【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及藥物基因檢測，具體涉及一種用于麻醉用藥基因分型的復合擴增體系、檢測方法及試劑盒。
技術介紹
1、現代麻醉學開始于1846年，在麻醉藥物的臨床應用中，當不同患者使用相同種類、相同劑量的麻醉藥物時，意識消失時間、蘇醒時間、麻醉深度、不良反應發生率存在明顯個體差異。多項研究表明，遺傳因素是造成個體間藥代動力學、藥效學反應差異的重要原因。藥物基因組學是研究藥物代謝動力學和藥效學相關基因的多態性以及藥物反應個體差異的學科，旨在尋找與藥物反應個體差異有關的藥物代謝酶、藥物轉運蛋白以及作用靶點等。麻醉藥物基因組學研究能夠為麻醉藥物的個體化用藥和預防不良反應提供重要依據，提高手術過程中麻醉用藥的安全性。
2、近年來，市場上出現了多種用于檢測基因多態性的新方法和新技術，包括變性高壓液相色譜分析(dhplc)、引物延伸結合飛行時間質譜分析(maldi-tofms)、動態等位基因特異性雜交、基因芯片法、taqman探針技術以及焦磷酸測序技術等。這些方法和技術在靈敏度和通量方面均有顯著提升，也使其在基因檢測領域的應用日益廣泛。
3、盡管這些技術能夠有效地檢測單核苷酸多態性(snp)，但在實際應用中也存在一些局限性。例如，某些方法的操作過程復雜，需要進行限制性內切酶消化；有的則需要進行兩步pcr擴增反應。此外，一些新技術雖然具備高通量和易于自動化的優點，但它們通常需要昂貴的儀器設備。還有一些技術在重復性、結果判讀、檢測位點數量、通量、檢測周期以及成本方面存在不足，如重復性差、結果不易判讀、檢測位點少、檢測通量低、檢測
技術實現思路
1、(一)解決的技術問題
2、針對現有技術的不足，本專利技術提供了一種通量高、特異性強、靈敏度高、成本低且操作簡單的用于麻醉用藥相關基因多態性檢測的復合擴增體系、試劑盒及檢測方法。
3、(二)技術方案
4、為實現以上目的，本專利技術通過以下技術方案予以實現：
5、第一方面，本專利技術提供了一種用于麻醉用藥相關基因多態性檢測的引物組合物，所述引物組合物包含133個引物，其序列如seq?id?no.1-133所示。
6、上述引物組是經過大量篩選和分析，對麻醉科常用的7大類24種藥物所對應的44個snp位點，進行引物設計，得到上述引物組；所述snp位點如下所示：
7、
8、進一步地，所述引物組中的引物還包含熒光基團修飾、磷酸化修飾、硫代磷酸化修飾、鎖核酸修飾或肽核酸修飾中的一種。
9、第二方面，本專利技術提供了一種麻醉用藥相關基因多態性檢測的復合擴增體系，所述所述復合擴增體系包含序列seq?id?no.1-133所示的引物組合物，該復合擴增體系是多重熒光arms?pcr結合毛細管電泳檢測的體系。
10、進一步地，在該體系中，所述檢測采用毛細管電泳檢測，所述擴增采用多重等位基因特異性pcr擴增。
11、第三方面，本專利技術還提供了一種用于麻醉用藥相關基因多態性檢測的試劑盒，所述試劑盒中包含序列seq?id?no.1-133所示的引物組合物或復合擴增體系。
12、進一步地，所述的檢測試劑盒，采用的是等位基因特性pcr(allele-specificpcr，aspcr)結合定量熒光pcr(quantitive?fluorescent?pcr，qf-pcr)的方法對目的位點進行擴增，通過毛細管電泳進行擴增產物的檢測，完成對目的位點分型的檢測；對于每個檢測位點設置三條引物，對兩種分型分別設置一條不同長度的特異引物，以及一條熒光標記的下游引物；每條特異引物只能與對應基因型的dna模板結合并進行擴增；完成pcr擴增和毛細管電泳檢測后，通過特定熒光標記、特定長度的擴增產物的有無即可判定樣本特定位點是否存在特定基因型，一般情況下野生型引物擴增得到的目的片段會比突變型引物擴增得到的片段小4bp。
