本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種高靈敏度孕中期唐氏綜合癥產(chǎn)前篩查試劑盒及其制備檢測方法，所述試劑盒包括盒體，以及AFP和β-HCG包被板條、AFP和β-HCG標(biāo)準(zhǔn)品、AFP和β-HCG質(zhì)控品、AFP和β-HCG酶結(jié)合物、標(biāo)本稀釋液、發(fā)光底物液、濃縮洗滌液等，制備方法包括制備AFP、β-HCG單克隆抗體包被板條，配制AFP、β-HCG標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品，制備AFP、β-HCG酶結(jié)合物，配制標(biāo)本稀釋液，配制發(fā)光底物液A和發(fā)光底物液B和配制濃縮洗滌液等步驟；本發(fā)明專利技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)在于：實(shí)現(xiàn)了孕中期唐氏綜合癥產(chǎn)前篩查的目的，與臨床診斷符合率達(dá)99.7%以上，靈敏度高、特異性強(qiáng)，結(jié)果更準(zhǔn)確可靠。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及一種產(chǎn)前篩查試劑盒，具體地說是一種高靈敏度孕中期唐氏綜合癥產(chǎn)前篩查試劑盒及其制備方法，屬于產(chǎn)前篩查試劑盒領(lǐng)域。
技術(shù)介紹
唐氏綜合癥又稱21-三體綜合癥或先天愚型(Down’s Syndrome, DS),是造成智力發(fā)展障礙的最常見的先天缺陷，它的發(fā)生率大約為1/750，其特征主要表現(xiàn)為嚴(yán)重的智力低下，智商多為20 60，只有同齡正常人的1/4 1/2，有小頭、枕部扁平、項(xiàng)厚、眼裂小、外側(cè)上斜、內(nèi)眥深等癥狀，其發(fā)生具有偶然性、隨機(jī)性，發(fā)生率會隨孕婦年齡的增大而升高，該病目前沒有有效的治療方法，防止此類疾病發(fā)生所采取的辦法，就是在懷孕期間進(jìn)行產(chǎn)前篩查和必要的產(chǎn)前診斷，盡早發(fā)現(xiàn)并采取相應(yīng)措施，目前，臨床上產(chǎn)前診斷的方法主要采用絨 毛膜取樣或者羊水穿刺來進(jìn)行產(chǎn)前診斷，這些方法對于產(chǎn)前檢出唐氏綜合癥胎兒，防止這類胎兒的出生起到了一定作用，但由于羊膜腔穿刺有一定的創(chuàng)傷性，可引起流產(chǎn)，且不可能直接的大范圍的對所有孕婦用確診的方法進(jìn)行檢測，另外還需要一定的技術(shù)設(shè)備條件、花費(fèi)時(shí)間較長、費(fèi)用較大，不可能在所有的孕婦中廣泛開展。現(xiàn)在，還出現(xiàn)了應(yīng)用單克隆抗體技術(shù)、酶標(biāo)記技術(shù)和酶催化化學(xué)發(fā)光定量檢測技術(shù)，來檢測孕婦血清中的AFP和β -HCG，例如，名稱為“孕中期唐氏綜合癥產(chǎn)前篩查試劑盒”申請?zhí)枮椤癈N200610044608. X”的中國專利技術(shù)專利，然而，該試劑盒的缺點(diǎn)在于操作繁瑣、制備方法復(fù)雜，而且靈敏度受到限制。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
