【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及生物醫(yī)藥，尤其涉及一種cdk4/6小分子熒光探針及其制備方法和應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、本專利技術(shù)
技術(shù)介紹
中公開的信息僅僅旨在增加對本專利技術(shù)的總體背景的理解，而不必然被視為承認或以任何形式暗示該信息構(gòu)成已經(jīng)成為本領(lǐng)域一般技術(shù)人員所公知的現(xiàn)有技術(shù)。
2、細胞周期由四個階段組成：s期(主要為dna復(fù)制)，m期(主要為有絲分裂)以及s和m之間的兩個間隙(g1和g2)。在非增殖細胞中也存在一種名為g0的靜止?fàn)顟B(tài)。細胞周期受到各種特定的蛋白質(zhì)的控制和調(diào)節(jié)，例如：細胞周期蛋白依賴性激酶(cdk)、細胞周期蛋白和視網(wǎng)膜母細胞瘤蛋白(prb)。細胞周期蛋白依賴性激酶(cdk)是一類絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶家族，cdk的失調(diào)會導(dǎo)致細胞周期失衡和無限的細胞增殖，從而促進惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。cdk與其相應(yīng)的細胞周期蛋白結(jié)合并形成功能性異二聚體復(fù)合物。到目前為止，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了20種cdks和29個細胞周期蛋白。cdk包括細胞周期相關(guān)的cdk(cdk1、cdk2、cdk4和cdk6)和轉(zhuǎn)錄cdk(cdk7-9、cdk11-13、cdk19)。根據(jù)其功能不同可分為兩個亞家族：cdks?1–6、11和14-18用于調(diào)節(jié)細胞周期，cdk?7-13、19和20用于轉(zhuǎn)錄。cdk的活化由與其調(diào)節(jié)亞基(細胞周期蛋白)和磷酸化抑制蛋白的關(guān)聯(lián)控制。cdk4當(dāng)通過磷酸化prb與細胞周期蛋白d配位時，與其密切相關(guān)的cdk6在從g1到s的過渡中起著至關(guān)重要的作用，prb以未磷酸化狀態(tài)來抑制g1期到s期的過渡。細胞周期蛋白d-的畸變cdk4/6-ink4-p
3、cdk抑制劑的研究中，一個重要的課題是涉及cdk4/6抑制劑的(用于治療不同的腫瘤類型)組合治療方案的測試和鑒定。cdk4/6抑制劑觸發(fā)腫瘤細胞的細胞周期停滯，在某些情況下，能夠觸發(fā)衰老。其中，palbociclib(帕博西林)是一種cdk4/6的特異性抑制劑，近年來已成為治療乳腺癌，特別是雌激素受體陽性乳腺癌的明星藥物。確定將cdk4/6抑制劑從細胞抑制化合物轉(zhuǎn)化為細胞毒性化合物并釋放腫瘤細胞殺傷的聯(lián)合治療至關(guān)重要。全基因組高通量篩選以及對小鼠癌癥模型和pdx的分析將有助于解決這個問題。細胞周期蛋白d-cdk4/6生物學(xué)的另一個尚未開發(fā)的領(lǐng)域是這些蛋白質(zhì)可能參與其他病理發(fā)生，如代謝紊亂。該領(lǐng)域的研究可能會將cdk4/6抑制劑的使用擴展到其他疾病的治療。這些問題確保了cdk4/6生物學(xué)在未來幾年內(nèi)仍將是基礎(chǔ)、轉(zhuǎn)化和臨床研究的活躍領(lǐng)域。
4、小分子熒光探針具有快速、靈敏、高通量和易于自動化等特點，在蛋白標(biāo)記與成像技術(shù)中有著重要的應(yīng)用。目前小分子熒光探針已經(jīng)廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)、核酸等重要生物分子的生物學(xué)和藥理學(xué)檢測中，對疾病機制探討、臨床診斷及藥物篩選等領(lǐng)域的發(fā)展具有重要的意義。但是能夠?qū)Ｒ坏嘏c目標(biāo)蛋白結(jié)合的小分子探針種類仍然較少，主要因素是設(shè)計和合成方法的缺乏。特別是，目前還沒有用于研究cdk4/6蛋白間相互作用的小分子熒光探針。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、基于現(xiàn)有技術(shù)的不足，本專利技術(shù)提供了一種cdk4/6小分子熒光探針及其制備方法和應(yīng)用，該探針可以特異性結(jié)合cdk4/6蛋白；應(yīng)用此小分子探針，能夠更深入了解cdk4/6蛋白間的作用機制及發(fā)現(xiàn)更有效的抑制劑。
