一種防治老年癡呆癥復合疫苗及其制備方法技術

本發明專利技術屬生物制品領域，涉及一種預防、治療老年癡呆癥的復合疫苗，由編碼Aβ42的核酸疫苗與蛋白基因工程疫苗混合組成，經實驗證實，本發明專利技術利用原核表達的Aβ42蛋白抗原與pVAX-Aβ42質粒共免疫，改進了現有技術的老年癡呆癥蛋白疫苗，能產生高水平的抗Aβ抗體IgG，同時引起了T細胞反應的抑制，且可持續相當長一段時間；所述共免疫產生的針對Aβ的抗體具有結合Aβ蛋白纖維以及APP/PS1老年癡呆癥轉基因發病小鼠腦內天然Aβ蛋白沉淀的功能，顯示其清除Aβ沉淀的能力；本發明專利技術的疫苗是一種極具潛力的、有效的、無副作用的疫苗，可用于預防、治療老年癡呆癥。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬生物制品領域，涉及。
技術介紹
癡呆癥屬于腦部疾病，是由于腦部不正常的退化引起的疾病。有統計顯示，患者多為老年人，臨床表現為患者由于大腦功能衰退，無論在記憶、運算、學習、理解、甚至語言、判斷力、方向感等方面都受到影響。該疾患不僅患者自身痛苦，對于其家庭乃至整個社會都會造成極為消極的影響。隨著老齡人的增多，老年性癡呆癥患者也在不斷增加。阿爾茨海默病(Alzheimer’ s disease,AD)即老年癡呆癥是退行性癡呆癥的一種常見形式。目前全世界大約有2500萬以上的AD患者。由于其發病年齡段的特點，備受處于老齡化階段國家的重視，因此，對于AD的研究意義重大。大量研究證實，中樞神經系統的退行性疾病通常是由于某種蛋白的異常所導致，目前已認識到，與退行性癡呆癥密切相關的有三種最重要的蛋白， 分別是淀粉質前體蛋白(amyloid precursor protein, APP)、Tau 蛋白和 a-synuclei (核突觸蛋白_α )。所述關鍵蛋白的明確為退行性腦部疾病種類的劃分提供了依據；上述阿爾茨海默病(AD)被歸為與淀粉質前體蛋白(APP)代謝紊亂相關的一類退行性癡呆癥。迄今為止，AD發病的確切機理尚未完全清楚，APP異常致病論也不是唯一的理論，但有一點可達到共識，就是由APP產生的淀粉樣蛋白-(amyloidP -peptide, Αβ )在AD的病理學上起了重要作用，即β淀粉樣蛋白神經元毒性引起神經元退行的學說仍占主導地位；該學說的機理總結為AD患者主要的病理改變有二，一是病變部位神經元胞漿內出現神經纖維纏結(neuro-fibrilIary tangles, NFT), 二是產生老年斑(senile plaques, SP)。研究顯示，神經纖維纏結的主要成分是以成對雙螺旋絲樣結構形成聚集的異常磷酸化的Tau蛋白；Tau蛋白是一種與微管蛋白有關的磷蛋白，位于神經元的突觸上，在成人腦中，正常情況下，Tau蛋白通過與微管蛋白結合而刺激微管蛋白集聚，并幫助維持和穩定細胞內骨架；當Tau蛋白過度磷酸化、異常糖基化、異常糖化、泛素蛋白化或所含微管結合基序的數目減少都會影響Tau蛋白與微管的結合，使神經纖維退化。有研究顯示，AD患者腦內可見Tau蛋白的過度磷酸化或異常磷酸化，且患者腦組織中的微管集聚功能明顯受損。另一方面，老年斑的成分是Αβ，Αβ由APP產生，中樞神經系統神經元、星形細胞、小膠質細胞、少突膠質細胞、內皮細胞均能表達APP ;正常情況下，Aβ僅有極少量的表達；低濃度的Αβ對未分化、不成熟的神經元有營養作用，而高濃度的Αβ對已分化的成熟的神經元則有毒性作用。已知Αβ的沉淀與APP的過度表達和異常加工有關；APP經β，Y分泌酶降解產生Αβ生成可溶性和不可溶性兩種狀態，不溶的以β折疊為主，上述構象有利于Aβ的聚集。Αβ在形成高密度、纖維狀的聚合體后可引起神經毒性，包括直接的毒性和增強、放大各種傷害性毒性，從而妨礙神經細胞的正常生長與傳導，最終導致神經細胞的死亡，引發AD。另有關轉基因小鼠的研究顯示，APP和Tau蛋白的突變都會導致Tau沉淀神經纖維纏結，但其產生的淀粉樣斑塊在結構和數量上卻完全不同，所述結果也進一步說明在AD的發展進程中APP的改變先于Tau的改變。當前，有越來越多的證據表明，Aβ分解代謝和清除中遺傳性改變罹患晚發型AD的危險大大增加，該證據都為A β致病說提供了依據。