本發明專利技術涉及用于激光解吸離子化質譜的方法，使用苯胺或苯胺衍生物、或丙烯酸苯酯或丙烯酸苯酯衍生物的聚合物。所述聚合物是UV吸收聚合物，在該聚合物上可以沉積樣品探針。通過使用UV激光束，能夠解吸和離子化樣品分子。可不再需要添加UV吸收基質材料。
【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術涉及使用聚合物作為UV吸收介質(absorption medium)的激光解吸離子化質譜(laser desorption ionization mass spectrometry)方法，其中將感興趣的樣品探針(sample probe)沉積在所述作為UV吸收介質的聚合物上。
技術介紹
質譜(MS)是用于測定各種化合物的分子質量的廣泛使用的分析方法。其涉及樣品分子向氣相的轉移和所述分子的離子化(ionization)。使用高真空中的電或磁場基于分子離子的質荷(m/z)比將它們分離。在過去的十年期間，MS已經被證實是用于生物聚合物如蛋白質和肽的精確和靈敏分析的杰出技術。隨著軟離子化技術如電噴霧離子化(ESI)和基質輔助激光解吸離子化(MALDI)的采用，其變得有可能將這些非揮發性的、大的、和熱不穩定的分子轉移到氣相中并離子化而不離解它們。在基質輔助激光解吸離子化中，樣品分子與所謂的基質(UV吸收芳族化合物，其大大過量地加入所述樣品)共結晶。脈沖UV激光為材料例如待被分析的蛋白質的離子化和解吸提供能量。所述基質吸收光子能量并將其轉移到所述樣品。在大多數情況下，將MALDI 離子化與飛行時間(TOF)分析器結合。通過將離子加速到無場飛行管中并測量它們的飛行時間實現它們的分離。所述離子的飛行時間與它們的m/z值成比例。利用MALDI-T0F-MS， 能夠離子化并分析具有超過IO5 Da的質量的分子而無明顯的碎裂。在實施MALDI-MS之前，為了除去鹽和洗滌劑并降低樣品的復雜性，必須將復雜樣品如細胞溶胞產物(Iysates)和臨床樣品如血清初步分離(prefractionated)。一般的初步分離方法包括液相色譜、電泳和等電聚焦。在20世紀90年代早期，通過引入與表面增強親和捕獲(SEAC)、以后的表面增強激光解吸離子化(SELDI)中的色譜樣品初步分離的結合，和通過在稱為表面增強凈解吸(SEND)的方法中基質對樣品支架板的共價結合進一步改良了 MALDI。在SELDI中，在結合樣品分子的子群的色譜表面上將樣品初步分離。每個樣品在靶表面(芯片)的一個點上進行分離。所述色譜靶容納在特定支架(所謂的微量滴定板形式的生物處理器，其使得能夠在同一時間快速處理大量的樣品)中。通過用緩沖液洗滌除去未結合的分子。與MALDI相似，在MS測試前作為最后的步驟將UV吸收化合物(“基質”)添加到所述點。從色譜表面直接實施所述樣品的離子化。如同在MALDI-MS中，基質的添加是樣品制備過程中最敏感的步驟之一。基質溶液非常易揮發并且通常以非常小的體積(0. 5-2 μ L) 添加。所述基質溶液溶解所述生物樣品分子并且所述基質材料與這些生物分子共結晶。移液和共結晶都取決于周圍空氣的溫度和濕度。因此，MALDI和SELDI方法中的大部分變動都與基質添加步驟有關。而且，采用MALDI或SELDI的低分子量生物聚合物的分析被這樣一個事實所阻礙基質本身也被離子化和解吸。這在低質量(約低于1000-1500 Da)提供了強背景信號，使得非常難以(如果不是不可能)在該低質量范圍中檢測樣品物類。從血清能夠獲得示出例如癌癥的早期階段或宿主對感染的反應的診斷質譜蛋白質組圖樣(proteomic patterns)。光譜圖樣作為診斷鑒別物(discriminator)的方法代表了新的診斷模式。所述圖樣本身是鑒別物，不依賴于蛋白質或肽的識別。但是，MALDI-和 SELDI-MS都幾乎不能用于該領域中的常規試驗，主要是因為主要源于例如色譜靶和所述敏感的基質添加步驟的有限的重現性(大的變動系數)。
