【技術實現步驟摘要】
本申請涉及分子生物學，特別是涉及一種檢測tuba1c突變的試劑、試劑盒及其應用。
技術介紹
1、國際輔助生育技術監控委員會發布的報告顯示，自1978年以來，輔助生殖技術解決了全球800多萬例生育問題，促進了人口增長。但是到現在為止，仍有很大一部分婦女在輔助生殖技術的幫助下依舊不能懷孕。
2、目前，體外受精（ivf）/卵胞漿內單精子注射（icsi）技術的成功率約為30%~40%，大部分病人反復失敗的原因尚不明確。了解卵母細胞減數分裂成熟、受精及早期胚胎發育的關鍵事件、研究卵母細胞向胚胎轉變的機制，都是提高輔助生殖技術成功率的關鍵。
3、臨床上，可以通過對不孕患者的致病基因進行檢測，即基因診斷（genediagnosis）技術明確患者遺傳病因，進而選擇合適的輔助生殖助孕方式，保證生育健康后代。目前對于表型明確且致病基因已知的患者，主要通過pcr-sanger測序技術對單個基因外顯子區及其側翼序列進行基因檢測。而對于未明確致病基因突變的患者，目前首選采用包括全外顯子組測序在內的新一代測序技術，該技術具有檢測的通量高，可同時檢測基因組中所有的編碼基因。然而，據不完全統計，通過標準化的生物學信息學分析篩選候選致病變異并驗證陽性的患者比例仍不足10%。因此，明確致病基因并開發相應的輔助診斷試劑盒對于這類患者的生育治療具有重要的意義。
技術實現思路
1、基于此，本申請實施例提供了一種檢測tuba1c突變的試劑、試劑盒及其應用。技術方案包括：
2、根據本申請的第
3、在其中一個實施例中，所述試劑包括如下引物對中的一對或多對：
4、核苷酸序列如seq?id?no:1~2所示的引物對；以及
5、核苷酸序列如seq?id?no:3~4所示的引物對。
6、在其中一個實施例中，所述試劑通過如下方法中的一種或多種方法實現對突變的檢測：
7、普通pcr擴增法、測序法和實時熒光定量pcr法。
8、根據本申請的第二方面，提供了一種檢測tuba1c突變的試劑，所述試劑包括如下引物對中的一對或多對：
9、核苷酸序列如seq?id?no:1~2所示的引物對；以及
10、核苷酸序列如seq?id?no:3~4所示的引物對。
11、根據本申請的第三方面，提供了一種檢測tuba1c突變的試劑盒，所述試劑盒包括上述的試劑。
12、在其中一個實施例中，所述試劑盒還包括陰性對照品、陽性對照品、核酸提取試劑、pcr擴增試劑、測序試劑以及電泳檢測試劑中的一種或多種。
13、根據本申請的第四方面，提供了一種檢測tuba1c突變的方法，包括如下步驟：
14、以待測樣本的dna為模板，使用上述的試劑進行pcr擴增，得到擴增產物；及
15、對所述擴增產物進行分析，以確定所述待測樣本的dna中tuba1c的突變情況。
16、在其中一個實施例中，所述分析的步驟包括：
17、分析所述待測樣本的dna中tuba1c是否發生c.1072c>t突變和/或c.1330_1330del突變。
18、在其中一個實施例中，所述分析包括如下步驟：
19、對所述擴增產物進行測序，得到序列信息；以及
20、將所述序列信息與野生型tuba1c的mrna進行比對。
21、在其中一個實施例中，所述待測樣本包括外周血、唾液和毛發中的一種或多種。
22、與傳統技術相比，本申請具有如下有益效果：
23、本申請通過研究發現2例分別攜帶tuba1c?c.1072c>t突變和tuba1c?c.1330_1330del突變的早期胚胎發育阻滯患者，臨床上均表現為不孕。通過檢測上述突變位點，能夠為明確胚胎發育阻滯患者的遺傳病因提供新的思路，為臨床上選擇合適的助孕手段提供新的參考。
本文檔來自技高網...【技術保護點】
1.一種檢測TUBA1C突變的試劑在制備診斷胚胎發育阻滯的產品中的應用，其特征在于，所述試劑包括檢測c.1072C>T的試劑和檢測c.1330_1330del的試劑中的一種或多種。
2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述試劑包括如下引物對中的一對或多對：
3.根據權利要求1至2任一項所述的應用，其特征在于，所述試劑通過如下方法中的一種或多種方法實現對突變的檢測：
4.一種檢測TUBA1C突變的試劑，其特征在于，所述試劑包括如下引物對中的一對或多對：
5.一種檢測TUBA1C突變的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權利要求1~3任一項所述的試劑。
6.根據權利要求5所述的檢測TUBA1C突變的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括陰性對照品、陽性對照品、核酸提取試劑、PCR擴增試劑、測序試劑以及電泳檢測試劑中的一種或多種。
7.一種檢測TUBA1C突變的方法，其特征在于，包括如下步驟：
8.根據權利要求7所述的檢測TUBA1C突變的方法，其特征在于，所述分析的步驟包括：
9.
10.根據權利要求7~8任一項所述的檢測TUBA1C突變的方法，其特征在于，所述待測樣本包括外周血、唾液和毛發中的一種或多種。
...【技術特征摘要】
1.一種檢測tuba1c突變的試劑在制備診斷胚胎發育阻滯的產品中的應用，其特征在于，所述試劑包括檢測c.1072c>t的試劑和檢測c.1330_1330del的試劑中的一種或多種。
2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述試劑包括如下引物對中的一對或多對：
3.根據權利要求1至2任一項所述的應用，其特征在于，所述試劑通過如下方法中的一種或多種方法實現對突變的檢測：
4.一種檢測tuba1c突變的試劑，其特征在于，所述試劑包括如下引物對中的一對或多對：
5.一種檢測tuba1c突變的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權利要求1~3任一項所述的試劑。<...
【專利技術屬性】
技術研發人員：鄭偉，萬纖，胡慧玲，孫嘉琦，林戈，
申請(專利權)人：中信湘雅生殖與遺傳專科醫院有限公司，
類型：發明
國別省市：
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