【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于食品安全，具體涉及治療致病性大腸桿菌感染的噬菌體組合物及制備方法和應用。
技術介紹
1、大腸桿菌是人類和動物胃腸道中最常見的共生菌，也是最重要的病原體，當外界環境對機體造成影響時，養殖場內因致病性大腸桿菌導致經濟動物出現腹瀉、腦膜炎等疾病的現象越來越多，給養殖業帶來了巨大的損失。目前，針對腸致病性大腸桿菌的主要防治措施是使用抗生素，但由于抗生素的大量使用，耐藥問題十分突出。對替代抗生素的需求不斷增加，因此，迫切需要開發出一種替代抗生素的新型殺菌方法。
2、噬菌體療法利用細菌性病毒或噬菌體靶向和破壞不同感染部位的細菌。生物技術的最新進展實現了對現有的噬菌體文庫的快速擴展，從而產生能夠靶向和破壞感興趣的細菌的強力且特異性的噬菌體。致病性大腸桿菌能引起各種動物腹瀉。此外，有些致病性大腸桿菌菌株具有抗生素抗性，增大了治療大腸桿菌相關慢性感染的難度。能夠繞過傳統的抗生素抗性機制、避免傳統小分子療法的毒副作用以及能夠有效對抗生物膜的噬菌體治療方法尤其具有吸引力。
3、噬菌體是特異感染目標細菌并進行自我復制的一類病毒，烈性噬菌體具有宿主細菌特異性、自我復制、裂解能力強、對動植物沒有毒性、環境友好和易于生產等優點，因此噬菌體療法在細菌性病害的生物防治中具有巨大潛力。大多數噬菌體的宿主譜較為狹窄，只能感染一個或者幾個菌株；所以單一噬菌體制劑的使用會限制防治效果，且容易導致抗性菌的產生。
技術實現思路
1、本專利技術的目的在于提供治療致病性大腸桿菌感染的噬菌體組合
2、本專利技術提供了對致病性大腸桿菌具有裂解作用的噬菌體，所述噬菌體包括以下至少一種：ecp2301、ecp2304和ecp2307；
3、其中ecp2301的保藏編號為cctcc?no:m?20241608，ecp2304的保藏編號為cctccno:m?20241609，ecp2307的保藏編號為cctcc?no:m?20241610。
4、優選的，所述致病性大腸桿菌包括以下至少一種：mq220627、mq1和ys220605；
5、其中mq220627的保藏編號為cctcc?no:m?20241664，mq1的保藏編號為cctcc?no:m20241665，ys220605的保藏編號為cctcc?no:m?20241666。
6、本專利技術提供了一組治療致病性大腸桿菌感染的噬菌體組合物，包括以下至少兩種噬菌體：ecp2301、ecp2304和ecp2307；
7、其中ecp2301的保藏編號為cctcc?no:m?20241608，ecp2304的保藏編號為cctccno:m?20241609，ecp2307的保藏編號為cctcc?no:m?20241610。
8、優選的，所述致病性大腸桿菌包括以下至少一種：mq220627、xmcs2207-5、mq1和ys220605；
9、其中mq220627的保藏編號為cctcc?no:m?20241664，mq1的保藏編號為cctcc?no:m20241665，ys220605的保藏編號為cctcc?no:m?20241666。
10、本專利技術提供了上述噬菌體或上述噬菌體組合物在制備體外抑制大腸桿菌感染的藥物中的應用。
11、本專利技術還提供了上述噬菌體或上述噬菌體組合物在作為食品致病性大腸桿菌清除劑中的應用。
12、優選的，所述食品包括奶制品或肉制品。
13、本專利技術提供了上述噬菌體組合物的制備方法，包括以下步驟：(1)將噬菌體ecp2301、ecp2304和ecp2307分別在大腸桿菌培養液中培養，得培養液；
14、(2)將步驟(1)所述培養液離心后，取含噬菌體的上清液進行不同梯度的稀釋，將各稀釋液與大腸桿菌培養液中混合孵育，然后倒制雙層平板后培養，統計噬菌斑計算得到3株噬菌體的效價；
