護骨素在治療和／或預防纖維變性疾病中的應用制造技術

本發明專利技術涉及護骨素（ｏｓｔｅｏｐｒｏｔｅｇｅｒｉｎ）在治療和／或預防纖維變性疾病尤其是硬皮病中的應用。（*該技術在2023年保護過期，可自由使用*）

【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及纖維變性疾病及結締組織病領域。更具體地說，本專利技術涉及護骨素(osteoprotegerin)在治療和/或預防纖維變性疾病尤其是硬皮病中的應用。護骨素與干擾素、TNF拮抗劑或其他抗纖維變性試劑如SARP-1的聯用也包括在本專利技術之內。
技術介紹
纖維變性是在包括腎、心臟、肺、胃和關節等內臟器官內膠原蛋白過度產生的一種病征。肺纖維變性是其中一種主要纖維變性疾病。特發性肺纖維變性(IPF)表現為肺泡壁病因不明地慢性發炎，逐漸纖維化。特發性間質性肺病中50％至60％的病例是由IPF或者隱原性纖維性肺泡炎引致的。普通間質性肺炎(UIP)是間質性肺炎的一種特殊組織病理模式，是IPF肺活檢中發現的典型模式。放大倍數較低時，組織呈不均質，有正常肺部、間質發炎、纖維變性和蜂窩樣等不同區域。間質發炎在于淋巴細胞、漿細胞以及II型肺細胞增生相關的組織細胞的泡膜浸潤。雖然增生成纖維細胞的分散病灶(成纖維細胞病灶)是早期病和活躍病的位點，通常可在小泡位置找到，但纖維變性區主要由致密非細胞膠原組成。蜂窩樣區域由囊性纖維化空隙組成，內層通常為支氣管上皮并充滿粘液。嗜中性粒細胞可集中在粘液中。平滑肌增生常常發生在纖維變性和蜂窩樣區域。鑒定UIP最有用的特征是胸膜下和隔旁分布、斑狀特征以及時間異質性。間質性發炎和纖維變性的相同模式是發生于膠原血管疾病(例如RA、SLE、進行性全身性硬化癥、混合性結締組織病，糖尿病)、塵肺病(例如石棉沉滯癥)、放射性損傷、和某些藥物誘發的肺病(例如由呋喃妥因(nitrofurantoin)誘發)內。IPF的臨床病程是漸進的；診斷后存活期中值為4至6年。治療IPF通常使用強的松。對治療的反應是可變化的，但在留下大量疤痕之前的細胞成分較多的階段，用皮質類固醇或細胞毒素治療早期病患者似乎更有療效。支援姑息療法包括高濃度氧氣以減緩血氧不足，如果發生細胞感染，還包括抗生素。已經有過末期肺病患者肺移植成功的例子。肺纖維變性涉及肝臟內結締組織積聚，這是由于胞外基質的產生和降解不平衡造成的，而先前存在的纖維萎陷和縮聚增強了纖維變性。肝臟纖維變性是對肝細胞壞死或損傷的一種常見反應，可經由各種各樣試劑誘導發生，例如干擾肝臟動態平衡的任何過程(尤其是發炎、中毒損傷、或肝血流改變)，以及肝感染(病毒、細胞、真菌和寄生蟲)。許多由先天性代謝性缺陷引起的貯積病通常與纖維變性有關，包括脂質代謝紊亂(高歇氏病(Gaucher′s disease))、糖原貯積病(尤其是III、V、VI、IX和X型)；α1-抗胰蛋白酶缺乏；在鐵超負荷綜合征(血色沉著病)和銅貯積病(威爾遜氏病(Wilson′sdisease))中發現的外源物質貯積；有毒代謝物積聚(如酪氨酸血病、果糖血癥和半乳糖血癥)；以及過氧化物酶體紊亂(澤爾韋格合征(Zellweger syndrome))。很多化學物質和藥物可引致纖維變性，尤其是酒精、甲氨蝶呤、異煙肼、酚丁、甲多巴(methyldopa)、氯丙嗪、甲苯磺丁脲和胺碘酮。肝循環障礙(例如慢性心衰竭、巴-希二氏綜合征(Budd-Chiari syndrome)、靜脈阻塞性疾病、門靜脈栓塞)和慢性膽流阻塞都可導致纖維變性。最后，先天性肝纖維變性是一種常染色體隱性畸形。正常肝臟由肝細胞和分布在由膠原蛋白(主要為I、III和IV型)和非膠原蛋白質，包括糖蛋白(如纖連蛋白、層粘連蛋白)和多種蛋白聚糖(如硫酸肝素、硫酸軟骨素、硫酸皮膚素、透明質酸鹽)，組成的胞外基質內的竇狀隙構成。正常情況下在匯管區(portal tracts)中找到的成纖維細胞可產生膠原、大分子糖蛋白和蛋白聚糖。其他肝臟細胞(尤其是肝細胞和貯脂Kupffer細胞，以及內皮細胞)也能夠產生胞外基質成分。