抗人α９整合素抗體及其用途制造技術

本發明專利技術涉及抗人α９整合素抗體，更具體而言是特異性識別人α９整合素的單克隆抗體、嵌合抗體、人源化抗體以及人抗體；產生上述單克隆抗體的雜交瘤細胞；上述單克隆抗體的制備方法；上述雜交瘤細胞的制備方法；含有上述抗人α９整合素抗體的治療劑；含有上述抗人α９整合素抗體的診斷劑；抑制人α９整合素活性的化合物的篩選方法等。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術涉及抗人α 9整合素抗體及其用途。更具體而言，本專利技術涉及特異性識別人α 9整合素的單克隆抗體、嵌合抗體、人源化抗體以及人抗體；產生上述單克隆抗體的雜交瘤細胞；上述單克隆抗體的制備方法；上述雜交瘤細胞的制備方法；含有上述抗人α 9整合素抗體的治療劑；含有上述抗人α 9整合素抗體的診斷劑；及抑制人α 9整合素活性的化合物的篩選方法等。
技術介紹
細胞與細胞外基質之間的粘附，通過整合素所代表的跨膜的細胞粘附蛋白而進行。整合素是以α鏈和β鏈為1 1的異二聚體來構成，迄今為止已發現18種α鏈、8 種β鏈，它們的組合中至少M種已得到鑒定。已知各整合素分別識別特異性細胞外基質 (配體)。而且已逐步明確，作為含有整合素的跨膜細胞粘附蛋白的作用，不僅在于使細胞與細胞外基質粘附、固定，而且還將來自細胞外基質的信息轉換為細胞內信號，負責調節細胞增殖、運動、細胞死亡、分化等。根據相對于配體的特異性和功能，將整合素分類為亞家族，劃分為膠原受體；層粘連蛋白受體；識別纖連蛋白、玻連蛋白等中所含的Arg-Gly-Asp(RGD)序列的RGD受體； 只存在于白細胞中的白細胞特異性受體。α 4整合素和α 9整合素，均不屬于上述這些亞家族而被稱為α 4整合素亞家族。作為與α 4和α 9整合素相結合的配體，已知有骨橋蛋白(osteopontin，以下簡稱為“0ΡΝ” )、纖連蛋白的EDA部位、前肽-血管性血友病因子(pp-vWF)、組織型轉谷氨酰胺酶(tTG)、第XIII凝血因子以及血管細胞粘附分子(VCAM-1 =Vascular Cell Adhesion Molecule-1)等。而且，作為α 4整合素特異性識別的配體已知有纖連蛋白的CS-I區、Mad CAM-Ka 4β 7)等。另一方面，作為a 9整合素特異性識別的配體，已知有肌腱蛋白C、纖溶酶等。作為一種細胞外基質(ECM Extracellular matrix)的OPN是分子量約41kDa的分泌型磷酸化酸性糖蛋白，是一種被認為在乳汁、尿、腎小管、破骨細胞、造骨細胞、巨噬細胞、活化T細胞、腫瘤組織等之中廣泛表達的分子。分子中央部位具有細胞粘附序列GRGDS 并在人OPN中具有SVVYGLR序列，在小鼠OPN中具有SLAYGLR序列，緊隨其后具有凝血酶酶切位點，通過GRGDS序列與RGD受體的整合素粘附，通過SVVYGLR序列或SLAYGLR序列與 α4(α4β1)禾口 α9(α9β1)整合素粘附。研究發現α4β1和α9β1雙方存在下述方式上的差異α4β1與未被凝血酶切斷的OPN(非切斷型0ΡΝ)和被凝血酶切斷的N末端片段(切斷型0ΡΝ)這兩者結合，而 α9β 1只與切斷型OPN結合。α4與α9整合素以及β 1的整合素亞單位的氨基酸序列是公知的，登記在 GenBank上。而且已知這些整合素在種類之間氨基酸序列的相似性高。W002/081522中公開了利用OPN缺失小鼠或OPN的中和抗體而基于抑制OPN功能的風濕性關節炎、肝炎的治療效果。而且，在該公報中還公開了作為α 4整合素、α 9整合素的識別序列的SVVYGLR序列對炎癥性疾病發病很重要，OPN的受體在免疫活性細胞等之中表達，與炎癥性疾病相關。專利文獻1 :W002/08152
技術實現思路