15、(3)將3株噬菌體的效價稀釋調節至(1.0±0.5)×109pfu/ml，取稀釋后的噬菌體液混合后，獲得所述噬菌體組合物。
16、優選的，步驟(3)所述稀釋后的噬菌體液混合比例為1:1:1。
17、本專利技術還提供了一種清除食品中致病性大腸桿菌的方法，包括以下步驟：將食品樣品與上述噬菌體組合物或利用上述制備方法制備得到的噬菌體組合物混合，15～35℃作用2h，得清除致病性大腸桿菌的食品。
18、有益效果：本專利技術提供了對致病性大腸桿菌具有裂解作用的噬菌體，所述噬菌體包括ecp2301、ecp2304和ecp2307，所述噬菌體組合物的宿主菌分別為致病性大腸桿菌mq220627、mq1和ys220605，且對所述致病性大腸桿菌宿主菌具有重要的抑菌作用。經實施例驗證，本專利技術所述的噬菌體組合物中的5種噬菌體分別對大腸桿菌mq220627、mq1和ys220605均有較強的裂解性，并且將3種噬菌體混合后，發現噬菌體之間存在協同作用，較之于單個噬菌體具有更高效的抑制作用，可將其用做牛奶和肉的致病性大腸桿菌清除劑，均具備良好的效果。
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1.對致病性大腸桿菌具有裂解作用的噬菌體(Bacteriophage)，其特征在于，所述噬菌體包括以下至少一種：ECP2301、ECP2304和ECP2307；
2.根據權利要求1所述噬菌體，其特征在于，所述致病性大腸桿菌(Escherichia?coli)包括以下至少一種：MQ220627、MQ1和YS220605；
3.一組治療致病性大腸桿菌感染的噬菌體組合物，其特征在于，包括以下至少兩種噬菌體：ECP2301、ECP2304和ECP2307；
4.根據權利要求3所述噬菌體組合物，其特征在于，所述致病性大腸桿菌包括以下至少一種：MQ220627、MQ1和YS220605；
5.權利要求1或2所述噬菌體或權利要求3或4所述噬菌體組合物在制備體外抑制大腸桿菌感染的藥物中的應用。
6.權利要求1或2所述噬菌體或權利要求3或4所述噬菌體組合物在作為食品致病性大腸桿菌清除劑中的應用。
7.根據權利要求6所述應用，其特征在于，所述食品包括奶制品或肉制品。
8.權利要求3或4所述噬菌體組合物的制備方法，其特
9.根據權利要求8所述制備方法，其特征在于，步驟(3)所述稀釋后的噬菌體液混合比例為1:1:1。
10.一種清除食品中致病性大腸桿菌的方法，其特征在于，包括以下步驟：將食品樣品與權利要求3或4所述噬菌體組合物或利用權利要求8或9所述制備方法制備得到的噬菌體組合物混合，15～35℃條件下作用2h，得清除致病性大腸桿菌的食品。
...【技術特征摘要】
1.對致病性大腸桿菌具有裂解作用的噬菌體(bacteriophage)，其特征在于，所述噬菌體包括以下至少一種：ecp2301、ecp2304和ecp2307；
2.根據權利要求1所述噬菌體，其特征在于，所述致病性大腸桿菌(escherichia?coli)包括以下至少一種：mq220627、mq1和ys220605；
3.一組治療致病性大腸桿菌感染的噬菌體組合物，其特征在于，包括以下至少兩種噬菌體：ecp2301、ecp2304和ecp2307；
4.根據權利要求3所述噬菌體組合物，其特征在于，所述致病性大腸桿菌包括以下至少一種：mq220627、mq1和ys220605；
5.權利要求1或2所述噬菌體或權利要求3或4所述噬菌體組合物在制備體外抑制大腸桿菌感染的藥物中的應用...
【專利技術屬性】
技術研發人員：韓生義，李生慶，李淑萍，胡國元，高瑞，
申請(專利權)人：青海大學，
類型：發明
國別省市：
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