黃瓜CsMYB60基因在增強黃瓜細菌性角斑病抗性中的應用制造技術

本發明專利技術涉及植物基因工程技術領域，具體涉及黃瓜CsMYB60基因在增強黃瓜細菌性角斑病抗性中的應用。本發明專利技術在黃瓜中克隆了CsMYB60基因，并發現該CsMYB60基因在黃瓜中過表達可以顯著提高黃瓜對細菌性角斑病的抗性，這對黃瓜安全生產具有非常重要的意義。因此，本發明專利技術提供的CsMYB60基因可作為目的基因導入黃瓜植株中，通過改變黃瓜CsMYB60基因在黃瓜植株中的表達量，增加抗性基因的表達，提高黃瓜對細菌性角斑病的抗性；還可在黃瓜育種中，通過PCR技術檢測手段，篩選黃瓜CsMYB60基因表達相對高的黃瓜植株，從而選育出對抗細菌性角斑病較強的黃瓜品種。其應用方法安全、可靠，具有很強的農業應用價值。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及植物基因工程，具體涉及黃瓜csmyb60基因在增強黃瓜細菌性角斑病抗性中的應用。

技術介紹

1、黃瓜(cucumis?sativus?l.)是雙子葉草本植物，屬葫蘆科甜瓜屬，又被稱為刺瓜、胡瓜，當前以大棚連作和設施栽培為主，由于連作模式以及設施栽培內的特殊氣候條件，導致黃瓜植株較易受到各種病原菌的侵害，其中最嚴重的黃瓜病害之一是黃瓜細菌性角斑病，因感染丁香假單胞桿菌致病變種(pseudomonas?syringae?pv.lachrymans)引起。細菌性角斑病在黃瓜的苗期和成株期均可發生，對黃瓜根、莖、花、葉、果實等組織造成極大危害，從而造成減產乃至絕收。因此，構建和選育抗病的優質品種是黃瓜高效生產更經濟、環保的途徑。

2、由于細菌性角斑病對黃瓜產量影響巨大，在黃瓜大棚連作的生產模式下，一旦感染生病，產量將減少10-30％，嚴重時可達到50％甚至絕收。因此黃瓜細菌性角斑病以預防為主，綜合治理為輔。在現有種植模式下，最好的防治體系應是采用抗病新種質，再輔以加強管理、合理輪作的綜合措施。

3、因此，解析抗黃瓜細菌性角斑病的分子調控網絡，發掘潛在的抗性關鍵基因，通過現代分子生物學和遺傳學技術，進一步探究相關抗性關鍵基因在黃瓜響應細菌性角斑病病原菌過程中的作用有重要意義。

技術實現思路

1、為解決當前在設施栽培中，由于連作模式以及設施栽培內的特殊氣候條件，導致黃瓜極易受細菌性角斑病的侵害，從而造成產量大幅度下降、農藥使用嚴重等問題，本專利技術提供黃瓜csmyb60基因在增強黃瓜細菌性角斑病抗性中的應用。

2、本專利技術的技術方案如下：

3、黃瓜csmyb60基因在增強黃瓜細菌性角斑病抗性中的應用，所述黃瓜csmyb60基因的核苷酸序列如seq?id?no.1所示。

4、黃瓜csmyb60基因在選育抗細菌性角斑病黃瓜品種中的應用，所述黃瓜csmyb60基因的核苷酸序列如seq?id?no.1所示。

5、黃瓜csmyb60基因編碼的csmyb60蛋白在增強黃瓜細菌性角斑病抗性中的應用，所述csmyb60蛋白的氨基酸序列如seq?id?no.2所示。

6、上述應用中，通過過表達黃瓜csmyb60基因，提高免疫相關基因轉錄水平，進而增強黃瓜對細菌性角斑病的抗性。

7、根據本專利技術優選的，所述免疫相關基因包括csfrk1、cswrky30和csper5基因。

8、一種增強黃瓜細菌性角斑病抗性或選育抗細菌性角斑病黃瓜品種的方法，利用轉基因技術，將上述黃瓜csmyb60基因在黃瓜植株中進行過表達，培育得到含有過表達黃瓜csmyb60基因的轉基因抗細菌性角斑病黃瓜植株。

