一種燕窩生物素的提取及檢測方法技術

本發明專利技術提供一種燕窩生物素的提取及檢測方法，是采用二甲基甲酰胺從燕窩中提取生物素，經離心除雜和濃縮制備樣品液，然后與生物素標準品液采用外標一點法，在涂有硅膠60F254高效薄層板上展開，展開劑為按比例配制的氯仿、丙酮、甲醇和冰乙酸的混合液。展完后的展板用0.05%的高錳酸鉀溶液噴霧染色，經干燥后以400nm吸收波長進行薄層掃描，從而得到燕窩中生物素含量。該發明專利技術方法簡單、準確、快速、穩定可靠，克服了目前所采用的微生物法檢測步驟繁瑣、耗時長，高效液相色譜法投資大、溶劑用量大、成本高等缺點。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及燕窩生物素提取及檢測方法，具體的，涉及燕窩生物素的快速提取及高效薄層檢測分析方法。
技術介紹
燕窩主產于馬來西亞和印尼，是ー種極為名貴的中藥材和保健品原料，具有養陰潤燥、補中益氣、入胃補脾和化痰止咳的功能。燕窩中的唾液酸，也是ー種有效防止流感病毒的天然產物，從而加強免疫系統的功能。燕窩的主要成分有蛋白質(62 63%)、碳水化合物05. 62 27.沈%)、灰分0.1%)和油脂(0. 14 1.觀%)。燕窩的主要氨基酸有天門冬氨酸、蘇氨酸、絲氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、蛋氨酸、異亮氨酸、 酪氨酸、苯丙氨酸、賴氨酸、組氨酸、精氨酸和半胱氨酸等。由于燕窩的營養價值很高而產量少，消費者需求日益増加，其價格也越來越昂貴，ー些商販通過染色、漂白，或以銀耳、豬皮、 瓊脂、果膠等摻假偽造獲取暴利。過去鑒定燕窩真假的方法主要是檢測氨基酸、蛋白質和唾液酸的含量，由于檢測指標少，而摻偽的人又能達到某些指標，所以燕窩真偽的分辨陷入尷尬的境地。因此，單ー或兩種簡單的鑒別手段已無法判斷燕窩產品真偽及優劣，必須采用多種手段結合，通過多種檢測指標和檢測結果的綜合分析以獲得正確的檢測結果。生物素含量的檢測可以作為鑒定真假燕窩的方法之一。這之前人們還未對燕窩里的生物素含量進行過檢測，人們曾對除燕窩以外的其它材料檢測過生物素的含量，其方法有微生物法、高效液相色譜法、氣相色譜法、ELISA法和熒光法等，其中微生物法和高效液相色譜法是最常用的方法。然而，微生物方法操作麻煩和耗時(檢測ー個樣品需2 3天的時間)，而高效液相方法投資大、溶劑用量大、成本較高。專利技術內容本專利技術的目的是提供ー種操作簡單、快速、準確、可靠的燕窩生物素的提取及檢測方法。本專利技術目的可通過以下技術措施來實現 該方法按如下步驟進行a.取燕窩除雜、烘干碎成粗粉，按照1公斤燕窩粉與25 40升ニ甲基甲酰胺的配比于 75 °C 95 aC水浴上攪拌提取1 2h，得提取液；b.將提取液于高速離心機中離心，取離心液加入等體積量乙醇，在50 65て條件下旋轉蒸發濃縮，得樣品液；c.取樣品液15μ 1點在高效薄層板上，用氯仿丙酮甲醇冰乙酸=1.5-2. 5 1. 5-2. 5 1-2 0. 01-0. 1體積份比混合而成的展開劑在展開缸內展開，控制展距為6cm，并采用外標一點法點1 μ 1生物素標準品溶液，同時展開；d.展開結束后取出展板晾干，然后用0.05%的高錳酸鉀溶液噴霧染色，再將板放入 100-120て的烘箱中干燥8 12min，取出板后冷卻；e.將染色冷卻好的展板放在薄層掃描儀上，以400nm吸收波長進行掃描，得燕窩中的生物素含量。標準曲線的繪制取Sigma公司銷售的生物素標準品溶解于ニ甲基甲酰胺，濃度分別為0.4，0.99， 1. 48，2. 51，3. 