莠去津分子印跡金標試紙條及其用途制造技術

本發明專利技術公開了一種莠去津分子印跡金標試紙條，包括底板、包被完全競爭原的硝酸纖維素膜、吸水濾紙、膠體金墊、陰性對照樣品墊和待測樣品墊，包被完全競爭原的硝酸纖維素膜中包被的是莠去津人工完全競爭原，莠去津人工完全競爭原是莠去津不完全競爭原與高分子載體的偶聯物；高分子載體為以下任意一種：分子量M=1000～50000的聚酰胺-胺樹枝狀高分子；聚合度n=200～5000的聚丙烯酰胺；聚合度?n=100～2000的聚酰胺環氧氯丙烷；分子量M=1000～50000的葡聚糖。本發明專利技術還同時公開了上述莠去津分子印跡金標試紙條的用途：用于待測樣品中痕量莠去津的高選擇性富集、分離或檢測。

【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及一種基于納米分子印跡的金標快速檢測試紙條，該試紙條適用于復雜基質樣品中痕量莠去津的高選擇性富集、分離和檢測。
技術介紹
莠去津(商品名阿特拉津，atrazine)，化學名稱為2-氯-4-二乙胺基-6-異丙胺基-1，3，5-三嗪，是三嗪類除草劑中常見的一 種，屬選擇性內吸傳導型苗前、苗后除草劑，以根部吸收為主，莖葉吸收很少，植物吸收后能迅速傳導到植物分生組織及葉部，干擾光合作用使雜草致死，用于防除一年生禾本科雜草和闊葉雜草，對多年生雜草也有一定的抑制作用。至今仍在玉米和谷物的種植中被廣泛使用，對地下水等污染較為嚴重，目前已被定為環境荷爾蒙的可疑物質之一。由于莠去津的長期廣泛使用，其在農產品和環境中的殘留污染問題日益受到人們的關注。目前該藥的主要檢測方法為氣相色譜法、液相色譜法等，雖然方法靈敏度較高，但樣品前處理步驟較多，相對費時費力，尤其是在復雜基質樣品中的殘留分析。因此，這就需要尋求對待測物具有簡單、快速、靈敏及價廉的檢測技術，能在野外和實驗室內進行大批量的篩選試驗。免疫化學分析技術正是由于具備這些優點，已成為最有應用價值和發展潛力的痕量分析技術之一。尤其是酶聯免疫吸附測定(ELISA)試劑盒和金標試紙條等免疫化學方法。然而，免疫化學技術雖然比儀器分析技術簡單快速，但前期研發費用較高，同時，高親和力和高特異性抗體的制備是一個相對比較復雜而且費時的過程，容易受生物和環境因素的影響，且不易保存、抗惡劣環境能力差、易受基質干擾、穩定性差、一般不能重復。因此，在農產品農藥殘留檢測方面迫切需要更好的快速檢測技術。分子印跡技術已被認為是制備高選擇性分離介質的有效手段。作為新型功能高分子材料，分子印跡聚合物(molecularly imprinted polymer, MIP)與常規的分離或分析介質相比，其突出的優勢是對被分離物或分析物具有較高的選擇性和親和性；與生物活性材料相比，又具有制備方便、耐受性好、能重復利用等特點。分子印跡技術在農藥殘留檢測中的應用始于1995年日本科學家MATSn使用本體法成功制備莠去津的分子印跡聚合物。近年來，納米分子印跡技術的應用，使得分子印跡技術在農藥殘留檢測領域發展迅速，運用于檢測的農藥品種大量增多。三嗪類是眾多學者最早也是最多用于進行MIP研究的農藥，對其的研究涉及到MIP技術的各個方面，包括聚合物的制備、MIP-SPE/SPME聯用、分子印跡傳感器、分子印跡膜等眾多領域。以莠去津分子為例，其分子與MAA作用形成分子印跡聚合物的原理如圖I所示。莠去津分子中三嗪環上的N原子與MAA中的H原子通過氫鍵并在交聯劑、引發劑以及致孔劑的作用下結合在一起，形成網狀的高聚物。通過加入極性溶劑破壞兩者之間的氫鍵以除去模板分子，留下具有特殊空穴的支架結構聚合物可以吸附莠去津分子。在極性較低的環境下，兩者可以通過氫鍵重新結合，以達到其檢測目標分子的目的。有研究者將膜輔助溶劑萃取-分子印跡吸附技術聯用(MASE-MISPE)，用于測定食品中三嗪類農藥多殘留；還有人利用特丁津印跡聚合物對環境水和底泥樣品中的微量氯代三嗪類農藥(去異丙基莠去津、莠去津、西瑪津、莠去津、撲滅津、特丁津)進行選擇性富集。