一種特殊熒光標記免疫定量檢測試紙條制造技術

本實用新型專利技術涉及一種特殊熒光標記免疫定量檢測試紙條。該試紙條底襯上依次相互搭接的是兩層樣品墊、熒光抗體結合墊、硝酸纖維素膜和吸水紙，熒光抗體結合墊上包被有兩種或兩種以上抗抗原的熒光抗體，硝酸纖維素膜上設有兩種或兩種以上抗抗原的抗體一條或多條檢測線，一條檢測線包被一種抗抗原的抗體或一種以上抗抗原的抗體，硝酸纖維素膜上還設有兔抗鼠IgG抗體的質控線。本實用新型專利技術試紙條具有靈敏度高，能夠實現對兩個或兩個以上指標進行快速定量檢測。（*該技術在2022年保護過期，可自由使用*）

【技術實現步驟摘要】

本技術屬于臨床醫學檢測領域，具體涉及一種特殊熒光標記免疫定量檢測試紙條。
技術介紹
熒光免疫分析技術是在標記免疫技術中逐漸發展起來的一種基于抗原-抗體反應的分析技術。其誕生早期，一些研究者試圖將抗體分子與一些示蹤物質結合，利用抗抗原抗體反應進行組織或細胞內抗原物質定位。Coons等于1994年首次將熒光素進行用于抗體的標記而獲得成功。這種以熒光物質標記抗體而進行抗原定位的技術成為熒光抗體技術(fluorescent antibody technique)。 與傳統酶聯免疫吸附法和膠體金法相比，應用熒光免疫分析技術進行檢測時，其信號特異性強、敏感度高、速度快，特別適合于體外快速診斷領域。目前市場上提供了免疫熒光試紙條一般只能用于一個指標的檢測，不能滿足同時檢測多個指標的要求。技術中國專利201020650783. 5提供了一種免疫熒光試紙條，由依次設置在外殼上相互搭接的樣品墊、反應膜和吸水墊組成，所述反應膜上固定有一條內部質控帶，至少一條的檢測帶和一條過量抗原檢測帶，其中內部質控帶固定有定量的抗原或抗體物質，檢測帶固定有可與待測物質特異性結合的抗體，過量抗原檢測帶固定有二抗。該試紙條可以實現單一或多個項目聯合檢測。但是在具體實施例中，并沒有舉例說明該試紙條能夠同時多個項目的聯合檢測。此外，該試紙條沒有包被熒光抗體熒光抗體結合墊的結構，而是將熒光抗體配制成溶液，這樣增加了操作和誤差的可能性。雖然已經有多個指標聯合檢測的試紙條，如中國專利01242327. O提供了一種膠體金試紙條。膠體金試紙條存在顯色后只能是單一的紫紅色，而不能根據不同品種或不同要求變化顏色，以及不能準確定量檢測等不足。
技術實現思路
為了克服上述現有技術不足，本技術提供一種特殊熒光標記免疫定量檢測試紙條，使用本技術能夠實現同時檢測兩個或兩個以上指標的問題。本技術的技術方案為一種特殊熒光標記免疫定量檢測試紙條，在其底襯上依次相互搭接的是兩層樣品墊、熒光抗體結合墊、硝酸纖維素膜和吸水紙，所述熒光抗體結合墊上包被有兩種或兩種以上抗抗原的熒光抗體，所述硝酸纖維素膜上設有兩種或兩種以上抗抗原的抗體一條或多條檢測線，所述一條檢測線包被一種抗抗原的抗體或一種以上抗抗原的抗體，硝酸纖維素膜上還設有兔抗鼠IgG抗體的質控線。所述突光抗體是一種突光物質標記一種抗抗原的抗體或一種以上抗抗原的抗體。所述標記抗體的熒光物質為直接熒光染料或磁性納米顆粒中的任意一種可產生熒光的物質。所述熒光抗體結合墊材質為聚酯膜或玻璃纖維素膜。本技術在檢測試紙條時，可以使用激光、鹵鎢燈+單色器、多色器或高功率LED作為光源，激發試紙條上的熒光物質發出熒光。本技術熒光信號的讀取裝置可使用光電二極管、CCD或光電倍增管對信號進行讀取。與現有技術相比，本技術采用熒光抗體結合墊上包被有兩種或兩種以上抗抗原的熒光抗體，同時在硝酸纖維素膜上設有一條或多條檢測線，實現對兩個或兩個以上指標同時進行檢測。進一步，一條檢測線包被一種以上抗抗原的抗體，實現了在一條檢測線上同時檢測兩個或兩個以上指標。附圖說明圖I本技術試紙條結構結構示意圖，一條檢測線上含有兩種抗抗原的抗體或兩種以上抗抗原的抗體。 圖2本技術試紙條結構示意圖，每條檢測線上含有一種抗抗原的抗體或一種以上抗抗原的抗體。其中，I、底襯；2、樣品墊；3、樣品墊；4、突光抗體結合墊；5、硝酸纖維素膜；6、吸水紙；7、檢測線；8、質控線；9、檢測線。具體實施方式以下結合附圖和實施方式對本技術作進一步詳細的說明。