19 mg/ml，在高效薄層板上各點1 μ 1，用Camag薄層掃描儀3，以400nm的吸收波長掃描，經掃描儀的軟件Wincats 1.4. 1統計，得到的線性方程Y = 397. 891+4. 499X。 相關系數 r = 0.9995，RSD = 1. 07 %。2、燕窩生物素含量檢測的準確度和可靠性 1)板內變異和板間變異制備1. 48 mg/ml生物素標準溶液，在同一塊高效薄層板上點四個點，每點為1 μ 1，分別在0，2，4和6h掃描測量，RSD=L 22%。在板上分別滴1 μ 1即1. 48mg/ml和3. 19 mg/ml標準品溶液早晚掃描定量，共測定2天。測得板內變異分別為0.56，1. 17，0.78和1. 02%，而板間變異分別為1.66,0. 55, 0. 46 和 1. 03%。2)加樣回收率向提取配制的樣品液中，加50，100和150%的生物素標準品，其加樣平均回收率為 99. 12%ο表-1精確度麵 (含量)醜 《小時)錄醒親IoDi^ilRSDtLffl UgO7UBZ.2571· 士亂 43L222f im 754I 9LI5i7123.5表-2板內變異和板間變異斑點(含量)峰面積SDRSD%板內1. 48 710939. 880. 56717084. 021. 173. 19 14491112.690. 7814398. 67146. 661. 02板間1. 48 7134. 67118. 091. 667078. 3338. 800. 553. 19 14484. 6766. 000. 4614491. 33149. 371. 03表-3加樣回收率添加(％)獲得(％)回收(％)平均回收(％)5049. 298. 499. 1210099. 799. 權利要求1. ，其特征在于該方法按如下步驟進行a.取燕窩除雜、烘干碎成粗粉，按照1公斤燕窩粉與25 40升二甲基甲酰胺的配比于 75冗 95冗水浴上攪拌提取1 池，得提取液；b.將提取液于高速離心機中離心，取離心液加入等體積量乙醇，在50 65T條件下旋轉蒸發濃縮，得樣品液；c.取樣品液15μ 1點在高效薄層板上，用氯仿丙酮甲醇冰乙酸=1.5-2. 5 : 1. 5-2. 5 :1-2 0. 01-0. 1體積份比混合而成的展開劑在展開缸內展開，控制展距為6cm，并采用外標一點法點1 # 1生物素標準品溶液，同時展開；d.展開結束后取出展板晾干，然后用0.05%的高錳酸鉀溶液噴霧染色，再將板放入 100-120 dC的烘箱中干燥8 12min，取出板后冷卻；e.將染色冷卻好的展板放在薄層掃描儀上，以400nm吸收波長進行掃描，得燕窩中的生物素含量。全文摘要本專利技術提供，是采用二甲基甲酰胺從燕窩中提取生物素，經離心除雜和濃縮制備樣品液，然后與生物素標準品液采用外標一點法，在涂有硅膠60F254高效薄層板上展開，展開劑為按比例配制的氯仿、丙酮、甲醇和冰乙酸的混合液。展完后的展板用0.05%的高錳酸鉀溶液噴霧染色，經干燥后以400nm吸收波長進行薄層掃描，從而得到燕窩中生物素含量。該專利技術方法簡單、準確、快速、穩定可靠，克服了目前所采用的微生物法檢測步驟繁瑣、耗時長，高效液相色譜法投資大、溶劑用量大、成本高等缺點。文檔編號G01N30/94GK102539616SQ201210031728公開日2012年7月4日 申請日期2012年2月14日 優先權日2012年2月14日專利技術者劉代成, 張北山 申請人:山東師范大學本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：劉代成，張北山，
申請(專利權)人：山東師范大學，
類型：發明
國別省市：