、gl7、glw7、gs2、gs9等，調控粒寬的主效基因有gw2、wtg1、gs6、gw5、gs5、gw7、gw8和tgw2等，這些基因所涉及的調控途徑包括泛素-蛋白酶體、g蛋白信號、植物激素調控、轉錄因子和表觀遺傳、mapk等途徑，這些途徑主要通過影響穎殼細胞的增殖和擴張來調控粒型。
3、目前雖已克隆了許多粒型的調控基因或qtls，確定了一些調控水稻粒型的關鍵信號途徑，但是粒型的調控網絡還遠不清楚，因此，需要不斷挖掘新的粒型調控基因，闡明其調控的分子機制，明確各基因的上下游關系，從而將不同的調控途徑逐步的建立聯系，不斷完善粒型調控網路，從而為水稻高產優質分子設計育種提供更加詳盡的理論參考。
技術實現思路
1、本專利技術提供了一
2、為達上述目的，本專利技術采用如下的技術方案：
3、gl6.1基因在調控水稻粒型中的應用，其是通過基因敲除或基因過表達來調控水稻粒型；所述gl6.1基因的核苷酸序列如seq?id?no.1所示，編碼區序列如seq?id?no.2所示，氨基酸序列如seq?id?no.3所示。
4、所述調控水稻粒型為調控水稻種子的粒長、粒寬、粒厚和千粒重。
5、所述基因敲除是以gl6.1為目的基因，采用crispr/cas9基因編輯系統，構建所述目的基因的敲除載體，轉化入水稻中，對水稻進行培育。
6、所述敲除載體為pylcrisprcas9pubi-h-gl6.1。
7、所述敲除載體pylcrisprcas9pubi-h-gl6.1的構建包括以下步驟：
8、選擇兩個靶點并設計導向rna；用t4連接酶將合成的導向rna鏈接到載體pylcrisprcas9pubi-h上，再將其轉化大腸桿菌，選擇菌落單克隆并提取質粒，然后測序進行驗證。
9、所述導向rna序列如seq?id?no.4、seq?id?no.5所示。
10、所述基因過表達是以gl6.1為目的基因，采用同源重組和golden?gate無縫克隆方法，構建所述目的基因的過表達載體，轉化入水稻中，對水稻進行培育。
11、所述基因過表達載體為pbwa(v)hs-gl6.1-glosgfp。
12、所述過表達載體pbwa(v)hs-gl6.1-glosgfp的構建包括以下步驟：
13、s1.針對gl6.1基因的dna序列設計上下游引物進行pcr擴增；
14、s2.擴增產物用bsai/eco31i酶切載體pbwa(v)hs-ccdb-glosgfp，并將載體酶切產物用pcr純化試劑盒純化，然后通過重組反應得融合gl6.1基因的重組質粒pbwa(v)hs-gl6.1-glosgfp。
15、所述上游引物如seq?id?no.6所示，下游引物如seq?id?no.7所示。
16、與現有技術相比，本專利技術具有如下有益效果：
17、本專利技術首次發現水稻gl6.1基因具有調控水稻粒長、粒寬、粒厚和千粒重等粒型性狀的作用，并且是一個新的粒型調控基因；并且發現gl6.1調控水稻粒型的途徑、表達模式和亞細胞定位；此外，還發現gl6.1在不同水稻中的進化關系。
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1.GL6.1基因在調控水稻粒型中的應用，其特征在于，其是通過基因敲除或基因過表達來調控水稻粒型；所述GL6.1基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示，編碼區序列如SEQ?IDNO.2所示，氨基酸序列如SEQ?ID?NO.3所示。
2.如權利要求1所述的應用，其特征在于，所述調控水稻粒型為調控水稻種子的粒長、粒寬、粒厚和千粒重。
3.如權利要求1所述的應用，其特征在于，所述基因敲除是以GL6.1為目的基因，采用CRISPR/Cas9基因編輯系統，構建所述目的基因的敲除載體，轉化入水稻中，對水稻進行培育。
4.如權利要求3所述的應用，其特征在于，所述敲除載體為
5.如權利要求4所述的應用，其特征在于，所述敲除載體pYLCRISPRCas9Pubi-H-GL6.1的構建包括以下步驟：
6.如權利要求5所述的應用，其特征在于，所述導向RNA序列如SEQ?ID?NO.4、SEQ?IDNO.5所示。
7.如權利要求1所述的應用，其特征在于，所述基因過表達是以GL6.1為目的基因，采用同源重組和golden?gat
8.如權利要求7所述的應用，其特征在于，所述基因過表達載體為pBWA(V)HS-GL6.1-GLosgfp。
9.如權利要求8所述的應用，其特征在于，所述過表達載體pBWA(V)HS-GL6.1-GLosgfp的構建包括以下步驟：
10.如權利要求9所述的應用，其特征在于，所述上游引物如SEQ?ID?NO.6所示，下游引物如SEQ?ID?NO.7所示。
...【技術特征摘要】
1.gl6.1基因在調控水稻粒型中的應用，其特征在于，其是通過基因敲除或基因過表達來調控水稻粒型；所述gl6.1基因的核苷酸序列如seq?id?no.1所示，編碼區序列如seq?idno.2所示，氨基酸序列如seq?id?no.3所示。
2.如權利要求1所述的應用，其特征在于，所述調控水稻粒型為調控水稻種子的粒長、粒寬、粒厚和千粒重。
3.如權利要求1所述的應用，其特征在于，所述基因敲除是以gl6.1為目的基因，采用crispr/cas9基因編輯系統，構建所述目的基因的敲除載體，轉化入水稻中，對水稻進行培育。
4.如權利要求3所述的應用，其特征在于，所述敲除載體為
5.如權利要求4所述的應用，其特征在于，所述敲除載體pylcrisprcas9pubi-h-gl6.1的構建包括...
【專利技術屬性】
技術研發人員：閆志強，鄧茹月，宮彥龍，李佳麗，張大雙，朱速松，
申請(專利權)人：貴州省水稻研究所，
類型：發明
國別省市：
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