本發明專利技術涉及用于預防性和/或治療性治療哺乳動物的甲型流感病毒誘發的疾病的多核苷酸，其中所述多核苷酸包含編碼具有TRAF2和/或TRAF6結合結構域的Mx蛋白的基因。本發明專利技術還提供了轉基因動物，其具有減弱的對甲型流感病毒的易感性，表達編碼Mx蛋白的基因，所述Mx蛋白具有TRAF2和/或TRAF6結合結構域；條件是所述動物不屬于靈長目、牛科(牛屬、印度水牛、Ovis)、鰭腳目或嚙齒目的分類組。
【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術總體上涉及突變的Mx發動蛋白(dynamin),更具體地涉及利用此類Mx發動蛋白突變體預防或治療與病毒感染相關的疾病的組合物和方法。具體地，本專利技術涉及用于治療甲型流感病毒誘發的疾病、編碼經修飾的Mx蛋白的多核苷酸、所述經修飾的Mx蛋白以及表達編碼經修飾的Mx蛋白的基因的轉基因動物。背景產生了許多疫苗，并且驗證了所述疫苗預防與人和動物的病毒感染相關的癥狀和死亡率。由于被靶向的病毒的持續遺傳進化，這些疫苗中的一些疫苗必須經常更新，特別是目的在于預防可歸因于甲型流感病毒的癥狀和死亡率的那些疫苗。用于制備更新的疫苗的 病毒株系的這樣的反復更新阻礙了大量疫苗的及時產生。此外，此類反復更新和確保此類疫苗的快速和廣泛分配及施用所必需的供應鏈的生產成本通常阻止了豬、雞、火雞或馬工業及時充足地接種所有被靶向的動物。在人中，僅金剛烷(金剛烷胺，金剛乙胺)和神經氨酸酶的抑制劑(奧司他韋，扎那米韋)可用于治療與甲型流感病毒相關的疾病。此類分子的大規模使用迅速導致抗性病毒株的出現。例如，大部分循環甲型流感病毒株目前抗金剛烷并且抗神經氨酸酶的抑制劑的H5N1株的流行持續增加。因此，能夠緩和人的甲型流感病毒相關疾病的化學治療分子是非常缺乏的。在人中，提出了使用單克隆抗體來抵抗病毒疾病的。然而，由于此類分子包含非人區段，因此它們通常引起過敏反應。此外，由于許多病毒被賦予用于逃避新型治療分子的非常有效的遺傳進化能力，因此預期的來自開發新型抗病毒單克隆抗體的方法的成本/效益比明顯阻礙了新型分子的發現。在人中，基因療法是抵抗疾病的替代性方法，如過去對于遺傳疾病、癌癥或病毒疾病所顯示的方法(參見PCT公布號W091/02805、EP O 415731和WO 90/07936)。由于基因療法中使用的載體僅轉化一部分可用于病毒擴增的宿主細胞，因此可靠的抗病毒轉基因必須編碼非常強的抗病毒蛋白以給基因療法提供降低被靶向的疾病的嚴重度的任何機會。此類可靠的轉基因仍未存在。在動物中，經濟破壞性或獸傳人獸互通性病毒性接觸傳染病的傳播的預防包括大規模屠殺。今天，該衛生政策面臨重大經濟和倫理考量。在動物中，理論上仍然可能使用遺傳抗性親代(genitor)來在后代之間散播抗性性狀并且，因此，逐漸增強農場動物群體的流行病抗性。然而，該方法基于對編碼抗被靶向的疾病的先天抗性的基因座上的等位基因變異的先前鑒定。就成本/效益比而言這樣的項目是不現實的，特別地因為許多疾病抗性性狀是多基因的。在1962年，Lindenmann小組偶然發現近交小鼠品系A2G自發地抗利用對于其它品系是系統性致命的甲型流感病毒的實驗感染。新型抗性性狀被記錄為Mx，代表粘病毒抗性(myxovirus resistance)。數年后發現，Mx+性狀在干擾素α / β (IFN α / β )治療后與約78kDa的蛋白質(此后命名為Mx蛋白)的表達共分離。自那以來，分子遺傳學研究導致首先在小鼠中，然后在人中以及隨后在所有研究的脊椎動物物種中鑒定了引起Mx蛋白表達的基因。根據序列同源性，已顯示脊椎動物Mx蛋白為大的發動蛋白樣GTP酶。發動蛋白組成了在許多細胞過程(其中有遷移、膜重塑、胞吞、小泡運輸以及細胞和細胞器的分裂)中起著至關重要的作用的高分子量GTP酶的亞家族。在發動蛋白分子中，有一些不存在典型的普列克底物蛋白(pleckstrin)和富含脯氨酸/精氨酸的結構域并且其表達受I型干擾素控制；此類蛋白稱為“Mx”發動蛋白。