為了解決上述問題，本專利技術(shù)設(shè)計(jì)了一種高靈敏度孕中期唐氏綜合癥產(chǎn)前篩查試劑盒及其制備方法，將酶催化化學(xué)發(fā)光定量檢測技術(shù)應(yīng)用到孕婦血清中AFP和β -HCG的檢測，結(jié)合化學(xué)發(fā)光定量檢測技術(shù)，實(shí)現(xiàn)孕中期唐氏綜合癥產(chǎn)前篩查的目的，與臨床診斷符合率達(dá)99. 7%以上，比時(shí)間分辨熒光法和ELISA法的靈敏度高、特異性強(qiáng)，結(jié)果更準(zhǔn)確可靠，實(shí)現(xiàn)了對孕婦及胎兒安全無創(chuàng)傷的產(chǎn)前篩查，具有較高的市場推廣價(jià)值。孕中期唐氏綜合癥產(chǎn)前篩查由兩個(gè)項(xiàng)目組成，分別是甲胎蛋白-AFP、人絨毛膜促性腺激素游離β亞單位-HCG。本專利技術(shù)的技術(shù)方案為 一種高靈敏度孕中期唐氏綜合癥產(chǎn)前篩查試劑盒，包括盒體，以及設(shè)置在所述盒體內(nèi)的AFP包被板條、AFP標(biāo)準(zhǔn)品、AFP質(zhì)控品、AFP酶結(jié)合物、β -HCG包被板條、β -HCG標(biāo)準(zhǔn)品、β -HCG質(zhì)控品、β -HCG酶結(jié)合物、標(biāo)本稀釋液、發(fā)光底物液Α、發(fā)光底物液B、濃縮洗滌液等。所述AFP包被板條和β -HCG包被板條，優(yōu)選乳白色不透明聚苯乙烯96孔化學(xué)發(fā)光酶標(biāo)板包被板條；所述酶標(biāo)板的各孔包被有固相化的AFP單克隆抗體和β-HCG單克隆抗體，上述單克隆抗體濃度優(yōu)選lug/mL。所述AFP 標(biāo)準(zhǔn)品為濃度分別為0 ng/ml、2.5 ng/ml、5 ng/ml、10 ng/ml、20 ng/ml、40ng/ml的AFP標(biāo)準(zhǔn)溶液； 所述 β-HCG 標(biāo)準(zhǔn)品為濃度分別是0 mIU/ml、2.5 mIU/ml、5 mlU/mlUO mIU/ml、20mIU/ml、40 mlU/ml 的 β-HCG 標(biāo)準(zhǔn)溶液； 所述AFP質(zhì)控品為濃度分別為5 ng/ml、20 ng/ml的AFP溶液； 所述β-HCG質(zhì)控品為濃度分別為5 mIU/ml、20 mlU/ml的β-HCG溶液； 所述AFP酶結(jié)合物，為辣根過氧化物酶標(biāo)記的AFP與包被板條配對的另一株單克隆抗體，雙抗體夾心法需要一對抗體，一株用于包被，另一株用于標(biāo)記，是針對蛋白不同表位的抗體，工作濃度為I: 1000 ； 所述β-HCG酶結(jié)合物，為辣根過氧化物酶標(biāo)記的β-HCG與包被板條配對的另一株單克隆抗體，工作濃度為I: 1000 ； 所述標(biāo)本稀釋液為ρΗ=7. O的O. OlM的磷酸鹽緩沖液(PBS)溶液，還含有體積分?jǐn)?shù)10%小牛血清和O. 1%硫柳汞，硫柳汞用于防腐，小牛血清使所檢測樣本保持同樣的基質(zhì)； 所述濃縮洗滌液為含有體積分?jǐn)?shù)分別為O. 05%的吐溫20、O. 1%的硫柳汞的ρΗ=7. 5濃度O. lmol/L的磷酸鹽緩沖液； 所述發(fā)光底物液A為每250ml溶液含有N，O-雙三甲硅基乙酰胺(BSA)2. 5g、三羥甲基氨基甲烷(Tris) I. 5g、3-氨基鄰苯二甲酰肼(魯米諾)0. 05g、對位碘酚O. 0075g，另外還有極少量鹽酸(每IOOOml底物液A加500μ1鹽酸)，用作調(diào)節(jié)溶液的pH值至pH=9。所述發(fā)光底物液B為每250ml溶液含有BSA 2. 5g、Trisl. 5g、過氧化氫O. 25ml，另外還有極少量鹽酸(每IOOOml底物液B加500μ1鹽酸)，用作調(diào)節(jié)溶液的pH值至pH=9。另外，整個(gè)試劑盒內(nèi)還包括用于固定包被板條的板架、防止潮濕的干燥劑、用于存放一次實(shí)驗(yàn)未用完板條的自封袋，以及用于實(shí)驗(yàn)時(shí)避光的封板膜。上述高靈敏度孕中期唐氏綜合癥產(chǎn)前篩查試劑的制備方法，包括以下步驟 (1)制備AFP、β-HCG單克隆抗體包被板條； (2)配制AFP、β-HCG標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品； (3)制備AFP、β-HCG酶結(jié)合物； (4)配制標(biāo)本稀釋液； (5)配制發(fā)光底物液A和發(fā)光底物液B； (6)配制濃縮洗滌液。