貯脂細胞位于狄氏腔(space of Disse)竇內皮以下，是成纖維細胞的前體，能夠增殖和產生過量胞外基質。肝臟細胞受損尤其是壞死以及炎癥細胞導致膠原主動沉積形成纖維變性。從這些細胞釋放出來的確切因子尚未清楚，但可能是一或多個細胞因子或者脂質過氧化產物。Kupffer細胞和活化巨噬細胞產生炎癥細胞因子。壞死肝臟細胞周圍形成新的成纖維細胞；膠原合成增加導致出現疤痕。纖維變性可源自纖維主動生成和正常或改性膠原的不良降解。貯脂細胞、Kupffer細胞和內皮細胞對于清除I型膠原、某些蛋白聚糖和變性膠原是重要的。這些細胞活性的改變可能使纖維變性程度發生變化。組織病理學家認為，纖維變性組織在先前存在的纖維的被動萎陷和縮聚中可變得更明顯。所以，膠原的合成增加或降解減少都會引致過多結締組織主動沉積，這影響到肝功能1)細胞外周纖維變性損害細胞營養并導致肝細胞萎縮；2)在狄氏腔內，纖維變性組織在竇狀隙周圍積聚，阻塞血液中的物質自由通過到達肝細胞；3)肝靜脈和匯管區周圍的纖維變性影響肝的血液流動。從通過肝臟門靜脈分支至竇狀隙最后到達肝靜脈的靜脈阻力增大。可以涉及全部三條途徑。中心靜脈與匯管區連接的纖維變性帶也有利于吻合通道繞過正常肝細胞的動脈血分流至輸出肝靜脈，這進一步損害肝功能并能夠加重肝細胞壞死。這種過程存在的程度決定了肝功能異常的程度例如，在先天性肝纖維變性中，較大的纖維變性帶主要涉及門區(portal region)，但通常不傷害肝實質。因此，先天性肝纖維變性表現為門脈高血壓，但保持肝細胞功能。硬皮病是一種以皮膚和內臟器官纖維變性為特征的結締組織疾病，導致器官衰竭和死亡(Black等人，1998；Clements和Furst，1996)。硬皮病有多種表現，在治療上有各種含義。它包括局限性硬皮病(localized scleroderma)、全身性硬化癥(systemic sclerosis)、硬皮病樣疾病及無硬皮病(Sinescleroderma)(Smith 2000)。局限性硬皮病是一種比較罕見的皮膚病，只限于皮膚的纖維變性和表現；全身性硬化癥是一種累及內臟器官的多系統疾病，而且皮膚病的程度也是不同的。全身性硬化癥可以是彌漫型或局限型。局限型全身性硬化癥也稱CREST綜合癥(鈣質沉積、雷諾現象、食道功能障礙、指端硬化、毛細血管擴張)。據認為，硬皮病樣疾病與暴露于工業環境有關。無硬皮病只涉及內臟器官，而皮膚無改變。硬皮病特別是全身性硬化癥的主要表現是不恰當的過度膠原合成和沉積、內皮功能障礙、痙攣、由纖維變性引起的萎陷和閉塞。硬皮病是一種比較罕見的疾病，每百萬人中大約有19人發病。硬皮病的發病原因尚未清楚。然而，遺傳易感性是非常重要的。異常情況包括自身免疫與內皮細胞和成纖維細胞功能的改變。事實上，全身性硬化癥可能是最嚴重的自身免疫疾病，診斷后5年內死亡率為50％(Silman，1991)。在診斷上，一個重要的臨床參數是近端掌指關節皮膚增厚。雷諾現象是硬皮病的常見癥狀，幾乎所有硬皮病患者均有雷諾現象。皮膚遇冷后會有色素變化，由此可作出診斷。雷諾疾病的癥狀是缺血和皮膚增厚。疾病初期、加重和進展都有一些基本的隱伏生物過程，包括血管功能障礙、內皮細胞活化和損害、白細胞積聚、自身抗體的產生，以及嚴重時有失控的纖維變性反應，可導致死亡(Clements和Furst，1996)。成纖維細胞在該疾病的發病機制中起決定性作用。從硬皮病患者身上抽取原代成纖維細胞，其具有體內看到的本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種物質在制備治療和／或預防纖維變性疾病的藥物中的應用，其特征在于：所述物質選自以下組內：　　　　ａ）含有ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：２或ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：４的多肽；　　　　