目前，國內外有關有機磷農藥MIP的研究日益增多，涉及多種有機磷農藥。例如,有人通過表面印跡的方法制備毒死蜱的MIP,在粒徑約為200nm的二氧化硅球表面進行聚合反應，得到厚度約為40nm的印跡物層，將該聚合物結合化學發光技術進行研究，檢測蔬菜樣品中的毒死蜱，結果顯示，將所得MIP與化學發光技術結合后，不僅顯著提高了檢測靈敏度和特異性，而且有較好的重復性，其對毒死蜱的LOD值達到O. 92nM，是常規發光反應的2倍，且該聚合物重復使用200次以上性質沒有發生改變。一些學者通過沉淀聚合法制備草甘膦的印跡聚合物，然后將聚合物固定于微板表面，制成化學發光分子印跡傳感器，這種傳感器可以在10分鐘內同時進行96次獨立測量，其對草甘膦的LOD值可以達到O. 046μ g/mL。此外，還有對對硫磷、三唑磷、敵敵畏等的MIP研制報道。除三嗪類和有機磷類農藥外，部分學者對其它種類的農藥進行MIP的制備研究，例如，在金柱電極表面印跡氨基甲酸酯類農藥速滅威，形成厚度約為IOOnm的分子印跡膜，進而組裝成為可用于食品中速滅威檢測的電流分析傳感器，其對速滅威檢測的LOD值達到I. 34X 10_8mol/L ；再如通過表面印跡的方法，制備除草劑2，4-D的MIPjf 2，4-D的吸附效率可以達到73%。納米分子印跡技術根據其空間結構的不同可以分成三種類型，包括0-2維三種(0-2D, 0-2dimensional),上述納米微球屬于OD結構，ID結構指分子印跡纖維,分子印跡納米串等，2D結構包括分子印跡膜、分子印跡磁片、納米管等高級結構。近十幾年來，這些結構本身或結合傳感器、金屬離子等其它技術后運用于農藥檢測領域，也取得了較好的結果。自1971年Faulk和Taylor將膠體金引入免疫化學后，免疫膠體金技術作為一種新的免疫技術，在醫學、動植物檢疫、食品安全監督各領域得到了日益廣泛的應用。金標免疫技術具有其獨特的優勢不需要任何設備、操作人員不需要復雜培訓、簡便快速、5 30分鐘出結果、且結果可目測、攜帶方便、價格低廉、無污染、適合現場的批量樣品的篩選定性使用。因此，該技術在農產品(特別是附加值較低的產品)安全檢測上具有良好的應用前景。然而，由于其是基于抗原一抗體反應的檢測技術，具備免疫化學檢測技術的缺點，應用起來仍然有很多困難。而MIT技術在具備抗體的高親和力和高特異性特點的同時，由于其核心部件MIPs是一種化學材料，克服了生物材料在實際使用中不易保存、不可重復利用等問題。若能將此兩種技術結合起來，以MIP替代生物抗體，建立起全新的基于分子印跡的金標試紙條快速測定技術，實現農藥殘留高效富集和分子印跡檢測，其結果不僅具有重要的學術意義，而且更具有應用價值。當前，基于抗體的納米金標沉析技術和分子印跡技術在生命科學、環境化學等領域屬研究熱點，國內外研究報道很多。但用化學合成的分子印跡聚合物和其它高分子材料分別替代生物抗體和載體生物蛋白，結合納米金沉析技術，開展完全意義上的化學合成材料的金標試紙條研究，在生命科學、環境化學、食品科學、農藥科學等應用領域國內外均未見報道。
技術實現思路
本專利技術要解決的技術問題是提供一種基于莠去津納米MIP的金標化學試紙條(即，莠去津分子印跡金標試紙條)及其用途。為了解決上述技術問題，本專利技術提供一種莠去津分子印跡金標試紙條，包括底板、包被完全競爭原的硝酸纖維素膜、吸水濾紙、膠體金墊、陰性對照樣品墊和待測樣品墊；包被完全競爭原的硝酸纖維素膜中包被的是莠去津人工完全競爭原，該莠去津人工完全競爭原是莠去津不完全競爭原與高分子載體的偶聯物；高分子載體為以下任意一種分子量M=IOOO 50000的聚酰胺-胺樹枝狀高分子(PAMAM)；聚合度n=200 5000的聚丙烯酰胺(PAM)；聚合度n=100 2000的聚酰胺環氧氯丙烷(PAE)；分子量M=IOOO 50000的葡聚糖。作為本專利技術的莠去津分子印跡金標試紙條的改進利用莠去津人工完全競爭原在硝酸纖維素(NC)膜上劃線，從而獲得用于待測樣品檢測的檢測線以及用于陰本文檔來自技高網...