如圖I所示，一種特殊熒光標記免疫定量檢測試紙條，在其底襯I上依次相互搭接的是樣品墊2、樣品墊3、熒光抗體結合墊4、硝酸纖維素膜5和吸水紙6，所述熒光抗體結合墊4上包被有兩種或兩種以上抗抗原的熒光抗體，所述硝酸纖維素膜5上設有兩種或兩種以上抗抗原的抗體一條或多條檢測線7、9，所述一條檢測線7、9包被一種抗抗原抗體或一種以上抗抗原抗體，硝酸纖維素膜5上還設有兔抗鼠IgG抗體的質控線8。實施例I心肌肌鈣蛋白I (cTnl)和N-端腦利鈉前體(NT-proBNP)的檢測I)試紙條制備①硝酸纖維素膜5的制備a)包被緩沖液的制備將O. 025M、pH7. 4的PBS，用O. 22 μ m膜過濾，置于4°C備用，有效期7天；b)封閉液的制備將含1%BSA，1%蔗糖，0·025Μ、ρΗ7·5的PBS，用O. 22 μ m膜過濾，置于4°C備用，有效期3天；c)檢測線7制備將羊抗NT-proBNP多克隆抗體按2mg/ml的濃度，蠕動泵授液量O. 4ml/min，劃線速度50m/20min，在檢測線7上中部左半邊劃線；檢測線7上中部右半邊劃有cTnl單克隆抗體4C2，方法同羊抗NT-proBNP多克隆抗體，只是cTnl單克隆抗體4C2濃度為4. 5mg/ml，在干燥箱內20°C鼓風干燥12小時；d)質控線8的制備將兔抗鼠IgG抗體按8mg/ml的濃度，蠕動泵授液量O. 4ml/min,劃線速度50m/20min，在硝酸纖維素膜上劃線，該線與檢測線7平行，放入干燥箱內20°C鼓風干燥12小時；e)用上述封閉液將含有檢測線7和質控線8的硝酸纖維素膜5于37°C封閉60分鐘，取出后置37°C下烘干處理兩個小時，封袋備用。②包被熒光抗體熒光抗體結合墊4制備將cTnl單克隆抗體M155用pH7. 5 PBS溶解至終濃度為2mg/ml，取Iml抗體溶液，緩慢加入濃度為lmg/ml的熒光素Cy5 100 μ 1，4°C緩慢攪拌反應3h，常溫下繼續反應lh，待反應完全后，使用pH為7. 4的PBS進行透析,除去未反應的熒光素Cy5。開始時,每隔3h換一次透析液，更換2次以后每12h換一次透析液,透析完全后，回收偶聯好的熒光抗體，測定偶聯效率與抗體濃度后，避光保存。將NT-proBNP單克隆抗體M907241使用與cTnl單克隆抗體M155制備相同的方法，制備出標記Cy5的NT-proBNP單克隆抗體M907241，避光保存備用。將上述cTnl熒光抗體與NT-proBNP熒光抗體混合均勻，鋪在玻璃纖維素膜材質的熒光抗體結合墊4上，噴量為2 μ 1/cm3道，干燥，封袋，備用。 以上抗體除了 ΝΤ-ρι·οΒΝΡ多克隆抗體購自南京強欣生物技術有限公司，其它都是購自Fitzgerald公司。③試紙條組裝在底襯I上順次相互搭接地粘貼樣品墊2、樣品墊3、熒光抗體結合墊4、硝酸纖維素膜5和吸水紙6得到試紙板，按照要求切割成適當寬度的試紙條。2)待測抗原檢測取新鮮全血100 μ I (或血清50 μ I )，加入到試紙條樣品墊上進行免疫反應，時間3-5min;反應結束后，將試紙條放于專門的熒光信號讀取儀器中，讀取熒光信號的大小，進行定量測定。實施例2心肌肌鈣蛋白I (cTnl)和N-端腦利鈉前體(NT-proBNP)的檢測I)試紙條制備①硝酸纖維素膜5的制備a)包被緩沖液的制備將O. 025M、pH7. 4的PBS，用O. 22 μ m膜過濾，置于4°C備用，有效期7天；b)封閉液的制備將含1%BSA，1%蔗糖，0·025Μ、ρΗ7·5的PBS，用O. 22 μ m膜過濾，置于4°C備用，有效期3天；c)檢測線7制備將羊抗NT-proBNP本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種特殊熒光標記免疫定量檢測試紙條，在其底襯上依次相互搭接的是兩層樣品墊、熒光抗體結合墊、硝酸纖維素膜和吸水紙，其特征在于所述熒光抗體結合墊上包被有兩種或兩種以上抗抗原的熒光抗體，所述硝酸纖維素膜上設有兩種或兩種以上抗抗原的抗體一條或多條檢測線，所述一條檢測線包被一種抗抗原的抗體或一種以上抗抗原的抗體，硝酸纖維素膜上還設有兔抗鼠IgG抗體的質控線。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：蘇恩本，黃力，涂策，
申請(專利權)人：南京基蛋生物科技有限公司，
類型：實用新型
國別省市：