13、進一步地，所述試劑盒中還包括熱啟動dna?taq酶、2×pcr擴增緩沖液。
14、進一步地，所述試劑盒中還包括質控品和毛細管檢測所需的相關試劑。
15、第四方面，本專利技術提供了一種用于麻醉用藥相關基因多態性的檢測方法，所述方法為：待測樣本采用上述引物組合物或上述復合擴增體系或上述試劑盒進行pcr擴增和毛細管電泳檢測，隨后通過特定熒光標記、特定長度的擴增產物的有無判定樣本特定位點是否存在特定基因型。
16、(三)有益效果
17、本專利技術提供了一種用于麻醉用藥相關基因多態性檢測的復合擴增體系、試劑盒及其檢測方法，相比現有技術，具有以下優點：
18、1.本專利技術根據等位基因特異性pcr原理，首先針對7大類24種藥物所對應的44個snp位點初步設計特異性引物序列，為協調擴增效率，改善產物峰型，提高檢測效率等，我們進一步對所有引物進行了一系列特定的改動或修飾，最終得到包含序列seq?id?no.1-133所示的引物組合物；所述引物組合物涵蓋位點全面，能夠實現多snp位點的多重特異性檢測。
19、2.本專利技術提供的試劑盒對44個麻醉用藥相關的snp位點，檢測結果準確度高，能夠金標準保持一致；同時本專利技術提供的試劑盒支持血液或血卡直充，無需對待測樣本進行預處理，可直接得到檢測結果，操作步驟簡單。
20、3.本專利技術提供的檢測方法操作簡單，耗時短，能夠大大降低成本，具有靈敏度高、分辨率高、通量高等優點。
21、4.本專利技術提供的用于麻醉用藥相關基因多態性檢測的復合擴增體系、試劑盒及其檢測方法能夠對麻醉科常用的7大類24種藥物所對應的44個snp位點進行多重擴增檢測，實現患者對麻醉用藥的毒性、惡性癥狀預警、療效測評等評估，為臨床醫生提供更多患者基因信息，為麻醉用藥個體化使用提供有效評估指標。
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1.一種用于麻醉用藥相關基因多態性檢測的引物組合物，其特征在于所述引物組合物包含133個引物，其序列如SEQ?ID?NO.1-133所示。
2.根據權利要求1所述的引物組合物，其特征在于所述引物組合物中的引物還包含熒光基團修飾、磷酸化修飾、硫代磷酸化修飾、鎖核酸修飾或肽核酸修飾中的一種。
3.一種麻醉用藥相關基因多態性檢測的復合擴增體系，其特征在于所述復合擴增體系包含序列SEQ?ID?NO.1-133所示的引物組合物，所述復合擴增體系為多重熒光ARMS?PCR結合毛細管電泳檢測的體系。
4.一種用于麻醉用藥相關基因多態性檢測的試劑盒，其特征在于所述試劑盒中包含序列SEQ?ID?NO.1-133所示的引物組合物或復合擴增體系。
5.一種用于麻醉用藥相關基因多態性的檢測方法，其特征在于所述方法為：待測樣本采用序列SEQ?ID?NO.1-133所示或復合擴增體系或上述試劑盒進行PCR擴增和毛細管電泳檢測，隨后通過特定熒光標記、特定長度的擴增產物的有無判定樣本特定位點是否存在特定基因型。
【技術特征摘要】
1.一種用于麻醉用藥相關基因多態性檢測的引物組合物，其特征在于所述引物組合物包含133個引物，其序列如seq?id?no.1-133所示。
2.根據權利要求1所述的引物組合物，其特征在于所述引物組合物中的引物還包含熒光基團修飾、磷酸化修飾、硫代磷酸化修飾、鎖核酸修飾或肽核酸修飾中的一種。
3.一種麻醉用藥相關基因多態性檢測的復合擴增體系，其特征在于所述復合擴增體系包含序列seq?id?no.1-133所示的引物組合物，所述復合擴增體系為多重熒...
【專利技術屬性】
技術研發人員：高梅梅，楊晶，張聰敏，黃寧，
申請(專利權)人：鄭州大學第一附屬醫院，
類型：發明
國別省市：
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