【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本申請(qǐng)涉及生物，具體涉及一種c-met靶向的核酸適體偶聯(lián)藥物。
技術(shù)介紹
1、核酸適體是一種類似抗體的，能夠特異性結(jié)合靶蛋白的寡核苷酸序列。核酸適體可化學(xué)合成，與抗體相比更易修飾且更穩(wěn)定，具有更小的尺寸和機(jī)體免疫反應(yīng)，因此在腫瘤的診斷與治療中具有廣泛的應(yīng)用。將藥物分子與核酸適體偶聯(lián)能夠提高藥物分子的水溶性及在腫瘤細(xì)胞中的富集，降低藥物分子對(duì)正常細(xì)胞的毒副作用，實(shí)現(xiàn)藥物分子的靶向遞送。
2、c-met是一種由c-met原癌基因編碼的蛋白(uniprot?id：p08581)，被稱作肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體，具有酪氨酸激酶活性，與多種癌基因產(chǎn)物和調(diào)節(jié)蛋白相關(guān)，參與細(xì)胞信息傳導(dǎo)、細(xì)胞骨架重排的調(diào)控，是細(xì)胞增殖、分化和運(yùn)動(dòng)的重要因素。目前認(rèn)為，c-met與多種癌癥的發(fā)生及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，研究表明，肺癌、胃癌、肝癌、乳腺癌、皮膚癌、大腸癌等多種腫瘤患者在其腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移過程中均有c-met過表達(dá)和基因擴(kuò)增。因此，c-met被認(rèn)為是多種腫瘤的有效靶點(diǎn)，目前已有多個(gè)針對(duì)c-met靶向藥物進(jìn)入臨床階段。發(fā)展以c-met為靶點(diǎn)的靶向藥物有望成為治療肺癌、胃癌、肝癌等惡性腫瘤的廣譜型靶向藥物。
3、已知的核酸適體sl1是由以細(xì)胞為靶標(biāo)的指數(shù)富集配基系統(tǒng)進(jìn)化技術(shù)(cell-selex)篩選得到的，其能夠特異性的與細(xì)胞表面的c-met蛋白結(jié)合實(shí)現(xiàn)對(duì)靶細(xì)胞的高親和力的識(shí)別，從而內(nèi)化進(jìn)入細(xì)胞。核酸適體sl1已經(jīng)成為經(jīng)典的腫瘤細(xì)胞分子識(shí)別探針，已在腫瘤診斷和治療中得到了廣泛的應(yīng)用，但是效果是有限的。
4、雖然現(xiàn)有技術(shù)中已有核酸適
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、鑒于以上所述現(xiàn)有傳統(tǒng)技術(shù)的缺點(diǎn)，為解決現(xiàn)有傳統(tǒng)技術(shù)中預(yù)防或治療惡性腫瘤的藥物藥效差的技術(shù)問題，本申請(qǐng)的目的在于提供一種c-met靶向的核酸適體偶聯(lián)藥物，將靶向c-met的核酸適體與靶向藥物中常用的細(xì)胞毒藥物澳瑞他汀類微管蛋白抑制劑或其衍生物偶聯(lián)，實(shí)現(xiàn)澳瑞他汀類微管蛋白抑制劑或其衍生物的靶向遞送，實(shí)現(xiàn)惡性腫瘤的靶向治療，可用于解決現(xiàn)有技術(shù)中的問題。
2、為實(shí)現(xiàn)上述目的及其他相關(guān)目的，本申請(qǐng)第一方面提供一種藥物偶聯(lián)物，包括偶聯(lián)的核酸適體sl1和微管蛋白抑制劑。
3、在本申請(qǐng)的任意實(shí)施例中，所述核酸適體sl1的序列如seq?id?no:1所示。具體地，為：atcaggctggatggtagctcggtcggggtgggtgggttggcaagtctgat(seq?id?no:1)
4、在本申請(qǐng)的任意實(shí)施例中，所述微管蛋白抑制劑選自澳瑞他汀類微管蛋白抑制劑；優(yōu)選地，所述澳瑞他汀類微管蛋白抑制劑選自一甲基澳瑞他汀e、一甲基澳瑞他汀f，澳瑞他汀-0101或其衍生物。
5、在本申請(qǐng)的任意實(shí)施例中，所述偶聯(lián)方式為共價(jià)偶聯(lián)。
6、在本申請(qǐng)的任意實(shí)施例中，所述微管蛋白抑制劑還包括用于連接核酸適體的第一連接基團(tuán)，所述核酸適體還包括用于連接所述微管蛋白抑制劑的第二連接基團(tuán)；優(yōu)選地，所述第一連接基團(tuán)選自巰基或氨基，所述第二連接基團(tuán)選自羧基或疊氮。這里的第二連接基團(tuán)也是修飾核酸核酸適體的基團(tuán)，修飾后再于靶向藥物偶聯(lián)。在一些方式中，所述氨基為馬來酰亞胺。