2、為了實現(xiàn)上述目的，本專利技術(shù)的技術(shù)方案為：
3、第一方面，一種cdk4/6小分子熒光探針，具有式(i)所示結(jié)構(gòu)：
4、
5、其中，r1選自如下結(jié)構(gòu)中的任意一種：
6、或者n＝1、2、3或5。
7、第二方面，一種cdk4/6小分子熒光探針，具有式(i)所示結(jié)構(gòu)：
8、
9、其中，r1選自如下結(jié)構(gòu)中的任意一種：
10、或者
11、m＝1或2。
12、第三方面，上述cdk4/6小分子熒光探針的制備方法，包括如下步驟：
13、將palbociclib與式(ii)所示化合物進行酰胺化反應(yīng)，生成式(iii)所示化合物，將式(iii)所示化合物脫保護基后與丹磺酰氯進行酰胺縮合反應(yīng)，即得式(i)所示化合物；
14、n＝1、2、3或5，式(ii)；
15、n＝1、2、3或5，式(iii)；
16、或者，將palbociclib與3-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙氧基)丙酸進行酰胺化反應(yīng)，生成化合物，將生成的所述化合物脫保護基后與丹磺酰氯進行酰胺縮合反應(yīng)，即得式(i)所示化合物；
17、或者，7-(二乙氨基)-2-氧代-2h-色酮-3-羧酸與硫酰氯反應(yīng)生成羧酸衍生物，然后與式(iii)所示化合物通過親核取代反應(yīng)得到式(i)所示化合物；
18、或者，4-(3-苯氧基丙基)-1,3-二氧雜環(huán)己-2-烯-2-酮與氯磺酸通過磺化反應(yīng)得到中間體，中間體經(jīng)過酰胺化反應(yīng)，再與式(iii)所示化合物通過親核取代反應(yīng)得到式(i)所示化合物；
19、或者，4-(1,2,2-三苯基乙烯基)苯甲酸與式(iii)所示化合物通過酰胺縮合反應(yīng)生成式(i)所示化合物；
20、或者，4-氯-7-硝基苯并[c][1,2,5]噁二唑與式(iii)所示化合物通過酰胺縮合反應(yīng)生成式(i)所示化合物；
21、或者，式(iv)所示化合物經(jīng)過鹵代反應(yīng)后，再與2,3,3-三甲基吲哚反應(yīng)，反應(yīng)產(chǎn)物與式(v)所示化合物反應(yīng)后，與式(iii)所示化合物或者palbociclib經(jīng)過酰胺縮合反應(yīng)生成式(i)所示化合物；式(v)所示化合物為2,3,3-三甲基吲哚經(jīng)烷基化獲得；
22、n＝1或2，式(iv)；
23、可選的，式(ii)所示化合物在diea和hatu存在的條件下，與palbociclib反應(yīng)生成式(iii)所示化合物，式(iii)所示化合物與三氟乙酸反應(yīng)脫保護基，之后在diea的條件下與丹磺酰氯進行酰胺縮合反應(yīng)，生成式(i)所示化合物。
24、可選的，7-(二乙氨基)-2-氧代-2h-色酮-3-羧酸在氮氣保護下加入socl2，加入dmf反應(yīng)得羧酸衍生物，將羧酸衍生物依次加入diea和hatu進行反應(yīng)，再加入式(iii)所示化合物進行親核取代反應(yīng)，生成式(i)所示化合物。
25、可選的，4-(3-苯氧基丙基)-1,3-二氧雜環(huán)己-2-烯-2-酮在冰浴條件下加入氯磺酸，之后加熱回流獲得中間體，將中間體在冰浴條件下加入三乙胺反應(yīng)，之后加入鹽酸二甲胺反應(yīng)，加入n,n-二異丙基乙胺反應(yīng)后，再加入式(iii)所示化合物進行親核取代反應(yīng)，生成式(i)所示化合物。
26、可選的，4-(1,2,2-三苯基乙烯基)苯甲酸中依次加入n,n-二異丙基乙胺、hatu反應(yīng)，之后與式(iii)所示化合物進行親核取代反應(yīng)，生成式(本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護點】
1.一種CDK4/6小分子熒光探針，其特征在于，具有式(I)所示結(jié)構(gòu)：
2.一種CDK4/6小分子熒光探針，其特征在于，具有式(I)所示結(jié)構(gòu)：
3.一種如權(quán)利要求1或2所述的CDK4/6小分子熒光探針的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