技術實現思路
可能存在對不受強的背景信號限制的激光解吸離子化質譜方法的需求。可能存在對使得添加基質化合物變得多余的方法的進一步的需求。本專利技術的第一方面提供了激光解吸離子化質譜方法，包括以下步驟(a)將含有樣品分子的樣品探針沉積在樣品支架(holder)的表面，所述表面包含含有 UV吸收芳族單體單元的聚合物；(b)用UV激光束照射所述樣品探針和/或所述表面，從而實現所述樣品分子的離子化和/或解吸；和(c)測定離子化的樣品分子的質量。本專利技術的一個基本思想是通過聚合材料的表面消除對基質材料的需要，如迄今為止例如在MALDI或SELDI技術中常規使用的那樣。本專利技術人發現這能夠通過本專利技術的方法和特別是通過使用具有UV吸收芳族單元的聚合物實現。在本專利技術的第一方面的一個實施方案中，所述吸收性芳族單體單元可以選自苯胺或苯胺衍生物，或丙烯酸苯酯或丙烯酸苯酯衍生物。在本專利技術的另一實施方案中，所述苯胺衍生物可以包含根據式I的化合物權利要求1.用于激光解吸離子化質譜的方法，其包含以下步驟(a)將包含樣品分子的樣品探針沉積在樣品支架的表面上，該表面包含含有作為UV吸收芳族單體單元的苯胺或苯胺衍生物、或丙烯酸苯酯或丙烯酸苯酯衍生物的聚合物；(b)用UV激光束照射所述樣品探針和/或所述表面，從而實現所述樣品分子的離子化和/或解吸；和(c)測定離子化的樣品分子的質量。2.根據權利要求1的方法，其中所述苯胺衍生物包括根據式I的化合物3.根據權利要求1的方法，其中所述丙烯酸苯酯衍生物包括式II的化合物4.根據上述權利要求任意一項的方法，其中所述UV吸收芳族單體單元選自苯胺、 3-氨基苯甲酸和丙烯酸對硝基苯酯。5.根據上述權利要求任意一項的方法，其中所述聚合物是均聚物或共聚物。6.根據權利要求5的方法，其中所述聚合物是苯胺、3-氨基苯甲酸或丙烯酸對硝基苯酯的均聚物，或苯胺和3-氨基苯甲酸的共聚物。7.根據上述權利要求任意一項的方法，其中所述表面是基底支架的基底上的聚合物涂層，或固定在基底支架上的本體聚合物。8.根據權利要求6的方法，其中所述表面是具有小于500nm的層厚度的涂層。9.根據權利要求7或8的方法，其中所述基底選自玻璃、硅、塑料、樹脂、金屬、金屬合金、箔和紙。10.根據上述權利要求任意一項的方法，其中將所述樣品探針作為含有所述樣品分子和溶劑的溶液沉積在所述表面上。11.根據權利要求10的方法，其中在步驟(b)之前蒸發所述溶劑。12.根據上述權利要求任意一項的方法，其中步驟(b)中的所述樣品探針不包含除所述含有UV吸收芳族單體單元的聚合物以外的UV吸收材料，特別是不包含額外的UV吸收基質材料。13.根據上述權利要求任意一項的方法，其中所述質量檢測通過飛行時間質譜實現。全文摘要本專利技術涉及用于激光解吸離子化質譜的方法，使用苯胺或苯胺衍生物、或丙烯酸苯酯或丙烯酸苯酯衍生物的聚合物。所述聚合物是UV吸收聚合物，在該聚合物上可以沉積樣品探針。通過使用UV激光束，能夠解吸和離子化樣品分子。可不再需要添加UV吸收基質材料。文檔編號G01N33/68GK102472755SQ201080030866 公開日2012年5月23日 申請日期2010年7月5日 優先權日2009年7月9日專利技術者里賓 C., V. 卡普斯廷 D., 瓦齊尼施洛澤 G., K. 巴赫曼 P., P. 朱博夫 V. 申請人:皇家飛利浦電子股份有限公司本文檔來自技高網...
【技術保護點】
【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】...
【專利技術屬性】
技術研發人員：G瓦齊尼施洛澤，C里賓，PK巴赫曼，VP朱博夫，DV卡普斯廷，
申請(專利權)人：G瓦齊尼施洛澤，C里賓，PK巴赫曼，VP朱博夫，DV卡普斯廷，
類型：發明
國別省市：
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