D組禽輪狀病毒制造技術

本發明專利技術涉及新鑒定的禽輪狀病毒D?VP6核酸序列和其應用。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
D組禽輪狀病毒
技術介紹
輪狀病毒屬于病毒的呼腸孤病毒科(Reoviridae)，并能影響鳥和其他生物體的胃腸系統和呼吸道。呼腸孤病毒科含有不同屬，包含正呼腸病毒(orthoreovirus)(禽和哺乳動物呼腸孤病毒)，環狀病毒(orbivirus)(藍舌病毒(Bluetongue virus))和輪狀病毒(rotavirus) (A-G 組)。輪狀病毒是非包被、雙殼RNA病毒。其基因組有11片段雙鏈RNA組成，編碼6個結構和6個非結構蛋白。6個病毒蛋白(VP)形成病毒粒子的三層二十四面蛋白衣殼。所述結構蛋白稱為VP1、VP2、VP3、VP4、VP6和VP7。VP6形成衣殼的體。這是高度抗原性并能用于鑒定輪狀病毒種類。除了 VP，有6個非結構蛋白(NSP)，只有在被輪狀病毒感染的細胞中產生。這些稱為NSP1、NSP2、NSP3、NSP4、NSP5和NSP6。已知禽輪狀病毒(ARV) ，其在世界范圍內經常影響家禽群，并特別對雞群。受到感染的雞的癥狀是腹瀉，隨后體重增加緩慢，癥狀稱為吸收不良癥狀(MAS)或生長與發育障礙癥狀(RSS)。在一個領域研究，檢查有RSS的8個群的6-18日齡的肉雞以檢測哪些ARV是RSS發病機理的主要原因。在所述研究中，有RSS的群的34只小雞中的32只檢測到ARV。有RSS的群中鑒定了四組ARV :AVR A、D、F和G。所述研究的結果顯示D組的ARV顯示在RSS發病機理中的主要作用。RSS對小雞飼養者的經濟學影響嚴重。會損失所有被感染的小雞。因此，非常需要早期檢測和預防ARV感染。目前，經常使用RNA-PAGE對基于11個基因組RNA片段的遷移作為ARV檢測和鑒定的基礎。D組ARV的RNA-PAGE概況特征是5:2:2:2 。所述RNA遷移的特征概況能用于鑒定D組ARV。也能用ELISA、透射電鏡和逆轉錄酶聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測ARV。只有PAGE能區別不同ARV組，但其靈敏度低。目前，只有使用PCR方法檢測A組輪狀病毒。在優先權日不存在D組ARV的核酸序列數據。因此迫切需要開發檢測其他輪狀病毒的替代方法，特別是D組輪狀病毒。具體來說，迫切需要開發快速和靈敏檢測D組ARV的方法。
技術實現思路
本專利技術涉及新D組禽輪狀病毒(ARVD)的鑒定并提供在獸醫學和藥學領域的數個機遇。本專利技術提供 編碼VP6多肽和片段及其變體的核酸，以及與編碼VP6多肽的核酸互補的核酸序列。·由上述核酸編碼的VP6多肽序列、和片段、變體和其抗原性片段。·在高度嚴謹條件下與編碼VP6多肽的核酸雜交的核酸分子，包含引物和探針。·與VP6多肽、片段、變體和/或其抗原性決定簇結合的抗體。·診斷試劑和試劑盒，所述試劑和試劑盒包含在生物樣品中鑒定ARVD有無的試劑和能用于診斷生物樣品中ARVD感染或鑒定ARVD病毒有無的方法。·治療或防御ARVD感染的疫苗。·證實蛋，特別是用于疫苗生產的胚胎蛋，沒有ARVD的方法。核酸專利技術提供包含SEQ ID NO: I或SEQ ID N0:2核酸序列的核酸。專利技術也提供包含與SEQ ID NO: I或SEQ ID NO: 2至少i %—致的核酸序列的核酸。i值選自75%、80%、85%、90%、 95%、96%、97%、98%、99%、99. 5%,99. 9%。序列鑒定應該沿核酸序列全長計算。SEQ ID NO: 2提供整個ARVD VP6編碼序列。SEQ ID NO: I提供包含如SEQ ID NO2所述的VP6編碼序列片段的核酸，并還包含3’非翻譯序列的核酸。優選地，所述核酸編碼ARVD VP6多肽。