癌胚抗原化學發光定量檢測試劑盒制造技術

本發明專利技術公開了一種癌胚抗原化學發光定量檢測試劑盒，該試劑盒包括癌胚抗原檢測反應板，反應板包被有抗癌胚抗原抗體。癌胚抗原定量檢測試劑盒，還包括：酶結合物，發光底物，校準品，質控品，濃縮洗滌液。本發明專利技術可以專一的定量檢測出病人血清癌胚抗原的含量，用于腫瘤高危人群的篩查(包括乳腺癌、肺癌、胃癌和結腸直腸癌)，能夠對癌癥患者病況進行連續監測，為病人治療提供輔助信息。與傳統的ELISA技術相比，本發明專利技術不僅保留了ELISA技術的高度特異性，檢測結果的穩定性、可靠性和操作的簡便性，同時采用的化學發光法能提高檢測的靈敏度。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于體外臨床檢驗和化學發光免疫檢測領域，尤其涉及一種用于定量檢測 腫瘤指標癌胚抗原(CEA)的試劑盒。
技術介紹
癌胚抗原(carcinoembryonic antigen, CEA)是一種分子量約為22KD的酸性糖蛋 白。CEA的編碼基因位于19號染色體，是胚胎性致癌抗原。CEA主要存在于胎兒消化道上 皮組織、胰臟和肝臟，在正常成人血清中含量極低，而失去極性的癌細胞分泌CEA進入血液 和淋巴，導致血中CEA水平增高。CEA主要存在于結腸癌、胰腺癌、胃癌、肝癌等組織中，但在 患肺癌、乳腺癌時，也有不同程度的提高。CEA廣泛存在于內胚葉起源的消化系統癌中，如胃癌、大腸癌、肝癌、胰腺癌，也可 存在于小細胞肺癌、乳腺癌、甲狀腺髓樣癌中。因此，檢測血清中CEA含量對上述癌癥的診 斷具有輔助價值。CEA的臨床意義為(1)用于結腸直腸癌、胃癌、胰癌、肝細胞癌、肺癌、乳癌以及甲狀腺髓質癌的臨床 監測。①胰液和膽汁內CEA定量可以用于診斷胰腺或膽道癌。②漿液性滲出液的CEA定量可以作為細胞學檢查的輔助手段。③尿液CEA的定量可以作為診斷膀胱癌預后的參考。④血清中CEA的定量結合甲狀腺降鈣素測定，有助于甲狀腺髓樣癌的診斷和復發 的估計。(2)用于預測惡性腫瘤的預后CEA濃度越低說明病程較早，治療效果好，存活時 間長。(3)可以檢測療效治療后血清水平將下降至正常水平，如復發或治療失敗將兩 次上升。(4)可以跟蹤復發治療后CEA又復升高，提示有轉移可能。與目前常用的酶聯免疫(ELISA)檢測方法相比，化學發光免疫分析既具有放射免 疫的高靈敏度，又具有酶聯免疫的操作簡便、快速的特點，易于標準化操作。檢測過程中不 使用有害的試劑，試劑保持期長，成為非放射性免疫分析法中最有前途的方法之一。在化學 發光免疫分析中包含兩個部分，即免疫反應系統和化學發光系統。免疫反應系統的基本原 理是ELISA。抗原或抗體結合到某種固相載體表面，待測樣品中的抗體或抗原按一定程序與 結合到固相載體上的抗原或抗體反應形成抗原-抗體復合物。再加入酶標的抗原或抗體與 其反應，底物在酶的催化下變成有色產物，通過分析有色產物檢測待測樣本中物質。化學發 光系統的原理在于免疫反應中的酶作用于發光底物。發光底物在酶的作用下，底物發生化 學反應并釋放出大量的能量，產生激發態的中間體。這種激發態中間體，當其回到穩定的基 態時，可同時發射出光子。利用發光信號測量儀器即可測量光量子產額，該光量子產額與樣 品中的待測物質的量成正比。由此可以建立標準曲線并計算樣品中待測物質的含量。
技術實現思路
為快速、高效的定性、定量檢測腫瘤標志物CEA，本專利技術提供一種用于定性、定量檢 測腫瘤標志物CEA的化學發光免疫分析定量檢測試劑盒。本專利技術的技術方案如下一種癌胚抗原化學發光定量檢測試劑盒，包括反應板，酶結合物，發光底物，校準 品，質控品，濃縮洗滌液，所述的反應板包被有抗癌胚抗原抗體。所述的校準品以癌胚抗原純品配制，濃度為0、5、20、40、80、160ng/ml。所述的質控品以癌胚抗原純品配制，由質控品I和質控品II兩部分組成，質控品 I的濃度為3-40ng/ml，質控品II的濃度為45-155ng/ml。所述的質控品I的濃度優選為20ng/ml，質控品II的濃度為優選80ng/ml。所述的酶結合物為HRP標記的抗癌胚抗原抗體，所述的反應板材質是不透明的聚 苯乙烯或聚乙烯，所述的發光底物為魯米諾、異魯米諾或其衍生物，所述的濃縮洗滌液是 pH7. 0-pH8. 0的中性緩沖液。