【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及一種單克隆抗體檢測板、檢測試劑盒和一種單克隆抗體的高效篩選方法，屬于生物工程。
技術介紹
1、雜交瘤技術(hybridoma?technique)，即淋巴細胞雜交瘤技術，又稱單克隆抗體技術，其是在體細胞融合技術基礎上發展起來的。georges?kohler和cesar?milstein兩位科學家發現，在體外將小鼠骨髓瘤細胞和免疫后小鼠脾細胞進行細胞的融合，形成的雜交瘤細胞既有骨髓瘤細胞無限繁殖的特性，又具有抗體形成細胞的合成和分泌特異性抗體的特點。而單克隆抗體則是由一個雜交瘤細胞增殖分泌的抗體，具有高度均一、僅針對某一特定抗原表位的優勢，目前雜交瘤技術是制備單克隆抗體的主要方法。
2、雜交瘤技術的簡要過程如下：小鼠骨髓瘤細胞與小鼠的脾臟細胞(主要是b淋巴細胞)融合，將融合后的細胞鋪板，加入hat選擇性培養基(一種骨髓瘤缺陷培養基)篩選，骨髓瘤細胞無法存活，而脾臟細胞在體外條件下也只能存活7-10天。最終使得只有融合了淋巴細胞的骨髓瘤細胞(即雜交瘤細胞)存活。此時，當克隆長到一定大小后，即上清中富集的抗體滿足篩選的過程時，即進行雜交瘤的篩選工作。通常是使用elisa的方式，篩選具有結合特異性抗原的雜交瘤細胞株。但大多數情況下，所得到的細胞株均為混合的細胞株，需要進一步篩選培養獲得單克隆細胞株。此時標準的進一步篩選方法為有限稀釋法(limiteddilution)，該方法操作簡單易行，無需其他設備輔助，但是其篩選過耗時且工作量巨大，而且在亞克隆的過程中，有可能將陽性細胞株丟失。
3、為了克服傳統
技術實現思路
1、本專利技術的第一個目的是提供一種單克隆抗體的檢測板，為現有技術單克隆抗體的篩選提供一種高效的篩選工具。
2、本專利技術的第二個目的是提供一種單克隆抗體的檢測試劑盒，為現有技術單克隆抗體的篩選提供一種高效的篩選工具。
3、本專利技術的第三個目的是提供一種單克隆抗體的高效篩選方法，以解決現有技術中在單克隆抗體篩選過程中效率較低的問題。
4、為了實現上述目的，本專利技術的一種單克隆抗體的檢測板的技術方案是：
5、一種單克隆抗體的檢測板，所述檢測板包括包被在檢測板上的spycatcher蛋白和與spycatcher蛋白偶聯的spytag；所述spytag連接有抗原蛋白。
6、上述方案的有益效果在于：本專利技術的單克隆抗體的檢測板為開拓性專利技術。本專利技術經過大量的調研和實驗發現，利用spycatcher/spytag產生的肽-蛋白質的化學反應將抗原蛋白固定在elisa板，能使抗原蛋白與底板保持一定距離，從而抗原表位充分暴露。進而使得抗體與抗原結合不受elisa板底的影響，并與elisa底板保持一定距離，同時保留了抗原的完整構象，從而將抗原表位充分暴露出來，提高抗體篩選效率。
7、具體地，所述檢測板為本領域常用的細胞培養檢測板，如elisa板等。
8、作為進一步地改進，所述spycatcher蛋白的氨基酸序列為seq?id?no.1時，所述spytag的氨基酸序列為seq?id?no.4；所述spycatcher蛋白的氨基酸序列為seq?id?no.2時，所述spytag的氨基酸序列為seq?id?no.5；所述spycatcher蛋白的氨基酸序列為seq?idno.3時，所述spytag的氨基酸序列為seq?id?no.6。
9、為了實現上述目的，本專利技術的一種單克隆抗體的檢測試劑盒的技術方案是：
10、一種單克隆抗體的檢測試劑盒，所述試劑盒包括檢測板、spycatcher蛋白、包被緩沖液、連接有spytag的抗原蛋白、偶聯緩沖液；所述抗原蛋白與單克隆抗體特異性結合。
