【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及植物組織培養(yǎng)，尤其涉及一種大花紅景天葉片直接誘導(dǎo)生產(chǎn)不定根的培養(yǎng)方法及培養(yǎng)基。
技術(shù)介紹
1、大花紅景天為景天科(crassulaceae)紅景天屬(rhodiola?l.)多年生草本或亞灌木植物，全瓣紅景天的全草。大花紅景天主要分布于中國(guó)西藏、云南西北部、四川西部等高海拔地區(qū)，同時(shí)在尼泊爾、不丹等鄰近國(guó)家亦有分布。其生長(zhǎng)環(huán)境極端，通常生長(zhǎng)在海拔2800～5600米的山坡草地、灌叢、雪地及險(xiǎn)峻貧瘠的流石灘的石縫之間，經(jīng)受長(zhǎng)期缺氧、干燥及強(qiáng)紫外線等惡劣環(huán)境的影響。因此，該植物在長(zhǎng)期自然選擇下形成了獨(dú)特的生理代謝機(jī)制，積累了豐富的紅景天甙、黃酮、多種維生素及微量元素，還含有機(jī)體所必需的17種氨基酸，展現(xiàn)出極高的藥用價(jià)值。近幾十年的研究表明，大花紅景天具有抗缺氧、抗寒冷、抗疲勞、抗輻射、抗病毒、延緩機(jī)體衰老、防止老年疾病等多種生物學(xué)功能，被認(rèn)為是一種極具開(kāi)發(fā)價(jià)值的天然適應(yīng)原藥物，用以增強(qiáng)人體適應(yīng)能力，特別適用于高原、極地、航天等特殊環(huán)境下人體適應(yīng)能力的增強(qiáng)。
2、紅景天屬植物大多屬于天然植物資源，具有很強(qiáng)的藥用功能。但由于大花紅景天在自然界中多生長(zhǎng)在高海拔、低氣溫的環(huán)境中，從而造成大花紅景天在數(shù)量上稀少和質(zhì)量上參差不齊。由于近年來(lái)市場(chǎng)需求的增長(zhǎng)，過(guò)度采挖已導(dǎo)致大花紅景天資源面臨枯竭風(fēng)險(xiǎn)，已經(jīng)被列入《國(guó)家二級(jí)保護(hù)植物名錄》和《世界自然保護(hù)聯(lián)盟瀕危物種紅色名錄》。然而，由于其生長(zhǎng)周期長(zhǎng)、繁殖率低，自然環(huán)境下的恢復(fù)速度遠(yuǎn)不及市場(chǎng)需求的增長(zhǎng)，造成了供不應(yīng)求的局面。
3、針對(duì)這一問(wèn)題，植物組織培養(yǎng)技術(shù)在大花
4、因此，有必要提供一種大花紅景天不定根的高效培養(yǎng)方法，用以解決上述問(wèn)題。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、根據(jù)上述提出的技術(shù)問(wèn)題，而提供一種大花紅景天葉片直接誘導(dǎo)生產(chǎn)不定根的培養(yǎng)方法及培養(yǎng)基。本專利技術(shù)采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，通過(guò)短時(shí)間內(nèi)大量繁殖富含紅景天甙、黃酮和多種維生素的大花紅景天不定根，來(lái)克服大花紅景天在數(shù)量和質(zhì)量上的困難。本專利技術(shù)主要利用大花紅景天葉片直接誘導(dǎo)生產(chǎn)不定根，從葉片的選擇及處理；葉片誘導(dǎo)生產(chǎn)不定根；到不定根的離體培養(yǎng)、馴化，所獲得的紅景天不定根具有生長(zhǎng)迅速、分散性好、在繼代培養(yǎng)中性狀穩(wěn)定，不存在退化現(xiàn)象等優(yōu)點(diǎn)。
2、本專利技術(shù)采用的技術(shù)手段如下：
3、一種大花紅景天葉片直接誘導(dǎo)生產(chǎn)不定根的培養(yǎng)方法，包括以下步驟：
4、葉片的選擇與處理：選擇活力旺盛的大花紅景天新生葉片，經(jīng)無(wú)菌水沖洗、乙醇消毒、氯化汞處理，并通過(guò)無(wú)菌水多次漂洗后，獲得無(wú)菌葉片；
5、葉片誘導(dǎo)生產(chǎn)不定根：將處理后的葉片在無(wú)菌條件下接種到生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)，誘導(dǎo)產(chǎn)生不定根；
6、不定根離體及馴化培養(yǎng)：挑選生長(zhǎng)旺盛、粗壯的不定根，剪取根尖組織并接種至不定根擴(kuò)繁培養(yǎng)基上培養(yǎng)，實(shí)現(xiàn)不定根擴(kuò)繁與馴化。
7、進(jìn)一步地，所述葉片的選擇與處理包括：用無(wú)菌水沖洗葉片3遍，用無(wú)菌濾紙吸干水分；在75％乙醇中浸泡30秒，用無(wú)菌水漂洗5遍，用無(wú)菌濾紙吸干水分；在0.1％氯化汞溶液中浸泡5-10分鐘，用無(wú)菌水沖洗6次，最后用無(wú)菌濾紙吸干水分。
8、進(jìn)一步地，所述生根培養(yǎng)基配方為：以ms為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加30g/l蔗糖、6g/l瓊脂、1.0mg/l?naa(奈乙酸)、2.5mg/l?iba(3-吲哚丁酸)、0.25mg/l?6-ba(6-芐氨基嘌呤)、1.5mg/l黃腐酸鉀、4.0mg/l?vc(抗壞血酸)。