7、在本申請(qǐng)的任意實(shí)施例中，所述核酸適體進(jìn)行3端巰基修飾之后與微管蛋白抑制劑偶聯(lián)。通過我們的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，所述3端巰基修飾相較5端巰基修飾顯著提高了核酸適體的穩(wěn)定性。更優(yōu)選地，所述核酸適體的末端修飾選自巰基修飾或氨基修飾。
8、在本申請(qǐng)的任意實(shí)施例中，所述藥物偶聯(lián)物的化學(xué)式選自
9、
10、其中，表示核酸適體。
11、本申請(qǐng)第二方面提供藥物偶聯(lián)物的制備方法，包括以下步驟：
12、1)將核酸適體溶液與微管蛋白抑制劑溶液混合攪拌，偶聯(lián)反應(yīng)，得到粗產(chǎn)品；
13、2)將步驟1)的粗產(chǎn)品進(jìn)行純化，得到偶聯(lián)藥物。
14、在本申請(qǐng)的任意實(shí)施例中，步驟1)中，所述核酸適體的溶劑和所述微管蛋白抑制劑的溶劑均選自無核酸酶水、磷酸鹽緩沖液和三乙基乙酸銨緩沖液、乙腈中的一種或多種的組合。
15、在本申請(qǐng)的任意實(shí)施例中，步驟1)中，所述反應(yīng)時(shí)間為3～36h。
16、在本申請(qǐng)的任意實(shí)施例中，步驟1)中，所述反應(yīng)溫度為4～40℃。
17、在本申請(qǐng)的任意實(shí)施例中，步驟1)中，所述微管蛋白抑制劑為1～5當(dāng)量(當(dāng)量的含義是：)；優(yōu)選地，所述微管蛋白抑制劑為3當(dāng)量。
18、在本申請(qǐng)的任意實(shí)施例中，步驟1)中，所述核酸適體的溶劑或所述微管蛋白抑制劑的溶劑為0.1～50ml。
19、在本申請(qǐng)的任意實(shí)施例中，步驟2)中，所述純化選自高效液相色譜、尺寸排阻色譜和凝膠電泳中的一種或多種的組合。
20、本申請(qǐng)第三方面，提供第一方面所述的藥物偶聯(lián)物或第二方面所述的制備方法在制備惡性腫瘤的預(yù)防或治療產(chǎn)品中的用途。在本申請(qǐng)的任意實(shí)施例中，所述惡性腫瘤選自c-met高表達(dá)的惡性腫瘤。在本申請(qǐng)的任意實(shí)施例中，所述c-met高表達(dá)的惡性腫瘤選自三陰性乳腺癌、結(jié)腸癌、肺癌、胃癌或脈絡(luò)膜黑色素瘤；優(yōu)選地，所述c-met高表達(dá)的惡性腫瘤選自三陰性乳腺癌、脈絡(luò)膜黑色素瘤。
21、本專利技術(shù)的第四方面，提供一種治療腫瘤的方法，該方法包括向受體施加一種治療腫瘤的方法，該方法包括：向主體施加一種藥物偶聯(lián)物，讓偶聯(lián)物靶向結(jié)合主體身體內(nèi)的c-met蛋白從而將藥物帶入腫瘤細(xì)胞內(nèi)抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，所述的主體包括人和哺乳動(dòng)物；所述的藥物偶聯(lián)物包括核酸適體sl1和微管蛋白抑制劑。這里施加的方式可以是靜脈注射。在一些方式中，所述核酸適體sl1的序列如seq?id?no:1所示。在一些方式中，所述微管蛋白抑制劑選自澳瑞他汀類微管蛋白抑制劑。
22、在一些方式中，其特征在于，所述偶聯(lián)選自共價(jià)偶聯(lián)。在一些方式中，所述微管蛋白抑制劑還包括用于連接核酸適體的第一連接基團(tuán)，所述核酸適體還包括用于連接所述微管蛋白抑制劑的第二連接基團(tuán)；所述第一連接基團(tuán)選自巰基或氨基，所述第二連接基團(tuán)選自羧基或疊氮，讓第基團(tuán)與第二基團(tuán)連接，從而讓核酸適體sl1和微管蛋白抑制劑共價(jià)偶聯(lián)。在一些方式中，所述核酸適體進(jìn)行穩(wěn)定性修飾之后再與微管蛋白抑制劑偶聯(lián)；所述穩(wěn)定性修飾為3末端修飾；所述末端修飾選自巰基修飾或氨基修飾。在一些方式中，，所述藥物偶聯(lián)物的化學(xué)式選自
23、
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25、在一些方式中，所述惡性腫瘤選自c-met高表達(dá)的惡性腫瘤。在一些方式中，所述c-met高表達(dá)的惡性腫瘤選自三陰性乳腺癌、結(jié)腸癌、肺癌，胃癌或者脈絡(luò)膜黑色素瘤。在一些方式中，所述c-met高表達(dá)的惡性腫瘤為三陰性乳腺癌或者結(jié)腸癌。在一些方式中，當(dāng)治療脈絡(luò)膜黑色素瘤的時(shí)候，給藥方式采用靜脈給藥和玻璃體腔給藥。