11、上述方案的有益效果在于：本專利技術的單克隆抗體的檢測試劑盒利用spycatcher/spytag產生的肽-蛋白質的化學反應將抗原蛋白固定在elisa板，可以使得抗體與抗原結合不受elisa板底的影響，并與elisa底板保持一定距離，同時保留了抗原的完整構象，能顯著提高單克隆抗體的篩選數量。
12、具體地，所述檢測板為本領域常用的細胞培養檢測板，如elisa板等。
13、進一步具體地，在實際操作用，先將spycatcher蛋白包被在檢測板上，然后加入連接有spytag的抗原蛋白，通過spycatcher蛋白和spytag產生的肽-蛋白質的化學反應將抗原蛋白間接地固定在elisa板上。
14、具體地，所述連接可以采用linker將spytag與抗原蛋白進行串聯，linker為本領域常規的，可以為柔性linker，具體序列根據實際情況進行選擇。
15、作為進一步地改進，所述包被緩沖液包括磷酸鹽緩沖液或tris鹽酸緩沖液；所述偶聯緩沖液包括磷酸鹽緩沖液或tris鹽酸緩沖液。
16、作為進一步地改進，所述spycatcher蛋白的氨基酸序列為seq?id?no.1時，所述spytag的氨基酸序列為seq?id?no.4；所述spycatcher蛋白的氨基酸序列為seq?id?no.2時，所述spytag的氨基酸序列為seq?id?no.5；所述spycatcher蛋白的氨基酸序列為seq?idno.3時，所述spytag的氨基酸序列為seq?id?no.6。
17、為了實現上述目的，本專利技術的一種單克隆抗體的高效篩選方法的技術方案是：
18、一種單克隆抗體的高效篩選方法，將含有單克隆抗體的液體加入到檢測板中進行elisa篩選；所述檢測板包被有spycatcher蛋白；所述spycatcher蛋白與連接有抗原蛋白的spytag偶聯。
19、上述方案的有益效果在于：本專利技術單克隆抗體的高效篩選方法，利用spycatcher蛋白和spytag產生的肽-蛋白質的化學反應將抗原蛋白間接地固定在elisa板上，使抗原蛋白離檢測板底部有一定的距離，保持抗原的表位完整，能有效解決雜交瘤篩選過程中抗原包被導致表位被覆蓋而影響抗體結合的問題，對后續藥物抗體篩選和開發提供便利，而且能夠篩選多種類抗體，尤其是構象表位抗體。同時使得抗體與抗原結合不受elisa板底的影響，減少重復篩選的工作量，且整體操作容易，短時高效。
20、作為進一步地改進，所述含有本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種單克隆抗體的檢測板，其特征在于：所述檢測板包括包被在檢測板上的SpyCatcher蛋白和與SpyCatcher蛋白偶聯的Spytag；所述Spytag連接有抗原蛋白。
2.根據權利要求1所述的單克隆抗體的檢測板，其特征在于：所述SpyCatcher蛋白的氨基酸序列為SEQ?ID?No.1時，所述Spytag的氨基酸序列為SEQ?ID?No.4；所述SpyCatcher蛋白的氨基酸序列為SEQ?ID?No.2時，所述Spytag的氨基酸序列為SEQ?ID?No.5；所述SpyCatcher蛋白的氨基酸序列為SEQ?ID?No.3時，所述Spytag的氨基酸序列為SEQ?IDNo.6。
3.一種單克隆抗體的檢測試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包括檢測板、SpyCatcher蛋白、包被緩沖液、連接有Spytag的抗原蛋白、偶聯緩沖液；所述抗原蛋白與單克隆抗體特異性結合。
4.根據權利要求3所述的單克隆抗體的檢測試劑盒，其特征在于：所述包被緩沖液包括磷酸鹽緩沖液或Tris鹽酸緩沖液；所述偶聯緩沖液包括磷酸鹽緩沖液或Tris鹽酸緩沖液。
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