【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于穩轉細胞株，具體涉及一種過表達appswe695的小鼠海馬神經元細胞株及其構建方法和應用。
技術介紹
1、ad細胞模型能在微觀層面研究ad的發病機制。人神經母細胞瘤細胞系sh-sy5y和小鼠海馬神經元細胞系ht22在體外培養狀態下的生長特性類似神經元，具有神經元酶表達的多能性。基因工程技術可以用于ad細胞模型構建并在一定程度上提高了細胞病理表達的準確性。并且，ht22細胞因其較高的轉染效率和穩定性，尤其適合用于長期的病理學研究和復雜的基因工程操作。這種穩定性是構建ad模型時尤為關鍵的，能夠有效支持對淀粉樣前體蛋白(amyloid?precursor?protein,app)及其突變形式的研究。淀粉樣前體蛋白瑞典型突變(swedish?mutation?of?amyloid?precursor?protein,appswe)是較早被發現的與家族性ad相關的基因突變之一，appswe695的第595位賴氨酸和第596位蛋氨酸分別突變為天冬氨酸和亮氨酸(km595/596nl)，增強了β-分泌酶在淀粉樣前體蛋白(amyloid?precursorprotein,app)水解位點的剪切作用，導致β淀粉樣蛋白(amyloidβprotein,aβ)生成水平的增加。如何構建表達app突變體的細胞系，能夠分泌高水平的aβ，已經被期望應用于ad發病機理和藥物篩選的研究中。
技術實現思路
1、為了解決上述問題，本專利技術公開了一種過表達appswe695的小鼠海馬神經元細胞株及其構建方
2、本專利技術的技術方案如下：
3、一種過表達appswe695的小鼠海馬神經元細胞株，其特征在于，所述的小鼠海馬神經元細胞株保藏在中國典型培養物保藏中心，保藏編號為cctcc?no：c2024239。
4、進一步的，上述一種過表達appswe695的小鼠海馬神經元細胞株，所述過表達appswe695的小鼠海馬神經元細胞株的由ht22細胞構建獲得，能夠承受進一步的質粒轉染并具有高活性。
5、進一步的，上述一種過表達appswe695的小鼠海馬神經元細胞株，所述appswe695來源于人類阿爾茨海默病家系突變，其ncbi登記號nm_201414(k595n,m596l)。
6、本專利技術公開了上述一種過表達appswe695的小鼠海馬神經元細胞株的構建方法，所述方法包括：
7、(1)以gv513為載體，構建過表達appswe695基因的質粒；
8、(2)將構建的過表達質粒gv513-appswe695進行擴增；
9、(3)將步驟(2)所得的質粒使用phelper?2.0進行轉染并收獲、濃縮與純化慢病毒；
10、(4)hitransg?a感染液感染ht22細胞后，使用嘌呤霉素篩選獲得過表達appswe695基因的細胞株ht22-appswe695，即為過表達appswe695的小鼠海馬神經元細胞株。
11、進一步的，上述一種過表達appswe695的小鼠海馬神經元細胞株的構建方法，所述步驟(1)中，構建過表達appswe695基因的質粒使用的引物包括：
12、app(83741-1)-p1：
13、aggtcgactctagaggatcccgccaccatgctgcccggtttggcactg；
14、app(83741-1)-p2：
15、accgtaagttatgtgctagcctagttctgcatctgctcaaagaacttg?tagg。
16、本專利技術還公開了上述過表達appswe695的小鼠海馬神經元細胞在制備細胞活性強的鼠源性的阿爾茨海默癥細胞模型中的應用。
17、本專利技術還公開了一種細胞活性強的鼠源性的阿爾茨海默癥細胞模型，包括上述過表達appswe695的小鼠海馬神經元細胞。
18、本專利技術還公開了上述阿爾茨海默病細胞模型在制備治療/緩解阿爾茨海默癥的藥物中的應用。
19、相比現有技術，本專利技術具有如下有益效果：
20、本專利技術公開了一種過表達appswe695的小鼠海馬神經元細胞株及其構建方法和應用，所述細胞株具備阿爾茨海默病細胞水平分子表達特征及較強的細胞活性，可作為深入研究阿爾茨海默病分子機制及干預研究的工具。
21、菌種保藏信息如下：
22、保藏單位名稱：中國典型培養物保藏中心；
23、保藏單位地址：湖北省武漢市武昌區八一路299號；
24、保藏日期：2024年7月23日
25、保藏編號：cctcc?no：c2024239
26、分類學命名：小鼠海馬神經元(mus?musculus)ht22-appswe695
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1.一種過表達APPswe695的小鼠海馬神經元細胞株，其特征在于，所述的小鼠海馬神經元細胞株保藏在中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC?No：C2024239。
2.根據權利要求1所述的過表達APPswe695的小鼠海馬神經元細胞株，其特征是：所述過表達APPswe695的小鼠海馬神經元細胞株的由HT22細胞構建獲得。
3.根據權利要求1所述的過表達APPswe695的小鼠海馬神經元細胞株，其特征是：所述APPswe695來源于人類阿爾茨海默病家系突變，其NCBI登記號NM_201414(K595N,M596L)。
4.如權利要求1-3任一項所述的過表達APPswe695的小鼠海馬神經元細胞株的構建方法，其特征在于，所述方法包括：
5.根據權利要求4所述的過表達APPswe695的小鼠海馬神經元細胞株的構建方法，其特征在于：
6.如權利要求1-3任一項所述的過表達APPswe695的小鼠海馬神經元細胞在制備細胞活性強的鼠源性的阿爾茨海默癥細胞模型中的應用，其特征在于，所述細胞模型表現以下分子標志：
8.一種細胞活性強的鼠源性的阿爾茨海默癥細胞模型，其特征在于，包括如權利要求1-3任一項所述的過表達APPswe695的小鼠海馬神經元細胞。
9.如權利要求8所述的阿爾茨海默病細胞模型在制備治療/緩解阿爾茨海默癥的藥物中的應用。
...【技術特征摘要】
1.一種過表達appswe695的小鼠海馬神經元細胞株，其特征在于，所述的小鼠海馬神經元細胞株保藏在中國典型培養物保藏中心，保藏編號為cctcc?no：c2024239。
2.根據權利要求1所述的過表達appswe695的小鼠海馬神經元細胞株，其特征是：所述過表達appswe695的小鼠海馬神經元細胞株的由ht22細胞構建獲得。
3.根據權利要求1所述的過表達appswe695的小鼠海馬神經元細胞株，其特征是：所述appswe695來源于人類阿爾茨海默病家系突變，其ncbi登記號nm_201414(k595n,m596l)。
4.如權利要求1-3任一項所述的過表達appswe695的小鼠海馬神經元細胞株的構建方法，其特征在于，所述方法包括：...
【專利技術屬性】
技術研發人員：張瑞，周宏楨，龔椏楠，彭楠，李梅艷，周國黎，郭妍，徐海明，孫健，
申請(專利權)人：寧夏醫科大學，
類型：發明
國別省市：
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