26、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本申請(qǐng)的有益本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種用于治療或者預(yù)防腫瘤的藥物偶聯(lián)物，包括偶聯(lián)的核酸適體SL1和微管蛋白抑制劑。
2.如權(quán)利要求1所述的藥物偶聯(lián)物，其特征在于，所述核酸適體SL1的序列如SEQ?IDNO:1所示。
3.如權(quán)利要求1所述的藥物偶聯(lián)物，其中，所述微管蛋白抑制劑選自澳瑞他汀類微管蛋白抑制劑。
4.如權(quán)利要求1所述的藥物偶聯(lián)物，其中，所述澳瑞他汀類微管蛋白抑制劑選自一甲基澳瑞他汀E、一甲基澳瑞他汀F，澳瑞他汀-0101或其衍生物中的一種。
5.如權(quán)利要求1所述的藥物偶聯(lián)物，其特征在于，所述偶聯(lián)選自共價(jià)偶聯(lián)。
6.如權(quán)利要求5所述的藥物偶聯(lián)物，其特征，所述微管蛋白抑制劑還包括用于連接核酸適體的第一連接基團(tuán)，所述核酸適體還包括用于連接所述微管蛋白抑制劑的第二連接基團(tuán)；所述第一連接基團(tuán)選自巰基或氨基，所述第二連接基團(tuán)選自羧基或疊氮。
7.如權(quán)利要求5所述的藥物偶聯(lián)物，其特征在于，所述核酸適體進(jìn)行穩(wěn)定性修飾之后再與微管蛋白抑制劑偶聯(lián)；所述穩(wěn)定性修飾為末端修飾；所述末端修飾選自巰基修飾或氨基修飾。
8.如權(quán)利要求7所述的藥物偶
9.如權(quán)利要求8所述的藥物偶聯(lián)物，其特征在于，所述藥物偶聯(lián)物的化學(xué)式選自
10.如權(quán)利要求1～9任一項(xiàng)所述的藥物偶聯(lián)物在用于制備惡性腫瘤的預(yù)防或治療試劑中的用途。
11.如權(quán)利要求10所述的用途，其特征在于，所述惡性腫瘤選自c-Met高表達(dá)的惡性腫瘤。
12.如權(quán)利要求11所述的用途，其特征在于，所述c-Met高表達(dá)的惡性腫瘤選自三陰性乳腺癌、結(jié)腸癌、肺癌，胃癌或者脈絡(luò)膜黑色素瘤。
13.如權(quán)利要求11所述的用途，其特征在于，所述c-Met高表達(dá)的惡性腫瘤為三陰性乳腺癌，結(jié)腸癌，脈絡(luò)膜黑色素瘤。
14.如權(quán)利要求13所述的用途，其特征在于，所述藥物偶聯(lián)物在脈絡(luò)膜黑色素瘤中的給藥方式可采用靜脈給藥和/或玻璃體腔給藥。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種用于治療或者預(yù)防腫瘤的藥物偶聯(lián)物，包括偶聯(lián)的核酸適體sl1和微管蛋白抑制劑。
2.如權(quán)利要求1所述的藥物偶聯(lián)物，其特征在于，所述核酸適體sl1的序列如seq?idno:1所示。
3.如權(quán)利要求1所述的藥物偶聯(lián)物，其中，所述微管蛋白抑制劑選自澳瑞他汀類微管蛋白抑制劑。
4.如權(quán)利要求1所述的藥物偶聯(lián)物，其中，所述澳瑞他汀類微管蛋白抑制劑選自一甲基澳瑞他汀e、一甲基澳瑞他汀f，澳瑞他汀-0101或其衍生物中的一種。
5.如權(quán)利要求1所述的藥物偶聯(lián)物，其特征在于，所述偶聯(lián)選自共價(jià)偶聯(lián)。
6.如權(quán)利要求5所述的藥物偶聯(lián)物，其特征，所述微管蛋白抑制劑還包括用于連接核酸適體的第一連接基團(tuán)，所述核酸適體還包括用于連接所述微管蛋白抑制劑的第二連接基團(tuán)；所述第一連接基團(tuán)選自巰基或氨基，所述第二連接基團(tuán)選自羧基或疊氮。
7.如權(quán)利要求5所述的藥物偶聯(lián)物，其特征在于，所述核酸適體進(jìn)行穩(wěn)定性修飾之后再與微管...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：譚蔚泓，劉湘圣，吳文燦，何嘉軒，柳園，潘昭琪，符婷，謝斯滔，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：中國(guó)科學(xué)院杭州醫(yī)學(xué)研究所，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：
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