一種石油烴氧化菌測試瓶的生產方法技術

本發明專利技術涉及一種石油烴氧化菌測試瓶的生產方法，屬應用微生物檢測方法技術領域，其特征在于在常溫下分別取氯化鈉（ＮａＣｌ）１．０％、磷酸二氫鉀（ＫＨ↓［２］ＰＯ↓［４］）０．２％、硝酸鉀（ＫＮＯ↓［３］）０．１５％、磷酸三鈉（Ｎａ↓［３］ＰＯ↓［４］）０．１％、蒸餾水（Ｈ↓［２］Ｏ）９８．５５％，然后依次用蒸餾水（Ｈ↓［２］Ｏ）將其溶解，并加入到容器中混合、充分搖勻，用酸液或堿液將溶液的ｐＨ值調節到７．５，配制成所需的培養液；將所配制的培養液按每瓶４．５ｍｌ裝入瓶中，再向瓶中加入０．２ｍｌ的白油，然后加蓋、封口、高溫滅菌、冷卻后即制成石油烴氧化菌測試瓶。本發明專利技術所述的一種石油烴氧化菌測試瓶的生產方法，生產過程簡單，可靠性強，經濟實用。應用該測試瓶能準確測定待測水樣中石油烴氧化菌菌數，提高工作效率。

Production method of test bottle for petroleum hydrocarbon oxidation bacteria

The invention relates to a production method of petroleum hydrocarbon oxidizing bacteria test bottle, which belongs to the technical field of application of microbial detection method, which is characterized in that at room temperature were obtained from sodium chloride (NaCl), 1% (2 KH potassium dihydrogen phosphate: PO: 4), 0.2% potassium nitrate (KNO: 3), 0.15% three sodium phosphate (Na: 3 PO: 4 - 0.1%), distilled water (H: 2 O 98.55%), and then with distilled water (H: 2 O) will be dissolved, and added to the container, fully mixed with acid or alkali and the solution the pH value is adjusted to 7.5, preparation of culture medium to culture medium; the preparation of the 4.5ml press the bottle into the bottle, then add 0.2ml to the white bottle, however After sealing, sealing, high-temperature sterilization and cooling, the test bottle for petroleum hydrocarbon oxidation bacteria is made. The invention relates to a method for producing an oil hydrocarbon oxidation bacteria test bottle, which has simple production process, strong reliability, and is economical and practical. The test bottle can be used to accurately measure the number of bacteria in petroleum hydrocarbon and the work efficiency.