【技術保護點】
莠去津分子印跡金標試紙條，包括底板、包被完全競爭原的硝酸纖維素膜（4）、吸水濾紙（7）、膠體金墊（3）、陰性對照樣品墊（1）和待測樣品墊（2），其特征在于：所述包被完全競爭原的硝酸纖維素膜（4）中包被的是莠去津人工完全競爭原，所述莠去津人工完全競爭原是莠去津不完全競爭原與高分子載體的偶聯物；所述高分子載體為以下任意一種：分子量M=1000~50000的聚酰胺？胺樹枝狀高分子；聚合度n=200~5000的聚丙烯酰胺；聚合度n=100~2000的聚酰胺環氧氯丙烷；分子量M=1000~50000的葡聚糖。

【技術特征摘要】
1.莠去津分子印跡金標試紙條，包括底板、包被完全競爭原的硝酸纖維素膜(4)、吸水濾紙(7 )、膠體金墊(3 )、陰性對照樣品墊(I)和待測樣品墊(2 )，其特征在于 所述包被完全競爭原的硝酸纖維素膜(4)中包被的是莠去津人工完全競爭原，所述莠去津人工完全競爭原是莠去津不完全競爭原與高分子載體的偶聯物； 所述高分子載體為以下任意一種 分子量Μ=100(Γ50000的聚酰胺-胺樹枝狀高分子； 聚合度η=20(Γ5000的聚丙烯酰胺； 聚合度η=10(Γ2000的聚酰胺環氧氯丙烷； 分子量Μ=100(Γ50000的葡聚糖。2.根據權利要求I所述的莠去津分子印跡金標試紙條，其特征在于利用所述莠去津人工完全競爭原在硝酸纖維素膜上劃線，從而獲得用于待測樣品檢測的檢測線(6)以及用于陰性樣品檢測的質控線(5)，所述檢測線(6)和質控線(5)相互隔離。3.根據權利要求2所述的莠去津分子印跡金標試紙條，其特征在于所述膠體金墊(3)是以納米級莠去津分子印跡聚合物標記上納米金顆粒作為金探針固定于結合墊上所得。4.根據權利要求3所述的莠去津分子印跡金標試紙條，其特征在于 所述莠去津人工完全競爭原的制備方法包括以下步驟 ①、將莠去津不完全競爭原溶解于N，N—二甲基甲酰胺中，加入N-羥基琥珀酰亞胺反應l(T20mi...

【專利技術屬性】
技術研發人員：桂文君，謝蓉，郭逸蓉，劉菲菲，朱國念，
申請(專利權)人：浙江大學，
類型：發明
國別省市：