【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及基因工程，特別是涉及一種殺菌蛋白質(zhì)及其編碼基因與應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、微生物的細(xì)胞壁由多糖組成，主要有：肽聚糖、葡聚糖、甘露聚糖、幾丁質(zhì)和纖維素等組成。真菌基因組中含有豐富的具有糖苷水解酶活力的未知蛋白質(zhì)，如果可以水解上述多糖寶，就能水解微生物的細(xì)胞壁，起到殺菌的效果。已知學(xué)術(shù)研究領(lǐng)域未報(bào)道真菌殺菌蛋白質(zhì)的相關(guān)研究。
2、里氏木霉是重要的工業(yè)生產(chǎn)菌株，符合gras(generally?regarded?as?safe)標(biāo)準(zhǔn)，其發(fā)酵生產(chǎn)的酶制劑已被廣泛應(yīng)用于食品、飼料等行業(yè)。已知學(xué)術(shù)研究領(lǐng)域未報(bào)道里氏木霉菌株可以發(fā)酵生產(chǎn)真菌殺菌蛋白質(zhì)。
3、本專利技術(shù)擬利用里氏木霉分泌表達(dá)殺菌蛋白質(zhì)，從而為病原菌殺滅領(lǐng)域開(kāi)發(fā)新的技術(shù)思路，提供新的技術(shù)方案。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)的目的是提供一種殺菌蛋白質(zhì)及其編碼基因與應(yīng)用，以解決上述現(xiàn)有技術(shù)存在的問(wèn)題。本專利技術(shù)生產(chǎn)的殺菌蛋白質(zhì)可以水解細(xì)菌的細(xì)胞壁，造成藤黃微球菌的溶解。經(jīng)驗(yàn)證，該殺菌蛋白質(zhì)可以顯著抑制或殺滅革蘭氏陽(yáng)性、革蘭氏陰性細(xì)菌和酵母菌，為日化、食品、飼料等行業(yè)提供了新的殺菌蛋白質(zhì)制劑及其制備方法。
2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本專利技術(shù)提供了如下方案：
3、本專利技術(shù)提供了一種殺菌蛋白質(zhì)，所述殺菌蛋白質(zhì)的氨基酸序列為seq?id?no.1～12任一項(xiàng)所示序列，或seq?id?no.1～12任一項(xiàng)序列經(jīng)1～30個(gè)氨基酸取代和/或缺失和/或添加后功能相同的序列，或在seq?id?no.
4、在本領(lǐng)域中，用性能相近或相似的氮基酸進(jìn)行取代時(shí)，通常不會(huì)改變蛋白質(zhì)的功能；在c末端和/或n末端添加一個(gè)或數(shù)個(gè)氨基酸通常也不會(huì)改變蛋白質(zhì)的功能。因此，在本專利技術(shù)中，所述殺菌蛋白質(zhì)的氨基酸序列還包括具有與殺菌蛋白質(zhì)相同功能的seq?id?no.1～12任一項(xiàng)序列的變異形式。這些變異形式包括：若干個(gè)(l～30個(gè)，優(yōu)選為1～20個(gè)，進(jìn)一步優(yōu)選為l～10個(gè)，再進(jìn)一步優(yōu)選為l～5個(gè))氨基酸的取代和/或缺失和/或添加，以及在seqid?no.1～12任一項(xiàng)序列c末端和/或n末端添加一個(gè)或數(shù)個(gè)(1～20個(gè)，優(yōu)選為1～l0個(gè)，進(jìn)一步優(yōu)選為1～5個(gè))氨基酸。
5、本專利技術(shù)還提供了一種編碼上述殺菌蛋白質(zhì)的基因，所述基因的核苷酸序列為seqidno.13～24任一項(xiàng)所示序列，或與seq?id?no.13～24任一項(xiàng)序列具有85％以上同源性的序列。
6、由于密碼子的簡(jiǎn)并性存在(簡(jiǎn)并性是指，有一個(gè)或多個(gè)密碼子被編碼相同氨基酸的簡(jiǎn)并密碼子所取代后而產(chǎn)生的序列)，因此，在本專利技術(shù)中，所述編碼殺菌蛋白質(zhì)的基因的核苷酸序列還包括與seq?id?no.13～24任一項(xiàng)序列具有85％以上同源性的序列。
7、本專利技術(shù)還提供了一種重組表達(dá)載體，所述重組表達(dá)載體上包含編碼上述殺菌蛋白質(zhì)的核苷酸序列，或包含上述基因。
8、本專利技術(shù)還提供了一種重組微生物，所述重組微生物中包含上述重組表達(dá)載體。
9、優(yōu)選的，所述重組微生物的底盤微生物為木霉菌。
10、優(yōu)選的，所述木霉菌為里氏木霉qm6a、qm9414、rut-c30、rl-p37、ng14或pc-3-7。
11、本專利技術(shù)還提供了一種上述基因、上述重組表達(dá)載體或上述重組微生物在生產(chǎn)殺菌蛋白質(zhì)中的應(yīng)用。
12、本專利技術(shù)還提供了一種殺菌蛋白質(zhì)的生產(chǎn)方法，將上述重組微生物進(jìn)行發(fā)酵，收集發(fā)酵液，得到所述殺菌蛋白質(zhì)。
