益生菌和口服耐受性制造技術

本發明專利技術涉及至少包含可以促進口服耐受性的物質（副干酪乳桿菌）的食品、至少包含可以維持口服耐受性的物質（乳酸雙岐桿菌）的食品、以及包含可以促進和維持口服耐受性物質的（乳桿菌和雙歧桿菌的聯合）的食品。該食品旨在用于嬰兒、幼兒、兒童以及寵物。本發明專利技術涉及不旨在用于過敏群體的食品。（*該技術在2023年保護過期，可自由使用*）

【技術實現步驟摘要】
益生菌和口服耐受性的制作方法
技術介紹
嬰兒的牛奶變態反應或乳超敏反應十分常見，通常嬰兒長到2或3歲時該反應就會消失，但偶爾也有終身均會過敏的。這是嬰兒中的一種最常見的疾病，在足月嬰兒中出現的頻率為0.5-3％，在早產嬰兒中的頻率為3-5％。這種變態反應可導致皮疹、蕁麻疹、嘴部紅腫、流鼻涕、打噴嚏、腹痛、腹瀉、嘔吐、過敏或更常見地消化道問題，在某些情況下還可能與嬰兒猝死有關。乳超敏反應應與乳糖不耐性(先天缺乏乳糖酶導致對乳不耐受)相區分。大多數情況下，牛奶變態反應由α-乳球蛋白及β-乳球蛋白變應原造成。酪蛋白和/或白蛋白也是牛奶中潛在的致過敏乳蛋白，也可導致變態反應。當免疫系統針對上述蛋白產生超敏反應時，形成變態反應。此過程(致敏)的第一步，免疫系統首先把這些蛋白當作是一種進入身體的抗原，這將引起由特異抗體或特異致敏的T淋巴細胞組成的免疫應答。第二步，如果抗體是IgE抗體，其將通過產生炎癥反應，即變態反應來應答變應原的存在。此種類型的變態反應的機制可解釋如下IgE抗體出現于細胞(包括循環嗜堿性粒細胞)表面。當變應原和IgE發生相互作用時，呈遞IgE/變應原對的細胞產生并釋放包括組胺在內的化學介質。這種現象導致病理學效應，如局部或系統血管擴張。通常，當嬰兒首次嘗試食物的多樣化而第一次飲用牛奶時，這種乳超敏反應就會出現。Oy aboatech AB的WO01/97822公開了使用益生菌，如干酪乳桿菌鼠李糖亞種(Lactobacillus casei ssp.rhamnosus)來制備可以在高風險發生特應性疾病的嬰兒中用于主要預防特應性疾病的組合物。這是為高風險過敏群體這一特殊群體進行過敏預防的一種嘗試。WO01/89541(Compagnie Gervais Danone)公開了在口服組合物中使用干酪乳桿菌(Lactobacillus casei)可增加特異針對致病微生物的免疫性。其尤其旨在用于影響呼吸系統的病原體，同時該組合物可以是食品或是食品增補劑。然而，仍然需要手段來預防特應性疾病，如牛奶變態反應和/或維持嬰兒自身后天獲得的或是在上述手段的幫助下獲得的口服耐受性。專利技術概述因此，本專利技術涉及至少包含可以維持口服耐受現象的物質的食品，以及包含可以促進和維持口服耐受現象的物質的食品。本專利技術涉及不旨在用于變應性群體的食品。附圖簡述附圖說明圖1顯示小鼠(常規的(CV)，單相關的(monoassociated)和無菌的(GF))口服乳清蛋白后28天處死(A)或50天處死(B)，小鼠血清中BLG-特異性抗體(IgE，IgG1和IgG2a)的效價降低。圖2顯示體外脾細胞的IFN-γ、IL-10、IL-5和IL-4產生。給小鼠(常規的(CV)，單相關的和無菌的(GF))喂食乳清蛋白(黑色柱)或鹽水(無色柱)，之后皮下注射于Al(OH)3中的100μg BLG及100μg OVA，管飼后28天處死(A)或50天處死(B)。在第50天處死的小鼠在第21天和第35天額外地又接受兩次注射。專利技術詳述在本專利技術上下文中，“食品”這一術語旨在包括任何可食用的物質。因此，它可以是一種可供人食用的產品，但是，該術語同樣也包括可被動物食用的產品，所述動物如寵物，如狗、貓、兔、豚鼠、小鼠、大鼠、鳥(如鸚鵡)、爬行動物和魚(如，金魚)等。此外，該術語也包括可由其它馴養的動物，如家畜，如牛、馬、豬、綿羊、山羊、水牛、駱駝等等食用的產品。該術語也旨在包括任何嬰兒配方食品、幼兒配方食品、較大嬰兒和幼兒配方食品(infant and baby follow-up formula)等等。當談到牛奶變態反應或牛奶超敏反應時，應當理解我們意在指任何食物變態反應或超敏反應、以及更一般地任何特應性疾病。我們的討論主要圍繞此變態反應展開，是因為大多數情況下嬰兒接觸到的第一種食品是牛奶；然而，我們并不旨在將本專利申請的范圍限于此疾病。令人吃驚的是，我們已發現加入到食品中的益生菌能夠用作佐劑來促進和維持口服耐受性(oral tolerance)。在本專利技術的第一方面，本專利技術提供至少包含可以促進對牛奶蛋白的口服耐受現象的物質的食品。令人吃驚的是，我們發現乳桿菌屬(lactobacillus)的乳酸細菌株，特別是副干酪乳桿菌(Lactobacillusparacasei)菌株可促進口服耐受的誘導，且特別適用于促進對牛奶蛋白的口服耐受性。在優選實施方式中，所用的乳桿菌是副干酪乳桿菌(Lactobacillusparacasei)CNCM I-2116。已經證實這些微生物具有例如以下特性革蘭氏陽性，過氧化氫酶陰性，來自精氨酸的NH3陰性，CO2產生陰性。它們產生L(+)乳酸，并且能在濃度高達0.4％的膽汁鹽中生長。根據本專利技術，為了促進對抗原的口服耐受，可以將所用乳酸細菌尤其添加入從出生至向營養中引入抗原(如牛奶抗原)時使用的嬰兒配方食品中，當作一種佐劑或是增補劑。由于這種乳酸細菌不是嬰兒腸道中的優勢菌群，因此應當將大量的此種微生物加入到這種配方食品中，如105-108cfu/mL復水配方食品(reconstituted formulae)或cfu/g食品，更優選105-107，在一個優選實施方案中106cfu/ml復水配方食品。因此，可以每天攝入幾次該乳酸細菌，從而導致這種微生物在腸道微生物菌群中的量持續地足夠有效實現本專利技術的目的。上述屬于乳桿菌屬的乳酸細菌，尤其是副干酪乳桿菌，在一個優選實施方案中為副干酪乳桿菌CNCM I-2116，也可添加到寵物食品中以促進口服耐受性。其優選添加到塊狀或油炸食品中，并且也可以添加到濕食品，如罐頭食品中。還可以添加到寵物用的液體配方食品中，如小貓或小狗用的牛奶等等，此外，還能添加到寵物食用的咀嚼型食品中。對于非濕食品而言，寵物食品中此微生物的補充量可在104-108cfu/g之間，對于濕食品在105-108cfu/g之間，對于液體食品在105-108cfu/g之間，這些量并非是限制性的。我們進一步研究了副干酪乳桿菌CNCM I-2116的蛋白水解活性及其在降解牛奶中最重要的變應原β-乳球蛋白時的潛在作用。基于功能，可將乳酸細菌的蛋白水解系統分為3組i)蛋白酶將全蛋白分解為肽；ii)肽酶降解肽；和iii)轉運系統運輸降解產物穿過細胞膜。蛋白酶位于細菌細胞外，而多數的肽酶位于細胞質中。在本研究中，來自胞質提取物的肽酶被用于降解天然的β-乳球蛋白(BLG)及其胰蛋白酶-胰凝乳蛋白酶解(tryptic-chymotriptic)(TC)肽。與副干酪乳桿菌相關的酶主要水解酸性TC肽、輕微水解堿性肽且根本不水解BLG。由于BLG的TC水解產物被證實主要由酸性肽組成(62％)，因此，副干酪乳桿菌酶對它們的降解是十分有意義的。然而，這種蛋白水解活力無疑限于氨肽酶或二肽酶，因為通過大小排阻層析發現，由副干酪乳桿菌的降解作用釋放的肽，分子量主要小于500Da。氨肽酶和二肽酶活性也降解堿性級分，并且我們還觀察到在副干酪乳桿菌降解后的此級分中存在分子量大于2000Da的肽。雖然我們并不想被理論所局限，但肽之間的強疏水相互作用能夠解釋這種觀測現象，因為堿性TC肽已通過C18層析被證實具有高疏水性。副干酪乳桿菌提取物對酸性TC肽的降解導致具有免疫抑制性的肽，本文檔來自技高網...

