檢測殘留苯乙醇胺A的酶聯(lián)免疫試劑盒及其使用方法技術

本發(fā)明專利技術公開了檢測殘留苯乙醇胺A的酶聯(lián)免疫試劑盒及其使用方法，屬于酶聯(lián)免疫吸附分析方法技術領域。所述試劑盒包括：包被苯乙醇胺A抗原的酶標板、苯乙醇胺A標準品工作液、苯乙醇胺A抗體工作液、苯乙醇胺A酶標二抗工作液、底物液、終止液、濃縮洗滌液和濃縮樣品稀釋液。本發(fā)明專利技術的試劑盒采用間接競爭酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA)方法，標準品或待測樣本殘留的苯乙醇胺A和酶標板上預包被的抗原共同競爭苯乙醇胺A抗體。該方法可以用于直接檢測動物源性食品、尿樣、動物組織和血清樣品中的苯乙醇胺A，具有方便、快速、靈敏等特點，適用于大批量樣品檢測，本試劑盒靈敏度0.1ng/mL。

【技術實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術公開了一種檢測動物組織及其代謝物中苯乙醇胺A的酶聯(lián)免疫試劑盒及其檢測方法，屬于酶聯(lián)免疫吸附分析方法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA )
本專利技術涉及用于檢測動物源食品、血液及尿液中殘留的苯乙醇胺A的含量的酶聯(lián)免疫試劑盒及使用該試劑盒的檢測方法。
技術介紹
苯乙醇胺A(Phenylethylamine, PEA)又稱為克倫巴胺,學名為2_[4_ (4_硝基苯基)丁基-2-基氨基]-I-甲氧基苯乙醇，是一種人工合成的化學物質(zhì)。化學結構式如下

【技術保護點】
一種檢測殘留苯乙醇胺A的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于包括酶標板96孔、苯乙醇胺A標準品工作液、苯乙醇胺A抗體工作液、苯乙醇胺A酶標二抗工作液、底物液、終止液、濃縮洗滌液和濃縮樣品稀釋液；？？？？其中，所述酶標板是包被苯乙醇胺A抗原的酶標板，苯乙醇胺A抗原是用0.05？mol/L？？pH？9.6的碳酸鹽包被緩沖液稀釋成1:8000比例，100微L/孔，37℃，2h，取出4℃放置過夜；取出酶標板甩掉板內(nèi)液體，用稀釋后的濃縮洗滌液300微L/孔，洗板3次，1min/次；然后加入0.5%？BSA封閉，150微L/孔，37℃放置2h；取出酶標板甩掉板內(nèi)液體，用潔凈的毛巾包裹后拍干板內(nèi)殘留液體；將拍干后的酶標板整齊地擺放置GMP車間恒溫25℃晾干；抽檢要求板內(nèi)孔與孔之間，板間的OD值變異系數(shù)均小于10%；檢驗合格后將酶標板密封后置4℃下保存；？？？？其中，所述苯乙醇胺A標準品的濃度分別為0？ng/mL、0.1？ng/mL、0.3？ng/mL、0.9？ng/mL、2.7？ng/mL、8.1？ng/mL；？？？？其中，所述苯乙醇胺A抗體工作液是用抗體稀釋液稀釋成1:10000比例；所述苯乙醇胺A酶標二抗工作液是用酶標二抗稀釋液稀釋成1:2000比例；所述底物液包含0.05？mol/L的NaHPO4·12H2O、0.025？mol/L的一水檸檬酸(C6H8O7·H2O)、0.2？mmol/L的3,3,5,5？四甲基聯(lián)苯胺？、0.5？mmol/L的過氧化氫脲和5%的N,N？二甲基甲酰胺；所述終止液是2？mol/L的硫酸(H2SO4)；所述濃縮洗滌液是20倍濃縮洗滌液，其包含0.05%吐溫？20，0.01？mol/L的PBST，pH值范圍7.0？7.5之間；所述濃縮樣品稀釋液是2倍濃縮稀釋液，其成分為0.01？mol/L，pH7.4磷酸鹽PBS緩沖液。...

【技術特征摘要】
1.一種檢測殘留苯乙醇胺A的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于包括酶標板96孔、苯乙醇胺A標準品工作液、苯乙醇胺A抗體工作液、苯乙醇胺A酶標二抗工作液、底物液、終止液、濃縮洗滌液和濃縮樣品稀釋液； 其中，所述酶標板是包被苯乙醇胺A抗原的酶標板，苯乙醇胺A抗原是用0.05 mo I/LpH 9. 6的碳酸鹽包被緩沖液稀釋成1:8000比例，100微 L/孔，37°C，2h，取出4°C放置過夜；取出酶標板甩掉板內(nèi)液體，用稀釋后的濃縮洗滌液300微 L/孔，洗板3次，Imin/次；然后加入O. 5% BSA封閉，150微 L/孔，37°C放置2h;取出酶標板甩掉板內(nèi)液體，用潔凈的毛巾包裹后拍干板內(nèi)殘留液體；將拍干后的酶標板整齊地擺放置GMP車間恒溫25°C晾干；抽檢要求板內(nèi)孔與孔之間，板間的OD值變異系數(shù)均小于10% ;檢驗合格后將酶標板密封后置4°C下保存； 其中，所述苯乙醇胺A標準品的濃度分別為O ng/mL、0. I ng/mL、0. 3 ng/mL、0. 9 ng/mL、2. 7 ng/mL、8. I ng/mL ； 其中，所述苯乙醇胺A抗體工作液是用抗體稀釋液稀釋成1:10000比例； 所述苯乙醇胺A酶標二抗工作液是用酶標二抗稀釋液稀釋成1:2000比例； 所述底物液包含O. 05 mo I/L的NaHPO4 · 12Η20、0· 025 mo I/L的一水檸檬酸(C6H8O7 ·Η20)、0· 2 mmol/L的3, 3, 5, 5-四甲基聯(lián)苯胺_、0· 5 mmol/L的過氧化氫脲和5%的N, N-二甲基甲酰胺； 所述終止液是2 mol/L的硫酸(H2SO4)； 所述濃縮洗滌液是20倍濃縮洗滌液，其包含0. 05%吐溫-20，0. 01 mol/L的PBST，pH值范圍7. 0-7. 5之間； 所述濃縮樣品稀釋液是2倍濃縮稀釋液，其成分為0. 01 mol/L, pH7. 4磷酸鹽PBS緩沖液。2.權利要求I所述檢測殘留苯乙醇胺A的酶聯(lián)免疫試劑盒的使用方法，其特征在于該方法包括以下步驟 (1)預處理待測樣品，即將待測試的樣品處理為液體樣品，或者用有機溶劑提取待測樣品，氮氣吹干并將其復溶于樣品稀釋液工作液中； (2)將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置于室溫20 25°C平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻； (3)取包被苯乙醇胺A抗原的酶標板，加標準品/樣本50mL/孔到對應的微孔中； (4)加入苯乙醇胺A抗體工作液，50mL/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后...

【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：杜道林，洪霞，張禎，薛永來，
申請(專利權)人：江蘇維賽科技生物發(fā)展有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：