抗LRP6抗體制造技術

本發明專利技術提供了抗LRP6抗體及其使用方法。本發明專利技術的一個特別方面提供了抑制多種Wnt同等型的信號傳導的雙特異性抗LRP6抗體。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】抗LRP6抗體對相關申請的交叉引用本申請要求2010年3月24日提交的美國臨時申請No. 61/317，137和2010年10月20日提交的美國臨時申請No. 61/394，836的權益，通過提及而將其完整公開內容收入本文。專利
本專利技術涉及抗LRP6抗體及使用抗LRP6抗體治療癌癥或骨骼病癥的方法。專利技術背景 與大多數其它形態發生素和生長因子信號傳導途徑相似，哺乳動物Wnt信號傳導在發育和組織穩態期間被調動多次，這經由使用19種不同配體、10種受體和多種共同受體，包括 LRP5/6、Ror 1/2 和 Ryk 來進行(van Amerongen 和 Nusse, 2009)。另外，結合 Wnt(諸如SFRP1/2/3/4/5和WIF1)或LRP5/6 (包括DKK1/2/4和S0ST)的不同分泌性拮抗劑調控配體和受體之間的相互作用。這些膜和細胞外蛋白質及其多種同等型在表達水平和組合蛋白質相互作用方面提供差異調節。大多數fct同等型表現出能夠結合共同受體LRP5/6，而LRP5/6的參與細化了規范的或β -聯蛋白依賴性的Wnt信號傳導。Wnt將LRP5/6和FZD異二聚化以介導LRP5/6胞內域磷酸化和軸蛋白結合(Tamai等,2000 ；Semenov等,2001 ；Tamai等，2004)。DVL通過直接結合軸蛋白和FZD 二者被帶入復合物中，而DVL寡聚化很可能擴大膜的胞質面上的這些蛋白質復合物，隔絕GSK3并抑制其磷酸化和β -聯蛋白脫穩定化(Mi 等，2006 ；Bilic 等，2007 ；Schwarz-Romond 等，2007 ；Cselenyi 等，2008 ；Piao 等，2008 ;WilliamsonZeng 等，2008 ;Wu 等，2009)。極大數目的展示可觀的一級序列分歧，介導哺乳動物規范Wnt信號傳導的配體同等型與高度同源的共同受體對形成對比。LRP6和LRP5胞外域主要由四個同源區組成，從N端到C端稱作El到E4，每個含有一個YWTD型β -螺旋槳和EGF樣域(Jeon等，2001 )。LRP6和LRP5中相似位置處的每個重復是高度保守的，而同一蛋白內的不同重復是相當更加趨異的。有趣地，Bourhis等(2010)證明了 Wnt9b在體外專門在Ε1-Ε2區內結合,而Wnt3a只結合含有E3-E4的片段，提示每個重復或兩個相鄰重復的組合結合Wnt同等型的不同子集。這種安排可適應fct蛋白的多樣性，而且可能還容許LRP5/6拮抗性配體對它們的差異調節。在其胞外區分別含有重復的EGF樣和Ig域的Notch和VEGF受體中，多種配體同等型的結合定位于一個或兩個重復的同一區，盡管其它重復的存在能增強結合(Rebay等，1991 ;Davis_Smyth 等，1996 ;Cunningham 等，1997)。對于受體酪氨酸激酶，配體誘導的二聚化啟動對激酶活性和信號傳導的刺激。雖然配體誘導的受體-共同受體異二聚化是規范fct信號傳導所必需的，但是LRP5/6或FZD同二聚化的作用尚未清楚限定。不同重組LRP6蛋白的被迫二聚化能激活或抑制Wnt信號傳導。β-聯蛋白依賴性Wnt信號傳導由Wnt同等型結合受體FZD和共同受體LRP5/6 二者啟動，它們然后在胞質膜面裝配多聚體復合物以募集和滅活激酶GSK3。Wnt同等型和受體之間的不同相互作用是否及如何機械地調控這個過程仍然有待確定。專利技術概述本專利技術的一個方面提供一種結合LRP6的分離的抗體，其中該抗體抑制由第一 Wnt同等型誘導的信號傳導且強化由第二 fct同等型誘導的信號傳導。在一個實施方案中，所述第一 fct同等型選自下組Wnt3和Wnt3a。