13、本專利技術(shù)還提供了一種利用上述生產(chǎn)方法制得的殺菌蛋白質(zhì)在制備殺菌劑中的應(yīng)用。
14、本專利技術(shù)具有如下的有益效果：
15、本專利技術(shù)公開(kāi)了殺菌蛋白質(zhì)的氨基酸序列，及編碼殺菌蛋白質(zhì)的基因序列。利用木霉表達(dá)載體cbh1t1.0，將殺菌蛋白質(zhì)的編碼基因轉(zhuǎn)化到木霉基因組中，成功構(gòu)建了分泌表達(dá)殺菌蛋白質(zhì)的重組木霉菌株。該重組木霉菌株可用于殺菌蛋白質(zhì)的生產(chǎn)。通過(guò)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，本專利技術(shù)生產(chǎn)的殺菌蛋白質(zhì)可以顯著殺滅革蘭氏陽(yáng)性、革蘭氏陰性細(xì)菌和酵母菌，其效果優(yōu)于現(xiàn)有技術(shù)中常見(jiàn)的殺菌蛋白質(zhì)。本專利技術(shù)為日化、食品、飼料等行業(yè)提供了新的殺菌蛋白質(zhì)制劑及其制備方法，及其在病原菌殺滅方面的應(yīng)用。
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1.一種殺菌蛋白質(zhì)，其特征在于，所述殺菌蛋白質(zhì)的氨基酸序列為SEQ?ID?NO.1～12任一項(xiàng)所示序列，或SEQ?ID?NO.1～12任一項(xiàng)序列經(jīng)1～30個(gè)氨基酸取代和/或缺失和/或添加后功能相同的序列，或在SEQ?ID?NO.1～12任一項(xiàng)序列C末端和/或N末端添加1～20個(gè)氨基酸后功能相同的序列。
2.一種編碼權(quán)利要求1所述殺菌蛋白質(zhì)的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列為SEQ?ID?NO.13～24任一項(xiàng)所示序列，或與SEQ?ID?NO.13～24任一項(xiàng)序列具有85％以上同源性的序列。
3.一種重組表達(dá)載體，其特征在于，所述重組表達(dá)載體上包含編碼權(quán)利要求1所述殺菌蛋白質(zhì)的核苷酸序列，或包含權(quán)利要求2所述的基因。
4.一種重組微生物，其特征在于，所述重組微生物中包含權(quán)利要求3所述的重組表達(dá)載體。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的重組微生物，其特征在于，所述重組微生物的底盤微生物為木霉菌。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的重組微生物，其特征在于，所述木霉菌為里氏木霉QM6a、QM9414、RUT-C30、RL-P37、NG14或P
7.一種權(quán)利要求2所述基因、權(quán)利要求3所述重組表達(dá)載體或權(quán)利要求4～6任一項(xiàng)所述重組微生物在生產(chǎn)殺菌蛋白質(zhì)中的應(yīng)用。
8.一種殺菌蛋白質(zhì)的生產(chǎn)方法，其特征在于，將權(quán)利要求4～6任一項(xiàng)所述的重組微生物發(fā)酵培養(yǎng)，收集發(fā)酵液，得到所述殺菌蛋白質(zhì)。
9.一種利用權(quán)利要求8所述生產(chǎn)方法制得的殺菌蛋白質(zhì)在制備殺菌劑中的應(yīng)用。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種殺菌蛋白質(zhì)，其特征在于，所述殺菌蛋白質(zhì)的氨基酸序列為seq?id?no.1～12任一項(xiàng)所示序列，或seq?id?no.1～12任一項(xiàng)序列經(jīng)1～30個(gè)氨基酸取代和/或缺失和/或添加后功能相同的序列，或在seq?id?no.1～12任一項(xiàng)序列c末端和/或n末端添加1～20個(gè)氨基酸后功能相同的序列。
2.一種編碼權(quán)利要求1所述殺菌蛋白質(zhì)的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列為seq?id?no.13～24任一項(xiàng)所示序列，或與seq?id?no.13～24任一項(xiàng)序列具有85％以上同源性的序列。
3.一種重組表達(dá)載體，其特征在于，所述重組表達(dá)載體上包含編碼權(quán)利要求1所述殺菌蛋白質(zhì)的核苷酸序列，或包含權(quán)利要求2所述的基因。
4.一種重組微...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：王瑋，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：王瑋，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：
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