4.如權(quán)利要求3所述的CDK4/6小分子熒光探針的制備方法，其特征在于，式(II)所示化合物在DIEA和HATU存在的條件下，與Palbociclib反應(yīng)生成式(III)所示化合物，式(III)所示化合物與三氟乙酸反應(yīng)脫保護基，之后在DIEA的條件下與丹磺酰氯進行酰胺縮合反應(yīng)，生成式(I)所示化合物。
5.如權(quán)利要求3所述的CDK4/6小分子熒光探針的制備方法，其特征在于，7-(二乙氨基)-2-氧代-2H-色酮-3-羧酸在氮氣保護下加入SOCl2，加入DMF反應(yīng)得羧酸衍生物，將羧酸衍生物依次加入DIEA和HATU進行反應(yīng)，再加入式(III)所示化合物進行親核取代反應(yīng)，生成式(I)所示化合物。
6.如權(quán)利要求3所述的CDK4/6小分子熒光探針的制備方法，其特征在于，4-(3-苯氧基丙基)
7.如權(quán)利要求3所述的CDK4/6小分子熒光探針的制備方法，其特征在于，4-(1,2,2-三苯基乙烯基)苯甲酸中依次加入N,N-二異丙基乙胺、HATU反應(yīng)，之后與式(III)所示化合物進行親核取代反應(yīng)，生成式(I)所示化合物。
8.如權(quán)利要求3所述的CDK4/6小分子熒光探針的制備方法，其特征在于，4-氯-7-硝基苯并[c][1,2,5]噁二唑加入N,N-二異丙基乙胺反應(yīng)后，與式(III)所示化合物進行親核取代反應(yīng)，生成式(I)所示化合物；
9.一種如權(quán)利要求1～2任一所述的CDK4/6小分子熒光探針和/或如權(quán)利要求3-8任一所述的CDK4/6小分子熒光探針的制備方法制備獲得的CDK4/6小分子熒光探針的應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用包括：在識別CDK4/6蛋白方面和/或制備識別CDK4/6蛋白產(chǎn)品的應(yīng)用。
10.一種如權(quán)利要求1所述的CDK4/6小分子熒光探針和/或如權(quán)利要求3-8任一所述的CDK4/6小分子熒光探針的制備方法制備獲得的CDK4/6小分子熒光探針的應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用包括：在細胞周期阻滯和/或制備細胞周期阻滯產(chǎn)品中的應(yīng)用；
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種cdk4/6小分子熒光探針，其特征在于，具有式(i)所示結(jié)構(gòu)：
2.一種cdk4/6小分子熒光探針，其特征在于，具有式(i)所示結(jié)構(gòu)：
3.一種如權(quán)利要求1或2所述的cdk4/6小分子熒光探針的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
4.如權(quán)利要求3所述的cdk4/6小分子熒光探針的制備方法，其特征在于，式(ii)所示化合物在diea和hatu存在的條件下，與palbociclib反應(yīng)生成式(iii)所示化合物，式(iii)所示化合物與三氟乙酸反應(yīng)脫保護基，之后在diea的條件下與丹磺酰氯進行酰胺縮合反應(yīng)，生成式(i)所示化合物。
5.如權(quán)利要求3所述的cdk4/6小分子熒光探針的制備方法，其特征在于，7-(二乙氨基)-2-氧代-2h-色酮-3-羧酸在氮氣保護下加入socl2，加入dmf反應(yīng)得羧酸衍生物，將羧酸衍生物依次加入diea和hatu進行反應(yīng)，再加入式(iii)所示化合物進行親核取代反應(yīng)，生成式(i)所示化合物。
6.如權(quán)利要求3所述的cdk4/6小分子熒光探針的制備方法，其特征在于，4-(3-苯氧基丙基)-1,3-二氧雜環(huán)己-2-烯-2-酮在冰浴條件下加入氯磺酸，之后加熱回流獲得中間體，將中間體在冰浴條件下加入三乙胺反應(yīng)，之后加入鹽...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：劉婷婷，高玉祺，張潔，齊士翔，
申請(專利權(quán))人：山東第一醫(yī)科大學(xué)山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院，
類型：發(fā)明
國別省市：
還沒有人留言評論。發(fā)表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。