9、根據本專利技術優選的，所述方法的具體步驟如下：

10、(a)構建含csmyb60基因的過表達載體；

11、(b)將含csmyb60基因的過表達載體轉入農桿菌感受態細胞中，獲得含csmyb60基因的農桿菌工程菌；

12、(c)將步驟(b)所述農桿菌工程菌轉入到黃瓜植株體內，培育得到含有過表達csmyb60基因的轉基因黃瓜植株。

13、進一步優選的，步驟(a)所述csmyb60基因插入pcambia1300構建過表達載體。

14、有益效果：

15、本專利技術通過構建黃瓜csmyb60基因過表達載體在黃瓜植株中過表達，增強了黃瓜對細菌性角斑病的抗性，通過細菌性角斑病病原菌侵染實驗數據統計分析證明，在侵染3d后，過表達植株葉片病害顯著較野生型植株弱，且過表達植株浸提液中菌落數均顯著低于野生型。表明過表達csmyb60基因提高了黃瓜對細菌性角斑病病原菌的抗性，在黃瓜抵御細菌性角斑病的生物學過程中起正調控作用。本專利技術在黃瓜中克隆了csmyb60基因，并發現該csmyb60基因在黃瓜中過表達可以顯著提高黃瓜對細菌性角斑病的抗性，這對黃瓜安全生產具有非常重要的意義。因此，本專利技術提供的csmyb60基因可作為目的基因導入黃瓜植株中，通過改變黃瓜csmyb60基因在黃瓜植株中的表達量，增加抗性基因的表達，提高黃瓜對細菌性角斑病的抗性；還可在黃瓜育種中，通過pcr技術檢測手段，篩選黃瓜csmyb60基因表達相對高的黃瓜植株，從而選育出對抗細菌性角斑病較強的黃瓜品種。其應用方法安全、可靠，具有很強的農業應用價值。

本文檔來自技高網...

【技術保護點】

1.黃瓜CsMYB60基因在增強黃瓜細菌性角斑病抗性中的應用，所述黃瓜CsMYB60基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。

2.黃瓜CsMYB60基因在選育抗細菌性角斑病黃瓜品種中的應用，所述黃瓜CsMYB60基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。

3.黃瓜CsMYB60基因編碼的CsMYB60蛋白在增強黃瓜細菌性角斑病抗性中的應用，所述CsMYB60蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。

4.如權利要求1～3任一項所述的應用，其特征在于，通過過表達黃瓜CsMYB60基因，提高免疫相關基因轉錄水平，進而增強黃瓜對細菌性角斑病的抗性。

5.如權利要求4所述的應用，其特征在于，所述免疫相關基因包括CsFRK1、CsWRKY30和CsPER5基因。

6.一種增強黃瓜細菌性角斑病抗性或選育抗細菌性角斑病黃瓜品種的方法，其特征在于，利用轉基因技術，將權利要求1或權利要求2所述的黃瓜CsMYB60基因在黃瓜植株中進行過表達，培育得到含有過表達黃瓜CsMYB60基因的轉基因抗細菌性角斑病黃瓜植株。

7.如權利要求6所述的方法，其特征在于，具體步驟如下：

8.如權利要求7所述的方法，其特征在于，步驟(a)所述CsMYB60基因插入pCAMBIA1300構建過表達載體。

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【技術特征摘要】

1.黃瓜csmyb60基因在增強黃瓜細菌性角斑病抗性中的應用，所述黃瓜csmyb60基因的核苷酸序列如seq?id?no.1所示。

2.黃瓜csmyb60基因在選育抗細菌性角斑病黃瓜品種中的應用，所述黃瓜csmyb60基因的核苷酸序列如seq?id?no.1所示。

3.黃瓜csmyb60基因編碼的csmyb60蛋白在增強黃瓜細菌性角斑病抗性中的應用，所述csmyb60蛋白的氨基酸序列如seq?id?no.2所示。

4.如權利要求1～3任一項所述的應用，其特征在于，通過過表達黃瓜csmyb60基因，提高免疫相關基因轉錄水平，進而增強黃瓜對細菌性角斑...

【專利技術屬性】
技術研發人員：李佳林，岳晨陽，王慧文，何文興，張警丹，馮雪茹，
申請(專利權)人：濟南大學，
類型：發明
國別省市：