本發明專利技術涉及一種組織培養種苗的方法，該方法將互葉白千層不定芽接種在含有稀土元素、分裂素和生長素的改良MS培養基上進行增殖培養，可有效地促進叢生芽增殖以及防止繼代培養褐化現象的發生。單一或混合稀土元素化合物包括鑭、鈰、釹、鐠、釤的硝酸鹽和氧化物，且稀土元素可減少或替代培養基中的生長素或細胞分裂素。具有簡單、易操作，經濟的特點，可大幅度提高互葉白千層繁殖系數和有效地防止繼代培養褐化現象的發生。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于農業生物
，具體地說，涉及。
技術介紹
種苗繁殖中，互葉白千層(Me/a/euca/eucadendron)是桃金娘科(Myrtaceae)白千層屬的一種長綠小喬木，從其新鮮枝葉和樹干提取的茶樹油，是一種強效的抗菌劑及免疫激活劑，是公認優良的天然保健醫藥材料，廣泛應用于制藥、日化、食品、香料等行業。互葉白千層具有速生、樹干直、萌發力強等特點，定植后又可以多次收獲，具有極高的的經濟效益，目前已在廣西、廣東、福建等多個省(區)推廣種植。目前，互葉白千層主要通過種播和扦插進行種苗繁殖，繁殖系數較低，因此建立高繁殖系數的互葉白千層組培技術對解決缺乏優質互葉白千層種苗的現狀具有重要的實踐意義。 褐化現象與菌類污染和玻璃化并稱植物組織培養的三大難題，是指植物組織培養過程中，培養物在誘導脫分化或再分化時，自身組織由其表面向培養基釋放褐色物質，導致培養基逐漸變褐色，最終致培養物死亡的現象。研究證明，褐化不是基因型病變，而是培養物被切割后，切口附近的細胞受到傷害，其分隔效應被打破，酚類化合物向外分泌，酚氧化酶釋放或合成并發生氧化反應形成褐色醌類物質，毒害培養物并致其死亡。褐化現象的發生與植物的種類及基因型、外植體的生長部位及生理狀態、營養條件、激素水平有關，改善培養條件可緩解褐化的程度。目前，防止褐化的主要措施是在培養基中添加防褐劑，如抗氧化的抗壞血酸，半胱氨酸和檸檬酸以及具吸附作用的活性炭，但這些措施只能減輕褐化的程度，并不能徹底解決褐化問題。應用研究表明，適宜濃度的稀土元素能促進植物細胞對養份的吸收、轉化和利用，能清除植物器官生長環境及體內的活性氧，能調節細胞內外的水平衡。此外，稀土元素具有細胞分裂素作用，能促進植物器官快速生長。目前有關稀土元素在促進互葉白千層叢生芽及防止繼代培養褐化的應用方面尚未見有報道。因此，本專利技術提供了一種互葉白千層叢生芽增殖及防止繼代褐化的組培方法。
技術實現思路
本專利技術的目的在于提供出一種簡便、經濟，且可減少培養基中的激素用量的互葉白千層叢生芽增殖及防止繼代褐化的組培方法。本專利技術人用含有適量濃度稀土元素的培養基對互葉白千層不定芽進行叢生芽增殖培養的實驗證明，由于稀土元素具有激素樣的作用以及促進植物細胞對養份的吸收利用，從而促進互葉白千層叢生芽的增殖，并可部分替代2，4_ 二氯苯氧乙酸(2，4-D)或完全替代N6-苯甲酰基酰嘌呤出-BA)。此外，稀土元素能清除植物器官生長環境及體內的活性氧，從而抑制了酚類物質的氧化以及酚氧化酶釋放或合成，進而實現了本專利技術的目的。本專利技術的技術解決方案是這樣的，，其特征在于包括以下的步驟(I)配制培養基在改良MS培養基中添加l_20g/L的瓊脂，0-5. 0mg/L2，4_ 二氯苯氧乙酸(2，4-D)，0-5. Omg/L N6-苯甲酰基酰嘌呤(6-BA)，O. l_50mg/L的單一和/或混合稀土化合物，調節PH3. 4 6. 8，并進行高壓滅菌處理。(2)叢生芽增殖培養將互葉白千層不定芽接入上述培養基中，在溫度(15—35) °C，光照為1000-50001ux的條件下，每天光照5 18小時，培養10-35天。所述的改良MS培養基為5 20g/L葡萄糖代替蔗糖的MS培養基。所述的單一和/或混合稀土元素的化合物包括鑭、鈰、釹、鐠、釤的硝酸鹽和氧化物。所述的互葉白千層不定芽為由早春即將萌動的休眠芽器官誘導分化而來的叢生 芽。本專利技術的優點是目前國內尚未有關于稀土元素促進互葉白千層叢生芽增殖及防止繼代培養褐化的專利和文獻報道，而本專利技術具有簡單、易行、經濟的特點，可大幅度地提高互葉白千層繁殖系數和有效地防止繼代褐化現象的發生。具體實施例方式以下實施例是對本專利技術的進一步說明，不是對本專利技術的限制。實施例一I.