所述的阿爾茨海默病的發生最終歸根于神經組織受損，而導致這一事件發生的原因可能不是單一的方面，β淀粉樣蛋白的神經毒作用表現為多種因素導致AD發病的共同通路，錯誤折疊的Αβ導致AD的病理和臨床表現；AD的病因有多種推測，比如環境、遺傳、體內某些化學因素等。目前，通過對AD患者病變部位的免疫學和生物化學方面的研究發現，病變部位小膠質細胞及星形細胞高度活化，補體亦有產生，另外還有一些炎癥細胞因子、急性期反應物質、蛋白酶及蛋白酶抑制劑增高。上述研究結果充分說明炎癥反應與AD的病變有著密切關系，因此有觀點認為AD的神經元損害大多為機體對病原體、β淀粉樣蛋白、神經纖維纏結的炎性反應所致；炎性反應中，吞噬作用不僅吞噬病原體、β淀粉樣蛋白、神經纖維纏結等，造成旁觀神經元的損傷而產生更多的病灶，同時，活化的小膠質細胞及補體激活產生的炎癥細胞因子等使炎癥反應維持并不斷的增強，形成一個惡性循環。AD的許多促發因素如遺傳、環境因素等誘發的初始病變一旦形成即可激發炎癥反應，惡化后則導致更多的神經元死亡，產生更多病灶，繼而激發更多的炎癥反應，則AD病情急劇加重。還有研究證實，AD的神經病理組織中存在IL1、IL2、IL6、TNF、TGF等細胞因子的高表達；所述的細胞因子可直接導致神經元細胞的死亡和凋亡，還可通過促使細胞黏附分子、補體分·子、載脂蛋白Ε、ΑΡΡ、Αβ的表達產生急性炎癥反應，促進可溶性Aβ形成難溶性纖維等加劇AD的病理過程。此外，小膠質細胞、星形細胞和單細胞是腦內主要的免疫細胞，這些免疫細胞具有雙重作用當與淀粉樣老年斑接觸后即發生活化、合成、分泌細胞因子、炎性蛋白或蛋白酶抑制劑，促進Αβ肽的積累，導致神經元損傷和免疫功能下調；但彌散性的神經膠質細胞或單細胞卻可通過溶酶體途徑降解Aβ肽。目前已有研究證實，Αβ纖維可作為一種免疫信號，促進小膠質細胞的吞噬作用去除Αβ纖維。上述Αβ特異性的免疫反應可能代表了一種自然防御機制，以抵抗淀粉樣物質的沉積，但這些免疫機制在重癥AD患者中都呈降低趨勢。目前，臨床對于老年癡呆癥的治療，首先考慮的是對癥治療，如，應用修復受損神經元的藥物改善臨床癥狀神經節苷脂能有效修復受損或瀕死的腦神經細胞，促進神經的修復再生及神經網絡的重塑；膽堿酯酶抑制劑、腦代謝激活劑、抗抑郁藥物等有助于活血通絡，改善腦循環。現已知腦內乙酰膽堿含量與記憶密切相關，老年人或癡呆病人腦內乙酰膽堿量減少，補充膽堿類藥物能改善其記憶和思維能力；但是，對癥治療可以說只是緩解，治標不治本，因而基于AD致病機理的治療方法因其本領域研究者的關注，主要是針對A β形成的沉淀，比如，由于β、Y分泌酶是APP形成A β肽的兩個關鍵的酶，因此抑制任何一個酶都可以阻斷Αβ肽的產生，故β、Y分泌酶的抑制劑藥物的篩選成為一種重要的手段；再者，就是老年癡呆癥疫苗的研發；1999年Schenk首次應用PDAPP轉基因小鼠，證實接種化學合成的Αβ 42，可以減少腦內Αβ，腦內無老年斑沉積、神經元失營養和星形膠質細胞炎癥，同樣還具有治療效果，AD主動免疫治療方法的探究由此開始了新紀元；繼而，又有諸多科學家通過A β免疫的方法減輕了動物AD的病理特征，由此可見，在AD動物病理模型中，通過主動免疫確實可以預防和減輕腦內Αβ沉積。2001年，新疫苗ΑΝ-1792(合成的人Αβ 42肽)在100余例輕度到中度AD患者中進行了 I期臨床試驗，不同劑量給藥后，人體均能較好地耐受，相當數量的患者還產生了較強的體液免疫反應；上述結果使ΑΝ-1792順利進入II期臨床試驗。然而，2002年3月，在參加II期臨床試驗的360個病人中，有15人先后出現了中樞神經系統非細菌性炎癥，2例出現了局部缺血性中風，該項臨床試驗因而被迫終止。有研究進一步證明，所述非菌性腦炎可能為T細本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種防治老年癡呆癥復合疫苗，包括活性成分和基質，其特征在于，所述的活性成分是以下物質：(1)Aβ42蛋白基因工程疫苗，(2)編碼Aβ42的核酸疫苗；所述的Aβ42蛋白基因工程疫苗的用量為100μg或200μg；所述的編碼Aβ42的核酸疫苗的用量為100μg。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：王賓，于楊，朱賢主，王爽，
申請(專利權)人：復旦大學，
類型：發明
國別省市：