本專利技術的核酸可以編碼如SEQ IDN0:3或SEQ ID NO:4 所述的 ARVD VP6 多肽。專利技術也包含如SEQ ID N0:1和/或2所述的核酸序列片段。因此，所述專利技術提供包含SEQ ID N0:1和/或2的至少η個連續核酸片段的核酸，其中，η是8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、30、35、40、50 或更多。核酸可以有 η+χ 核酸的總長度，其中 χ=0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、1 O、11、12、13、14、15、16、17、I 8、19、20、21、22、23、24、25、30、35、40、50或更多。在一個實施方式中，η值是24。在另一實施方式中，專利技術提供包含SEQ ID Ν0:1或SEQ ID Ν0:2的反義互補序列的核酸。本專利技術也提供包含至少與如SEQ ID NO: I或SEQ ID NO:2所述核酸序列的反義互補序列的一致性在 75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、99· 5%,99. 9% 或更高的核酸序列的核酸。本專利技術也提供包含衍生自SEQ ID Ν0:1和/或2的反義互補的至少η個連續核酸片段的核酸，其中，η 是 8、9、10、11、12、1 3、14、15、16、17、I 8、19、20、21、22、23、24、25、30、35、40、50或更多。所述核酸可以有η+χ核酸的總長度，其中χ=0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、30、35、40、50 或更多。在一個實施方式中，η值是10。在另一個實施方式中，專利技術提供在嚴謹條件下與包含SEQ ID NO: I和/或SEQ IDNO: 2的核酸雜交的核酸。實例性嚴謹雜交條件是65。C 10分鐘的O. I X SSC、0. 1% SDS’并用 2XSSC、0. 1% SDS 洗滌 10 分鐘，然后再用 O. I X SSC, O. 1% SDS 10 分鐘。本專利技術提供式5’-Χ-Υ-Ζ_3'表示的核酸，式中-Χ-是由X個核苷酸組成的核苷酸序列；-Ζ-是由ζ個核苷酸組成的核苷酸序列；-Υ-是由(a) SEQ ID NO :1或2的片段，或(b) (a)的互補物組成的核苷酸序列;和所述核酸5’-X-Y-Z-3'既不是(i)SEQ ID N0:1或2的片段，也不是(ii) (i)的互補物。例如，-X-和/或-Z-部分可包含啟動子序列(或其互補物)。專利技術也提供包含專利技術的核酸和片段和也包含進一步核酸、修飾核酸或一個或多個可檢測標記的核酸。所述核酸可以用作包含LCR、PCR、RT-PCR、實時PCR、實時RT-PCR、qPCR、qRT-PCR、Northern印跡和Southern印跡的方法的引物和/或探針。示例性標記包含放射性同位素、熒光分子、生物素、堿基對錯配、發夾結構等。很多合適熒光團已知并能使用，包括但不限于熒光素，特別是5-FAM (也稱為5-羧基熒光素；也稱為螺環(異苯并呋喃-I (3H)，9’_ (9H)毒蕈堿)-5-羧酸，3’，6’-二羥基-3-氧代-6-羧基突光素)；麗絲胺(Iissamine);藻紅蛋白；羅丹明(帕金埃爾默公司鯨魚(Cetus)) ;Cy2、Cy3、Cy3. 5、Cy5、Cy5. 5、Cy7 ；FluorX (安瑪西亞公司(Amersham))和其他標記，如在參考文獻中所述。整合所述標記到核酸分子在分子生物學領域技術人員的技術范圍內。在一個特定實施方式本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】...

【專利技術屬性】
技術研發人員：B·羅斯，
申請(專利權)人：諾華有限公司，
類型：
國別省市：