ｂ）含有ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：２或ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：４的２２到４０１氨基酸的多肽；　　　　ｃ）含有１、２、３或４個護骨素富半胱氨酸結構域的多肽；　　　　ｄ）含有ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：２或ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：４的２２到１９４氨基酸的多肽；　　　　ｅ）（ａ）到（ｄ）的任何一個突變蛋白，其中氨基酸序列與（ａ）到（ｄ）中至少一個序列至少有４０％或５０％或６０％或７０％或８０％或９０％的同一性；　　　　ｆ）（ａ）到（ｄ）的任何一個突變蛋白，其中該突變蛋白是由在溫和嚴格條件或高度嚴格條件下能與編碼（ａ）到（ｄ）任何一個突變蛋白的ＤＮＡ序列的互補序列雜交的ＤＮＡ序列編碼；　　　　ｇ）（ａ）到（ｄ）的任何一個突變蛋白，其中所述氨基酸序列的任何改變都是用保守性氨基酸取代（ａ）到（ｄ）的氨基酸序列；　　　　ｈ）（ａ）到（ｇ）任何一個突變蛋白的鹽或同種型、融合蛋白、功能衍生物、活性片段或環形排列的衍生物。

【技術特征摘要】
EP 2002-4-10 02100364.51.一種物質在制備治療和/或預防纖維變性疾病的藥物中的應用，其特征在于所述物質選自以下組內a)含有SEQ ID NO2或SEQ ID NO4的多肽；b)含有SEQ ID NO2或SEQ ID NO4的22到401氨基酸的多肽；c)含有1、2、3或4個護骨素富半胱氨酸結構域的多肽；d)含有SEQ ID NO2或SEQ ID NO4的22到194氨基酸的多肽；e)(a)到(d)的任何一個突變蛋白，其中氨基酸序列與(a)到(d)中至少一個序列至少有40％或50％或60％或70％或80％或90％的同一性；f)(a)到(d)的任何一個突變蛋白，其中該突變蛋白是由在溫和嚴格條件或高度嚴格條件下能與編碼(a)到(d)任何一個突變蛋白的DNA序列的互補序列雜交的DNA序列編碼；g)(a)到(d)的任何一個突變蛋白，其中所述氨基酸序列的任何改變都是用保守性氨基酸取代(a)到(d)的氨基酸序列；h)(a)到(g)任何一個突變蛋白的鹽或同種型、融合蛋白、功能衍生物、活性片段或環形排列的衍生物。2.如權利要求1所述的應用，其特征在于所述纖維變性疾病是一種結締組織病。3.如權利要求1或2所述的應用，其特征在于所述纖維變性疾病是硬皮病。4.如上述權利要求中任一項所述的應用，其特征在于所述物質是單體或二聚體。5.如上述權利要求中任一項所述的應用，其特征在于所述物質的一個或多個位點被糖基化。6.如上述權利要求中任一項所述的應用，其特征在于所述融合蛋白包括免疫球蛋白(Ig)融合。7.如權利要求6所述的應用，其特征在于所述Ig融合是Fc融合。8.如上述權利要求中任一項所述的應用，其特征在于所述功能衍生物包括連于一個或多個官能團的至少一個部分，而所述官能團以氨基酸殘基的一個或多個側鏈的形式存在。9.如權利要求8所述的應用，其特征在于所述部分是聚乙二醇部分。10.一種核酸分子在制備治療和/或預防纖維變性疾病的藥物中的應用，其中該核酸分子含有的核酸序列編碼具有以下氨基酸序列之一的多肽a)含有SEQ ID NO2或SEQ ID NO4的多肽；b)含有SEQ ID NO2或SEQ ID NO4的22到401氨基酸的多肽；c)含有1、2、3或4個護骨素富半胱氨酸結構域的多肽；d)含有SEQ ID NO2或SEQ ID NO4的22到194氨基酸的多肽；e)(a)到(d)的任何一個突變蛋白，其中氨基酸序列與(a)到(d)中至少一個序列至少有40％或50％或60％或70％或80％或90％的同一性；f...

【專利技術屬性】
技術研發人員：C鮑爾，C普拉特爾齊貝克，
申請(專利權)人：應用研究系統ARS股份公司，
類型：發明
國別省市：AN[菏屬安的列斯群島]