專利技術要解決的課題目前，已知有各種癌、炎癥性疾病、傳染病(感染癥)、自身免疫性疾病和骨病的治療藥，希望開發出具有進一步改善的治療效果的癌、炎癥性疾病、傳染病、自身免疫性疾病和骨病的預防藥和/或治療藥等。迄今為止，本專利技術人等，著眼于整合素尤其是α9整合素，進行了各種研究，結果發現α 9整合素的特異性抑制抗體具有癌抑制效果和抗炎癥效果，制備了產生5種單克隆抗體的雜交瘤細胞(1K11、21C5、24I11、25B6 和 28S1)(分別作為 FERM BP-10510、FERM BP-10511、FERM BP-10512、FERM BP-10513 和 FERM BP-10832 保藏于茨城縣筑波市東 1 丁目1番地1、中央第6 (郵政編碼305-8566)、獨立行政法人產業技術綜合研究所特許生物保藏中心(保藏日期最初4個為2006年2月15日，最后一個為2007年5月四日))。在這種情形下，進一步需求藥效優良的單克隆抗體或者替代性單克隆抗體。解決課題的方法本專利技術人等，為了開發出藥效優于前述5種單克隆抗體的抗體或者替代性單克隆抗體，進行了精心研究，成功制備出產生新型單克隆抗體的雜交瘤細胞，從而完成了本專利技術。S卩，本專利技術提供下面所述的抗人α 9整合素抗體、其單克隆抗體、產生其的細胞、 含有上述抗體的治療劑、抑制α 9整合素活性的化合物的篩選方法等。(1) 一種抗人α 9整合素抗體，其含有序列號1 12中任一個氨基酸序列。(2) 一種抗人α 9整合素抗體，其含有序列號1、3、5、7、9或11的氨基酸序列。(3) 一種抗人α 9整合素抗體，其含有序列號1、3、5、7、9和11的氨基酸序列。(4) 一種抗人α 9整合素抗體，其含有序列號2、4、6、8、10或12的氨基酸序列。(5) 一種抗人α 9整合素抗體，其含有序列號2、4、6、8、10和12的氨基酸序列。(6) 一種抗人α 9整合素抗體，其含有作為重鏈的互補性決定區(⑶RH)中的氨基酸序列的序列號1 6中任一個氨基酸序列、作為輕鏈的互補性決定區(CDRL)中的氨基酸序列的序列號7 12中任一個氨基酸序列。(7)如上述⑴ (6)中任一項所述的抗人α 9整合素抗體，其抑制人α 9整合素與α 9整合素的配體的結合。(8)如上述⑴ (7)中任一項所述的抗人α 9整合素抗體，其為單克隆抗體。(9)如上述⑴ ⑶中任一項所述的抗人α 9整合素抗體，其為嵌合抗體。(10)如上述(1) (8)中任一項所述的抗人α 9整合素抗體，其為人源化抗體。(11)如上述⑴ ⑶中任一項所述的抗人α 9整合素抗體，其為人抗體。(12) 一種抗人α 9整合素抗體，其由保藏號FERM ΒΡ-10830或FERMBP-10831所標記的雜交瘤細胞產生。(13) 一種癌、炎癥性疾病、傳染病、自身免疫性疾病或骨病的治療劑，其作為有效成分含有上述(1) (1 中任一項所述的抗人α 9整合素抗體。(14) 一種癌、炎癥性疾病、傳染病、自身免疫性疾病或骨病的治療劑，其作為有效成分含有上述(1) (1 中任一項所述的抗人α 9整合素抗體和抗人α 4整合素抗體兩者ο(15) 一種癌、炎癥性疾病、傳染病、自身免疫性疾病或骨病的診斷劑，其作為有效成分含有上述(1) (1 中任一項所述的抗人α 9整合素抗體。(16) 一種細胞，其產生上述(1) (1 中任一項所述的抗人α整合素抗體。(17) 一種雜交瘤細胞，其標記為保藏號FERM ΒΡ-10830或FERM ΒΡ-10831。(18) 一種抑制α 9整合素活性的化合物的篩選方法，其特征在于，使用含有α 9整合素的氨基酸序列的肽。專利技術效果基于本專利技術，提供新型抗α整合素抗體。本專利技術的抗α 9整合素抗體，顯示出優良的抑制α 9整合素功能的作用，并且發揮對癌(例如癌細胞的增殖、轉移)、炎癥性疾病 (例如，風濕性關節炎、變形性關節炎、肝炎、支氣管哮喘、纖維癥、糖尿病、動脈硬化、多發性硬化癥、炎癥本文檔來自技高網...

【技術保護點】
１．一種抗人α９整合素抗體，其含有序列號１～１２中的任一個氨基酸序列。

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】

【專利技術屬性】
技術研發人員：今重之，
申請(專利權)人：株式會社遺傳科技，
類型：發明
國別省市：JP