本專利技術(shù)試劑盒中涉及的AFP、β -HCG標(biāo)準(zhǔn)品，酶標(biāo)AFP、β -HCG抗體溶液(即AFP酶結(jié)合物和β -HCG酶結(jié)合物)，化學(xué)發(fā)光溶液(發(fā)光底物液A和發(fā)光底物液B)，包被液，封閉溶液(封閉板條時(shí)使用)，濃縮洗滌液及其配方對本專利技術(shù)試劑盒檢測的靈敏度影響很大。所述AFP標(biāo)準(zhǔn)品的配制方法為以倍比稀釋方法配制濃度分別為O ng/ml、2.5ng/ml >5 ng/ml、10 ng/ml >20 ng/ml >40ng/ml 的 AFP 標(biāo)準(zhǔn)溶液； 所述β-HCG標(biāo)準(zhǔn)品的配制方法為以倍比稀釋方法配制濃度分別是0 mIU/ml、2.5mIU/ml、5 mIU/ml、10 mIU/ml、20 mIU/ml、40 mlU/ml 的 β-HCG 標(biāo)準(zhǔn)溶液。所述AFP酶結(jié)合物的配制方法為辣根過氧化物酶標(biāo)記的AFP抗體溶液，使用時(shí)用酶稀釋液配制成1:1000的工作濃度。所述β -HCG酶結(jié)合物配制方法為辣根過氧化物酶標(biāo)記的β -HCG抗體溶液，使用時(shí)用酶稀釋液配制成1:1000的工作濃度。上述酶稀釋液為質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%小牛血清+1%。Proclin 300+1% BSA,即IOOOml酶稀釋液里含小牛血清100ml, Proclin Iml> BSA 10ml。 所述發(fā)光底物液A的配制方法為每250ml水溶液含有BSA (N, O-雙三甲硅基乙酰胺)2. 5g、Trisl. 5g、魯米諾O. 05g、對位碘酚O. 0075g,以及極少量鹽酸調(diào)節(jié)溶液的pH值至 pH=9 ； 所述發(fā)光底物液B的配制方法為每250ml水溶液含有BSA 2. 5g、Trisl. 5g、過氧化氫O.25ml,以及極少量鹽酸調(diào)節(jié)溶液的pH值至pH=9。所述濃縮洗滌液的配制方法為含有體積分?jǐn)?shù)O. 05%吐溫20的pH7. 5的O. I mo I/L磷酸鹽緩沖液。所述包被液為板條包被工藝中所用的溶液，配制方法是將O. 34 g碳酸鈉和O. 57g碳酸氫鈉溶于IOOml水中，調(diào)節(jié)pH=9. 6。所述封閉溶液為包被板條工本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種高靈敏度孕中期唐氏綜合癥產(chǎn)前篩查試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包括盒體，以及設(shè)置在所述盒體內(nèi)的AFP包被板條、AFP標(biāo)準(zhǔn)品、AFP質(zhì)控品、AFP酶結(jié)合物、β？HCG包被板條、β？HCG標(biāo)準(zhǔn)品、β？HCG質(zhì)控品、β？HCG酶結(jié)合物、標(biāo)本稀釋液、發(fā)光底物液A、發(fā)光底物液B、濃縮洗滌液。
【技術(shù)特征摘要】
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：楊致亭，楊愛香，邱香廷，宋玉翠，
申請(專利權(quán))人：濰坊市康華生物技術(shù)有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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