9、進(jìn)一步地，所述生根培養(yǎng)基誘導(dǎo)生產(chǎn)不定根的培養(yǎng)條件為18-22℃、16h/d光照周期、2200lux光照強(qiáng)度、培養(yǎng)15天。
10、進(jìn)一步地，所述擴(kuò)繁培養(yǎng)基配方為：以ms為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加30g/l蔗糖、6g/l瓊脂、1.0mg/l?naa、2.5mg/l?iba、0.25mg/l?6-ba、1.5mg/l黃腐酸鉀、4.0mg/l?vc、0.1-1.0mg/lβ-煙酰胺。
11、進(jìn)一步地，所述擴(kuò)繁培養(yǎng)基擴(kuò)繁與馴化不定根的培養(yǎng)條件為18-22℃、避光培養(yǎng)40天。
12、本專利技術(shù)還公開(kāi)了上述大花紅景天葉片直接誘導(dǎo)生產(chǎn)不定根的培養(yǎng)方法的培養(yǎng)基，包括生根培養(yǎng)基，其配方為：以ms為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加30g/l蔗糖、6g/l瓊脂、1.0mg/l?naa、2.5mg/l?iba、0.25mg/l?6-ba、1.5mg/l黃腐酸鉀、4.0mg/l?vc。
13、進(jìn)一步地，還包括擴(kuò)繁培養(yǎng)基，其配方為：以ms為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加30g/l蔗糖、6g/l瓊脂、1.0mg/l?naa、2.5mg/l?iba、0.25mg/l?6-ba、1.5mg/l黃腐酸鉀、4.0mg/l?vc、0.1-1.0mg/lβ-煙酰胺。
14、較現(xiàn)有技術(shù)相比，本專利技術(shù)具有以下優(yōu)點(diǎn)：
15、1、葉片直接誘導(dǎo)不定根，提高誘導(dǎo)效率，縮短生長(zhǎng)周期
16、本專利技術(shù)采用葉片直接誘導(dǎo)不定根的方法，避免了傳統(tǒng)依賴根或莖段誘導(dǎo)的不確定性和低效性。通過(guò)優(yōu)化生根培養(yǎng)基成分，結(jié)合光照控制、溫度調(diào)節(jié)等培養(yǎng)條件，顯著縮短了不定根的誘導(dǎo)周期，使其在15天內(nèi)成功誘導(dǎo)生長(zhǎng)。
17、2、首次建立紅景天屬植物的不定根培養(yǎng)體系，實(shí)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化繁殖
18、本專利技術(shù)首次建立了紅景天屬植物不定根的培養(yǎng)方法，針對(duì)紅景天葉片的生理特性，開(kāi)發(fā)了精準(zhǔn)的消毒步驟和優(yōu)化的生根培養(yǎng)基，成功實(shí)現(xiàn)了紅景天不定根的高效誘導(dǎo)與擴(kuò)繁。不同于傳統(tǒng)方法，本專利技術(shù)提供的馴化和擴(kuò)繁培養(yǎng)過(guò)程，可確保不定根的生長(zhǎng)穩(wěn)定性和藥用成分的一致性，為后續(xù)研究和產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。
19、3、通過(guò)馴化培養(yǎng)，提高不定根存活率，確保規(guī)模化生產(chǎn)
20、本專利技術(shù)采用不定根離體馴化技術(shù)，將生長(zhǎng)旺盛的不定根剪取根尖組織，轉(zhuǎn)接至優(yōu)化的擴(kuò)繁培養(yǎng)基，在18-22℃避光培養(yǎng)40天，有效提高不定根的生存率與生長(zhǎng)質(zhì)量。馴化后的不定根適應(yīng)性強(qiáng)，可直接用于進(jìn)一步的工廠化規(guī)模生產(chǎn)，避免了傳統(tǒng)植株繁殖的不穩(wěn)定性，提高了生產(chǎn)的連續(xù)性和可控性，為大花紅景天的資源保護(hù)和產(chǎn)業(yè)化開(kāi)發(fā)提供了可持續(xù)的發(fā)展途徑。
21、綜上，本專利技術(shù)通過(guò)大花紅景天的葉片直接誘導(dǎo)產(chǎn)生不定根，結(jié)合優(yōu)化培養(yǎng)條件和誘導(dǎo)策略，提高不定根的生成效率，確保其生長(zhǎng)的穩(wěn)定性和高活性。大量節(jié)約了其自然生長(zhǎng)所需要的時(shí)間，為緩解自然狀態(tài)下大花紅景天的的短缺提供了有利方法。經(jīng)本專利技術(shù)培養(yǎng)所獲得的大花紅景天不定根生長(zhǎng)迅速、分散性好、質(zhì)量均一穩(wěn)定，其中紅景天甙、黃酮、多種維生素和微量元素等有效成分含量高的特點(diǎn)，且后續(xù)的不定根繼代培養(yǎng)本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種大花紅景天葉片直接誘導(dǎo)生產(chǎn)不定根的培養(yǎng)方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述葉片的選擇與處理包括：用無(wú)菌水沖洗葉片3遍，用無(wú)菌濾紙吸干水分；在75％乙醇中浸泡30秒，用無(wú)菌水漂洗5遍，用無(wú)菌濾紙吸干水分；在0.1％氯化汞溶液中浸泡5-10分鐘，用無(wú)菌水沖洗6次，最后用無(wú)菌濾紙吸干水分。