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及，屬應用微生物檢測方 法

技術介紹
在科研和生產的實際工作中，常常需要對微生物的數量進行測定。如對 水體、空氣、土壤等環境中的微生物的測定可以監測和評價其污染程度；對 飲用水中的微生物的測定可以評價其是否達標；對菌劑產品進行微生物數量 的測定可判斷產品質量是否合格；對油田污水注水中的微生物數量的測定則 可以監測和評價污水注水的水質等。因此，微生物數量的測定對科研和生產 實際工作具有十分重要的指導作用和現實意義。傳統的微生物測定方法十分煩瑣、費時，工作效率低且不準確可靠。如 平板菌落計數法是根據每個活的細菌能長出一個菌落的原理設計的，取一定 體積的菌懸液，作一系列的倍比稀釋，然后將定量的稀釋液進行平板培養， 根據培養出的菌落數及稀釋倍數，計算出培養物中的活菌數。而絕跡稀釋法 是將待測定的水樣逐級注入到試管中進行接種稀釋，直到最后一個試管中無 菌生長為止，然后根據細菌生長情況和稀釋倍數，計算出水樣中細菌的數目。 這兩種方法都有明顯的不足，平板菌落計數法測定結果誤差較大，而絕跡稀 釋法操作極為繁瑣、費時。我國石油資源十分豐富，在石油微生物開采和石油污染生物處理中，石 油烴氧化菌具有十分重要的作用。在微生物采油科學研究、采油菌種產品量檢驗、微生物采油現場監測、本源微生物采油過程中，常常需要測定石油烴 氧化菌的菌數。石油烴氧化菌的存在與否及其數量多少，在很大程度上決定 著微生物采油成功與否和效果好壞。由此可見，準確測定石油烴氧化菌的菌 數是十分必要的，而現有的傳統測試技術和測試手段遠不能滿足實際生產的 要求。
技術實現思路
為了克服現有技術的不足，本專利技術的目的在于提供一種石油烴氧化菌測試 瓶的生產方法，使所生產的測試瓶能夠快速準確地測定石油烴氧化菌的菌數， 用于油氣勘探開發、尤其是石油微生物開采中石油烴氧化菌數量的測定。本專利技術是通過如下技術方案來實現上述目的的。在常溫下分別取氯化鈉(NaCl) 1.0 %、磷酸二氫鉀(KH2P04) 0.2 %、硝 酸鉀(跳)0.15 %、磷酸三鈉(Na3P04) 0.1 %、蒸餾水(H20) 98.55 %， 然后依次用蒸餾水(H20)將其溶解，并加入到容器中混合、充分搖勻，用酸 液或堿液將溶液的pH值調節到7.5，配制成培養液；將7ml模制西林瓶清洗 干凈、干燥，用液體分裝器將所配制的培養液按每瓶4.5ml裝入瓶中，再向 瓶中加入0.2ml的白油，然后加蓋、封口；將經加蓋封口的測試瓶用高溫蒸 汽滅菌鍋在12rC、 1.05Kg/cii^條件下進行高溫滅菌15分鐘，冷卻后即制成 石油烴氧化菌測試瓶。本專利技術與現有的技術相比具有如下有益效果-1、 本專利技術所述的，生產過程簡單， 可靠性強，經濟實用。2、 本專利技術所生產的石油烴氧化菌測試瓶能夠快速準確地測定石油烴氧化菌的菌數，操作使用簡單、結果直接準確。3、本專利技術所生產的石油烴氧化菌測試瓶中只有白油為微生物生長的唯一 碳源，所培養出的微生物只是以白油為唯一碳源的石油烴氧化菌，測試工作 不會受到其它微生物的干擾。 具體實施例方式在常溫下(以配制1L培養液為例，以此類推)，分別稱取氯化鈉(NaCl) 10.0g、磷酸二氫鉀(歸04) 2.0g、硝酸鉀(跳)1.5g、磷酸三鈉(Na3P04) l.Og，然后依次用蒸餾水(H20)將其溶解，并加入到1L容量瓶中混合、再用 蒸餾水(H20)定容到1L刻度線，充分搖勻，用酸液或堿液將溶液的pH值調 節到7.5，即配制成石油烴氧化菌測試瓶所需的培養液。將7ml模制西林瓶清 洗干凈、干燥，用液體分裝器將所配制的培養液按每瓶4.5ml裝入瓶中，再 向瓶中加入0.2ml的白油，然后用A-13型藥用膠塞加蓋，用普通抗生素玻璃 瓶鋁蓋經專用封口器封口，最后用高溫蒸汽滅菌鍋在12rC、 1.05Kg/cm條件 下將測試瓶集中進行高溫滅菌15分鐘，冷卻后即制成石油烴氧化菌測試瓶。采用石油烴氧化菌測試瓶測定待測水樣中的石油烴氧化菌的菌數時，系 采用絕跡稀釋法原理，將待測水樣用無菌注射器逐級注入測試瓶中稀釋培養， 直到最后一個測試瓶無菌生長為止，根據稀釋的倍數計算出待測水樣中細菌 的數目。可采用以下的方法和步驟(1) 準備數支相同的lml醫用注射器，用蒸餾水(H20)清洗干凈后高溫 滅菌(高壓蒸汽滅菌鍋12rC、 1.05Kg/cii^下滅菌15分鐘)，冷卻備用。(2) 根據待測水樣中石油烴氧化菌的大致多少，將數個上述的石油烴氧 化菌測試瓶排成一組，并依次編上序號l、 2、 3、 4……。(3) 用上述滅菌后的無菌注射器取0. 5mL待測水樣并注入到1號石油烴 氧化菌測試瓶內，充分震蕩10秒。(4) 另取一支無菌注射器從搖勻后的1號石油烴氧化菌測試瓶內取出 0. 5mL液體注入到2號石油烴氧化菌測試瓶內，充分震蕩10秒。(5) 再另取一支無菌注射器從搖勻后的2號石油烴氧化菌測試瓶內取出 0. 5mL液體注入到3號石油烴氧化菌測試瓶內，充分震蕩10秒。(6) 依次重復上述操作程序， 一直到最后一ii:為止。(7) 把上述加入待測水樣后的一組石油烴氧化菌測試瓶放在30°C (或 現場溫度)培養箱內培養，經過7天后觀察測試瓶內的變化，判斷細菌的生 長情況。(8) 判斷標準無菌存在的石油烴氧化菌測試瓶內的培養液無變化，而 有菌存在的石油烴氧化菌測試瓶內的培養液則出現明顯渾濁乳化現象，因此， 石油烴氧化菌測試瓶中的培養液出現明顯渾濁乳化現象的，表示有石油烴氧 化菌生長。(9) 根據石油烴氧化菌測試瓶內指示細菌生長的情況和有菌生長的測試 瓶的瓶數，査表1可計算出待測水樣中的石油烴氧化菌菌數。表l單瓶細菌最大可能值有菌生長測試瓶數菌數/個mL'111—10210—1003100—100041000—10000<table>table see original document page 7</column></row><table>本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種石油烴氧化菌測試瓶的生產方法，其特征在于在瓶內加入由蒸餾水（Ｈ↓［２］Ｏ）、氯化鈉（ＮａＣｌ）、磷酸二氫鉀（ＫＨ↓［２］ＰＯ↓［４］）、硝酸鉀（ＫＮＯ↓［３］）、磷酸三鈉（Ｎａ↓［３］ＰＯ↓［４］）等組成的培養液和白油，經加蓋封口、高溫蒸汽滅菌完成。

【技術特征摘要】
1、一種石油烴氧化菌測試瓶的生產方法，其特征在于在瓶內加入由蒸餾水(H2O)、氯化鈉(NaCl)、磷酸二氫鉀(KH2PO4)、硝酸鉀(KNO3)、磷酸三鈉(Na3PO4)等組成的培養液和白油，經加蓋封口、高溫蒸汽滅菌完成。2、 根據權利要求1所述的一種石油烴氧化菌測試瓶的生產方法，其特征 在于在常溫下分別取氯化鈉(NaCl) 1.0 %、磷酸二氫鉀(KH2P04) 0.2 %、硝 酸鉀(認03) 0. 15 %、磷酸三鈉(Na3P04) 0. 1 %、蒸餾水(H20) 98.55 %, 然后依...

【專利技術屬性】
技術研發人員：易紹金，
申請(專利權)人：長江大學，
類型：發明
國別省市：42[中國|湖北]