配制下列四種培養基對照培養基CK :在改良MS培養基中添加7g/L的瓊脂，I. 0mg/L6_BA，0· 01mg/L2,4-D ；培養基A :在改良MS培養基中添加7g/L的瓊脂，I. 0mg/L6_BA，再加入3mg/L硝酸釹；培養基B :在改良MS培養基中添加7g/L的瓊脂，O. 01mg/L2，4-D，再加入3mg/L硝酸釹；培養基C :在改良MS培養基中添加7g/L的瓊脂，I. 0mg/L6_BA，0. 01mg/L2，4_D ;再加入 lmg/L 硝酸釹。2.將互葉白千層不定芽接入上述四種培養基中，在溫度26°C，光照為20001UX的條件下，每天光照12小時，培養25天，其結果如下在對照培養基CK中培養，叢生芽增殖了 I. 8倍，到培養第15天時，繼代培養褐化率為25%，到培養第25天時，繼代培養褐化率為33% ；在培養基A中培養，叢生芽增殖了 6. 5倍，繼代培養可保持其生長質量，整個培養過程基本上不發生褐化；在培養基B中培養，叢生芽增殖了 7. 2倍，繼代培養可保持其生長質量，繼代培養第20天時，褐化發生率在5%以下；在培養基C中培養，叢生芽增殖了 8. 4倍，繼代培養可保持其生長質量，整個培養過程基本上不發生褐化。實施例二I.配制下列四種培養基對照培養基CK :在改良MS培養基中添加7g/L的瓊脂，I. 0mg/L6_BA，O. 01mg/L2,4-D ；培養基A :在改良MS培養基中添加7g/L的瓊脂，I. 0mg/L6_BA，再加入5mg/L硝酸鑭；培養基B :在改良MS培養基中添加7g/L的瓊脂，O. 01mg/L2，4-D，再加入5mg/L硝酸鑭；培養基C :在改良MS培養基中添加7g/L的瓊脂，I. 0mg/L6_BA，0. 01mg/L2，4_D ;再加入 2mg/L 硝酸鑭。2.將互葉白千層不定芽接入上述四種培養基中，在溫度25°C，光照為25001ux的條件下，每天光照12小時，培養27天，其結果如下在對照培養基CK中培養，叢生芽增殖了 2. I倍，到培養第15天時，繼代培養褐化率為27%，到培養第25天時，繼代培養褐化率為34% ； 在培養基A中培養，叢生芽增殖了 5. 9倍，繼代培養可保持其生長質量，整個培養過程基本上不發生褐化；在培養基B中培養，叢生芽增殖了 6. 2倍，繼代培養可保持其生長質量，繼代培養可保持其生長質量，整個培養過程基本上不發生褐化；在培養基C中培養，叢生芽增殖了 8. 5倍，繼代培養可保持其生長質量，整個培養過程基本上不發生褐化。實施例三I.配制下列四種培養基對照培養基CK :在改良MS培養基中添加7g/L的瓊脂，I. 0mg/L6_BA，O. 01mg/L2,4-D ；培養基A :在改良MS培養基中添加7g/L的瓊脂，I. 0mg/L6_BA，再加入lmg/L氧化鐠(III，IV) 的硝酸溶液；培養基B :在改良MS培養基中添加7g/L的瓊脂，O. 01mg/L2，4-D，再加入lmg/L氧化鐠(III，IV) 的硝酸溶液；培養基C :在改良MS培養基中添加7g/L的瓊脂，I. 0mg/L6_BA，0. 01mg/L2，4_D ;再加入 O. 5mg/L 氧化鐠(III，IV) 的硝酸溶液。2.將互葉白千層不定芽接入上述四種培養基中，在溫度25°C，光照為30001ux的條件下，每天光照12小時，培養20天，其結果如下在對照培養基CK中培養，叢生芽增殖了 2. 9倍，到培養本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種組織培養種苗的方法，其特征在于包括以下步驟：(1)配制培養基：在改良MS培養基中添加1？20g/L的瓊脂，0？5.0mg/L2，4？二氯苯氧乙酸(2，4？D)，0？5.0mg/L？N6？苯甲酰基酰嘌呤(6？BA)，0.1？50mg/L的單一和/或混合稀土化合物，調節PH3～6.8，并進行高壓滅菌處理。(2)叢生芽增殖培養：將互葉白千層不定芽接入上述培養基中，在溫度(25±2)℃，光照為1000？50001ux的條件下，每天光照6～18小時，培養10？35天。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：李斌，
申請(專利權)人：李斌，
類型：發明
國別省市：
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