本專利技術提供的癌胚抗原(CEA)化學發光定量檢測試劑盒具有以下優越性1.本專利技術可定性、定量的檢測病人癌胚抗原的含量，并通過癌胚抗原的含量多少 診斷病情，判斷病人病情發展、變化。2.本專利技術采用化學發光免疫分析技術，既保留了酶聯免疫的操作簡便、快速的特 點，又具有放射免疫的高靈敏度，易于標準化操作，適合在醫院普及、推廣使用。3.本專利技術通過檢測發光信號值分析顯色底物，大大提高了檢測的靈敏性，與 ELISA法相比，其分析靈敏度大幅度提高。4.試劑盒制作工藝簡單，操作安全，檢測所需樣本量少、時間短，實用性強。 附圖說明圖1 CEA化學發光定量檢測試劑盒臨界值的確定圖2癌胚抗原化學發光定量檢測試劑盒與Roche試劑盒的比較具體實施例方式實施例1 制備本專利技術的癌胚抗原化學發光定量檢測試劑盒1.固相包被板的制備1)包被取 lmol/L Na2HP04 77. 4ml 和 lmol/L NaH2P04 22. 6ml 混勻，加入去離子 水定容至IOOOml即成10倍包被液，臨用前稀釋十倍，加入適量抗CEA單抗混勻，然后加入 到微孔板板孔中，100 μ 1/孔，4°C 16小時；2)封閉棄去包被液，在吸水紙上拍干，加入含有3% BSA和0.05%防腐劑 (Procl in 300)的磷酸鹽緩沖液(pH 7. 4), 200 μ 1/ 孔，37°C 2 小時；3)封袋棄去封閉液，在吸水紙上拍干，室溫下于真空干燥箱中抽5小時，立即進 行真空封袋，檢查有無漏氣，如有重新封袋，貼上標簽后于2-8°C保存。2.酶標CEA單克隆抗體的制備抗CEA單抗用過碘酸鹽氧化法與辣根過氧化物酶交聯，通過方陣滴定，確定酶標抗體的使用濃度。加入甘油，_20°C以下保存。3. CEA校準品的制備用含有3% BSA和0. 05%防腐劑(Proclin 300)的磷酸鹽緩沖液(pH 7. 4)稀釋 CEA純品(購自瑞典康乃格)，分裝0、5、20、40、80、160ng/ml。4. CEA質控品的制備用含有3 WBSAa^海藻糖和0.05%防腐劑(Proclin 300)的磷酸鹽緩沖液(pH 7. 4)稀釋CEA純品配制質控品1，2。濃度分別為20ng/ml和80ng/ml。5.化學發光底物液購買(購自ThermoFisher)商品化發光底物液進行分裝。6.濃縮洗滌液取NaCl 170g，吐溫-20 IOml加水定容至IL即成，臨用前稀釋20倍。7.半成品及成品組成上述步驟所得產品分裝后即為半成品。抽檢合格后組裝成試劑盒成品，成品還需 抽檢，合格后才能出廠。綜上，本專利技術的研究過程中，本專利技術的專利技術人首先對本專利技術所用的原材料進行了 篩選實驗和質量鑒定，包括標記抗體及包被抗體的活性，載體的顏色、吸附性和變異大小， 化學發光的發光強度、持續時間。然后對包被方法進行了研究，用不同的包被緩沖液和保護 液進行了實驗，選出最適合的包被緩沖液和保護液，通過抗體不同包被濃度實驗，找到最佳 的濃度條件，同時也對真空干燥的時間和溫度也進行了研究，最后確定了干燥時間最短，穩 定性最好的時間。對于HRP的標記可以有不同的方法，通過反復探索和對比實驗最終找到 簡便，產率高，成本低，質量可靠的標記方法。實施例2 本專利技術的試劑盒的使用方法以實施例1制備的CEA化學發光定量檢測試劑盒的具體操作如下1.試劑、樣本準備1)試劑準備①試劑盒置于室溫(1816°C )平衡20分鐘。②從試劑盒中取出濃縮洗滌液，用純化水1 20稀釋后加入洗板機的洗液瓶中。2)樣本準備使用前將待測的合格血清或血漿置于室溫(1846°C )平衡20分鐘。2.試驗條件在室溫(1816°C )嚴格按照試劑盒說明書進行操作。本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種癌胚抗原化學發光定量檢測試劑盒，其特征在于，包括反應板，酶結合物，發光底物，校準品，質控品，濃縮洗滌液，所述的反應板包被有抗癌胚抗原抗體。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：穆海東，汪寧梅，穆宇豪，孫向宇，
申請(專利權)人：上海裕隆生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：31