【技術保護點】
至少包含可以維持口服耐受性的物質的食品，所述物質由雙歧桿菌屬菌株組成。

【技術特征摘要】
EP 2002-5-24 02011444.31.至少包含可以維持口服耐受性的物質的食品，所述物質由雙岐桿菌屬菌株組成。2.根據權利要求1的食品，其中雙岐桿菌是乳酸雙岐桿菌。3.根據權利要求1或2的食品，其中雙岐桿菌是乳酸雙岐桿菌ATCC27536。4.根據權利要求1-3之任一項的食品，其中添加的細菌是已滅活的或死的細菌。5.根據權利要求1-4之任一項的食品，其中該食品不旨在用于過敏群體。6.根據權利要求1-5之任一項的食品，其中該食品是嬰兒配方食品。7.根據權利要求1-6之任一項的食品，其中細菌在食品中以每ml復水產品或每g食品105-108cfu，優選105-107cfu，最優選106cfu的量存在。8.根據權利要求1-5之任一項的食品，其中該食品是寵物食品。9.根據權利要求8的食品，其中細菌以104-108cfu/g非濕食品，105-108cfu/g濕食品，以及105-108cfu/g液體食品的量存在。10.至少包含可以促進口服耐受性的物質和可以維持口服耐受性的物質的食品，其中所述可以促進口服耐受性的物質由乳桿菌屬的乳酸細菌組成，而所述可以維持口服耐受性的物質由雙岐桿菌屬的乳酸細菌組成。11.根據權利要求10的食品，其中乳桿菌是副干酪乳桿菌，而雙岐桿菌是乳酸雙岐桿菌。12.根據權利要求11的食品，其中副干酪乳桿菌是副干酪乳桿菌CNCM I-2116，而乳酸雙岐桿菌是乳酸雙岐桿菌ATCC 27536。...

【專利技術屬性】
技術研發人員：G普里烏特，S佩凱，
申請(專利權)人：雀巢技術公司，
類型：發明
國別省市：CH[瑞士]