每一個脊椎動物物種具有2個或3個Mx基因，已在體外顯示其少數等位基因形式編碼被賦予抗病毒活性(最常見地是抗甲型流感病毒)的Mx發動蛋白。其它研究顯示Mx發動蛋白的一些形式被賦予抗病毒性質以及靶向不同的病毒(取決于研究的Mx同種型)。定向誘變研究后來顯示Mx發動蛋白的C末端GTP酶效應子結構域(GED)支持抗病毒活性和抗病毒譜。為了努力研究抗病毒活性，已獲得牛(Bos taUrUS)Mxl發動蛋白序列。利用表達牛Mxl基因的培養的細胞進行的體外測試顯示人和牛副流感_3、人和牛呼吸道合胞體、牛 病毒性腹瀉/粘膜疾病、仙臺、麻疹和腦心肌炎病毒不被牛Mxl抑制，而水泡性口炎和狂犬病病毒被其抑制。與其它Mx發動蛋白相比較，特定的抗病毒譜因而與牛Mxl發動蛋白相關，但由于現有技術已顯示其它Mx發動蛋白展示特定的抗病毒譜，這并非是意料之外的。除由小鼠Mxl+等位基因編碼的是個明顯的例外外，現有技術缺乏能夠在體內抑制甲型流感病毒感染相關疾病的Mx發動蛋白。由于甲型流感病毒在人、豬和家禽群體中持續地循環，所以人、豬或雞Mx蛋白不分別保護人、豬和雞免受嚴重的、甚至致命的流感疾病的侵害并不令人驚奇。因此將人、豬或雞抗病毒Mxl發動蛋白用于基因療法并不可行。類似地，選擇被賦予最佳等位基因(如體外測定的)的親代來逐漸產生更具抗性的雞或豬群體也不可行。相反地，將小鼠Mxl發動蛋白用于基因療法或用于產生轉基因抗流感食用動物(food animal)在理論上是可行的。然而，由于小鼠Mxl發動蛋白在系統發育上遠離人Mx蛋白，因此免疫病理學(過敏)問題可能因基于小鼠Mxl的基因療法或因含小鼠Mxl的食品的攝入而產生。此外，將鼠源化(murinized)雞肉、鼠源化火雞肉或鼠源化豬肉擺上市場無疑將引起消費者的反感。因此，高度期望將具有增強的抗病毒活性的突變型人Mx發動蛋白用于基因治療組合物。類似地，高度期望產生具有等于或優于由小鼠Mxl在體內產生的抗病毒活性的突變型食用動物Mx發動蛋白，以產生轉基因抗流感食用動物。迄今已知的所有抗流感Mx發動蛋白的抗病毒功能都是通過它們的C末端GTP酶效應子結構域(GED)產生的。TNF-受體相關因子(TRAF)形成許多銜接分子(adapter molecule),在TNF-、IL-I β , TLR和RANK受體通過它們各自的同源配體銜接后，所述銜接分子首先與激活的受體接觸，用作激酶和被招募至激活的受體的其它效應蛋白的停靠分子。TRAF隨后調節受體-配體復合物的亞細胞再定位并且通過控制途徑中的關鍵蛋白的降解來調節應答的性質和程度。通過這樣的作用，TRAF控制蛋白激酶級聯以及NF-kB和AP-I家族的轉錄因子的激活，從而調諧參與增殖、分化和細胞凋亡的眾多基因的轉錄。現有技術缺乏抑制病毒增殖和/或消除或減弱病毒疾病相關的細胞因子應答和器官功能障礙的方法。因此本專利技術的目的是提供動物，優選轉基因動物，所述動物具有減弱的對甲型流感病毒的易感性。目的還在于提供用于預防性和/或治療性治療甲型流感病毒誘發的疾病的藥物。此外，本專利技術的目的因而也在于提供用于預防性和/或治療性治療甲型流感病毒，特別是用于人用途的藥物。專利技術概述在根據本專利技術的研究中，令人驚訝地已發現在體外，與其它Mx發動蛋白相比較，牛Mxl發動蛋白展示出曾經鑒定的最強的抗甲型流感病毒活性。此外，由該特定Mx發動蛋白產生的特別強的抗甲型流感病毒活性在體內得到了確認，從而提供了用于預防或治療甲型流感病毒相關疾病的最可靠的分子。如根據現有技術所預期的，有人假設該前所未有的抗病毒活性由蛋白質的C末端區段、所謂的GED支持。然而，本專利技術人驚訝地發現，用被賦予弱抗甲型流感病毒活性的任何Mx發動蛋白的GED置換牛Mxl中的G本文檔來自技高網...
【技術保護點】
【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】
【專利技術屬性】
技術研發人員：D·德斯梅克特，A·M·L·G·考納特，
申請(專利權)人：列日大學，
類型：
國別省市：
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