在一個實施方案中，所述第二 Wnt同等型選自下組Wnt l、2、2b、4、6、7a、7b、8a、9a、9b、10a 和 10b。在另一個實施方案中，所述第一 Wnt同等型選自下組Wnts l、2、2b、6、8a、9a、9b和IOb且所述第二 Wnt同等型選自下組Wnt3和 Wnt3a。本專利技術的一個方面提供一種結合LRP6的E3-E4區的抗體。本專利技術的另一個方面提供一種結合LRP6的E1-E2區的抗體。還有另一個方面提供一種結合LRP6的兩個不同區，諸如LRP6的E1-E2區和E3-E4區的抗體。一方面，這些抗體抑制由Wntl和Wnt3a的組合誘導的fct信號傳導。一方面，這些抗體抑制自分泌Wnt信號傳導。本專利技術的一個方面提供一種治療具有癌癥的個體的方法，包括對個體施用有效量的一種結合LRP6且抑制由選自Wnt3和Wnt3a的Wnt同等型誘導的信號傳導的分離的抗體 和一種結合LRP6且抑制由選自Wnt l、2、2b、6、8a、9a、9b和IOb的Wnt同等型誘導的信號傳導的分離的抗體。本專利技術的另一個方面提供一種治療具有癌癥的個體的方法，包括對個體施用有效量的一種結合LRP6且抑制由Wnt3和Wnt3a誘導的信號傳導的分離的抗體和一種結合LRP6且抑制由Wnt l、2、2b、6、8a、9a、9b和IOb誘導的信號傳導的分尚的抗體。本專利技術的另一個方面提供一種治療具有癌癥的個體的方法，包括對個體施用有效量的一種結合LRP6且抑制由Wnt3和Wnt3a誘導的信號傳導的分離的抗體和一種結合LRP6且抑制由Wnt l、2、2b、4、6、7a、7b、8a、9a、9b、IOa和IOb誘導的信號傳導的分離的抗體。本專利技術的一個方面提供一種治療具有骨骼病癥，諸如骨質疏松、骨關節炎、骨折和骨損傷的個體的方法，包括對個體施用有效量的本文所述抗LRP6抗體。本專利技術的另一個方面提供一種在個體中強化由一種Wnt同等型誘導的Wnt信號傳導，包括對個體施用有效量的本文所述抗LRP6抗體和該Wnt同等型以強化由該Wnt同等型誘導的fct信號傳導。還提供特異性抗LRP6抗體，包括雙特異性抗LRP6抗體。在一個實施方案中，結合LRP6的分離的抗體包含VH，該VH包含選自下組的氨基酸序列SEQ ID N0:9、SEQ ID NO: 11、SEQ ID N0:13和SEQ ID NO: 15。在一個實施方案中，該抗體進一步包含VL，該VL包含選自下組的氨基酸序列SEQ ID NO: 10和SEQ ID NO: 12。在一個實施方案中，結合LRP6的分離的抗體包含VH，該VH包含與氨基酸序列SEQ ID N0:9、SEQ ID NO: IUSEQ ID NO: 13和SEQID NO: 15具有至少90%同源性的氨基酸序列。在一個實施方案中，結合LRP6的分離的抗體進一步包含VL，該VL包含與選自下組的氨基酸序列具有至少90%同源性的氨基酸序列SEQ ID NO:10 和 SEQ ID NO:12。在一個實施方案中，抗體是一種結合LRP6的兩個不同區的分離的雙特異性抗體，其中該抗體包含VH，該VH包含選自下組的氨基酸序列SEQ ID NO:9、SEQ ID NO: IU SEQID N0:13和SEQ ID NO: 15。在一個實施方案中，雙特異性抗體包含第一 VH和第二 VH，該第一 VH包含氨基酸序列SEQ ID NO: 15，該第二 VH包含選自下組的氨基酸序列SEQ ID NO: 9，SEQ ID N0:11和SEQ I本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】...

【專利技術屬性】
技術研發人員：E博里斯，R卡拉諾，A科克倫，M科斯塔，V德阿爾梅達，J厄恩斯特，鞏巖，R漢努什，P波拉基斯，B魯賓菲爾德，M索羅韋，吳雁，TC曹，
申請(專利權)人：霍夫曼拉羅奇有限公司，
類型：
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