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述生根培養(yǎng)基配方為：以MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加30g/L蔗糖、6g/L瓊脂、1.0mg/L?NAA、2.5mg/LIBA、0.25mg/L?6-BA、1.5mg/L黃腐酸鉀、4.0mg/L?Vc。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述生根培養(yǎng)基誘導(dǎo)生產(chǎn)不定根的培養(yǎng)條件為18-22℃、16h/d光照周期、2200Lux光照強(qiáng)度、培養(yǎng)15天。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述擴(kuò)繁培養(yǎng)基配方為：以MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加30g/L蔗糖、6g/L瓊脂、1.0mg/L?NAA、2.5mg/LIBA、0.25mg/L?6-BA、1.5
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述擴(kuò)繁培養(yǎng)基擴(kuò)繁與馴化不定根的培養(yǎng)條件為18-22℃、避光培養(yǎng)40天。
7.一種用于權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的大花紅景天葉片直接誘導(dǎo)生產(chǎn)不定根的培養(yǎng)方法的培養(yǎng)基，其特征在于，包括生根培養(yǎng)基，其配方為：以MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加30g/L蔗糖、6g/L瓊脂、1.0mg/L?NAA、2.5mg/L?IBA、0.25mg/L?6-BA、1.5mg/L黃腐酸鉀、4.0mg/L?Vc。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的培養(yǎng)基，其特征在于，還包括擴(kuò)繁培養(yǎng)基，其配方為：以MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加30g/L蔗糖、6g/L瓊脂、1.0mg/L?NAA、2.5mg/L?IBA、0.25mg/L?6-BA、1.5mg/L黃腐酸鉀、4.0mg/L?Vc、0.1-1.0mg/Lβ-煙酰胺。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種大花紅景天葉片直接誘導(dǎo)生產(chǎn)不定根的培養(yǎng)方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述葉片的選擇與處理包括：用無(wú)菌水沖洗葉片3遍，用無(wú)菌濾紙吸干水分；在75％乙醇中浸泡30秒，用無(wú)菌水漂洗5遍，用無(wú)菌濾紙吸干水分；在0.1％氯化汞溶液中浸泡5-10分鐘，用無(wú)菌水沖洗6次，最后用無(wú)菌濾紙吸干水分。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述生根培養(yǎng)基配方為：以ms為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加30g/l蔗糖、6g/l瓊脂、1.0mg/l?naa、2.5mg/liba、0.25mg/l?6-ba、1.5mg/l黃腐酸鉀、4.0mg/l?vc。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述生根培養(yǎng)基誘導(dǎo)生產(chǎn)不定根的培養(yǎng)條件為18-22℃、16h/d光照周期、2200lux光照強(qiáng)度、培養(yǎng)15天。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述擴(kuò)繁培養(yǎng)基配方為：以ms為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加30g/l蔗糖、6g/l...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：劉長(zhǎng)斌，李鳳婷，張宗申，邱彥紅，孟楠，唐彤丹，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：大連工業(yè)大學(xué)，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：
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