皮質醇酶聯免疫吸附測定試劑盒制造技術

本實用新型專利技術公開了皮質醇酶聯免疫吸附測定試劑盒，包括酶標板，所述酶標板包括固相載體和包被層，其特征在于：所述固相載體上設置有多個微孔，所述包被層附著在所述固相載體的微孔表面，所述包被層是由抗皮質醇抗體和牛血清白蛋白依次涂布在所述固相載體的微孔表面上形成的復合層。本實用新型專利技術的試劑盒操作簡便，成本低，穩定性好，可以滿足普通實驗室的要求。（*該技術在2022年保護過期，可自由使用*）

【技術實現步驟摘要】

本技術屬于涉及生物
，具體而言，涉及皮質醇酶聯免疫吸附測定試劑盒。
技術介紹
皮質醇，也可稱為“可的松”，是腎上腺在應激反應里產生的一種類激素。也是最主要的糖皮質激素。它的含量占血中17-羥類固醇總量的4/5。人每日分泌量約為200mg，且此分泌呈明顯的時辰節律變化。一般于午夜或清晨I點左右分泌最少，血漿含量最低，凌 晨4時分泌開始增加，至早6 8時分泌最多。8時以后逐漸分泌減少，下午5時左右分泌量較清晨最高值比下降50%或50%以上。半衰期為80 120分鐘。分泌入血后，絕大部分與類固醇激素結合球蛋白(CBG)結合。血中游離皮質醇只占總皮質醇的1% 3%，但只有游離的才有生物學活性。通常游離與結合的皮質醇保持相對平衡。皮質醇通過糖異生途徑，在抗炎反應以及穩定血壓等方面起作用。皮質醇還通過細胞內受體影響許多生理系統，如免疫反應、血糖調節、血管緊張度調節、酶促反應、骨骼新陳代謝等，在當前臨床醫學和藥物學的研究中，測定皮質醇的水平是一項重要的指標。病理學改變1.增高見于柯興氏綜合征、胰島炎、妊娠中毒、甲狀腺機能減退、肝病、哮喘病危象、高山病早期、意外的體溫過低、男子女性化、某些精神病患者，不平衡性糖尿病。濃度升高但有節律性見于發熱、劇烈疼痛。夜間不減少，且無晝夜節律，見于急性感染、中樞神經系統腫瘤及炎癥，并有顱內壓升高，肢端肥大癥，癌癥，充血性心力衰竭(特別是右側心衰)、肝損傷、腎血管性高血壓、垂體機能亢進。2.降低見于阿狄森(Addison)氏病，兼有原發性腎上腺皮質衰竭；垂體機能減退，合并繼發性腎上腺皮質衰竭；腎小腺切除術后及嚴重感染的低血壓癥患者。由血中皮質醇測定，同時進行尿中17-0HCS的測定，可以引起出垂體-腎上腺皮質系統功能異常的診斷步驟。目前國際上對血清中皮質醇的檢測方法主要分為色譜技術和免疫分析技術。色譜分析法包括氣象色譜法、氣質聯用和液質聯用法等，雖然色譜法具有靈敏度高、準確性和重復性好等優勢，但需要昂貴的儀器設備，而且檢測過程繁瑣、樣本前處理的技術要求很高，難于操作。檢測人員需要具備專業的檢測技能和豐富的實驗經驗。常用的免疫分析技術包括放射免疫分析法(Radioimmunoas say, RIA)、化學發光免疫分析法(Chemiluminescent immunoassay, CLIA)和酶聯免疫分析法(Enzyme-linkedimmunosorbent assay, ELISA)。放射免疫分析法(Radioimmunoassay, RIA)是一種應用放射性同位素的敏感性和抗原抗體反應的特異性結合而成的體外微量分析方法。雖然該技術特異性較高，靈敏度也較高，但其局限性也很顯著，主要有以下幾點I)原料來源必須使用放射性核素，需要防護和防止污染。2)穩定性差放射性同位素易衰減，標記抗原有效使用時間短。3)難以實現操作和測量的自動化。 化學發光免疫分析法(Chemiluminescent immunoas say, CLIA)包含兩個部分，即免疫反應系統和化學發光系統。免疫反應系統，其基本原理同酶聯免疫分析法(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA),常采用雙抗體夾心法、競爭法、間接法等反應模式，化學發光系統的原理在于免疫反應中的酶作用于發光底物。發光底物在酶的作用下，底物發生化學反應并釋放出大量的能量，產生激發態的中間體。這種激發態中間體，當其回到穩定的基態時，可同時發射出光子。利用發光信號測量儀器即可測量光量子產額，該光量子產額與樣品中的待測物質的量成正比。由此可以建立標準曲線并計算樣品中待測物質的含量。化學發光法雖具有高靈敏度、高準確度、高精密度、寬線性、反應快速，影響因素少，結果準確等優點，但化學發光法的缺點是儀器、試劑成本高。因此，有必要選用一種快速、簡便能夠定量且靈敏度、準確度和特異性高的方法來進行皮質醇的檢測
技術實現思路
本技術目的是皮質醇酶聯免疫吸附測定試劑盒，其操作簡便，成本低，穩定性好，可以滿足普通實驗室的要求。為了實現本技術的目的，擬采用如下技術方案本技術一方面涉及一種皮質醇酶聯免疫吸附測定試劑盒，包括酶標板，所述酶標板包括固相載體和包被層，其特征在于所述固相載體上設置有多個微孔，所述包被層附著在所述固相載體的微孔表面，所述包被層是由皮質醇抗體和牛血清白蛋白依次涂布在所述固相載體的微孔表面上形成的復合層。在本技術的一個優選實施方式中，所述的多個微孔是指96個微孔。在本技術的一個優選實施方式中，所述的固相載體是聚苯乙烯酶標板。本專利通過高效的偶聯方法的得到穩定性好的皮質醇-3-肟-BSA，并通過免疫動物得到特異性高及親和力強的抗皮質醇抗體，用來制備皮質醇酶聯免疫吸附測定試劑盒。通過與RIA和CLIA試劑盒的比較，其靈敏度、精密度、準確性和試劑盒有效期等方面均優于放射免疫法，與CLIA試劑盒差異性不大，但由于其所需儀器及試劑費用低，更適用于基層試驗室。同時由于ELISA試劑盒采用TMB作為顯色底物，所以其試劑盒具有穩定性高和低毒性的優點，且實驗操作較RIA試劑盒及質譜法簡單、不需特殊防護、周期短，可以滿足普通實驗室的要求。附圖說明圖I為本技術一具體實施例酶標板結構示意圖。I固相載體，2微孔,3包被層。具體實施方式以下結合附圖和具體實施例對本技術作進一步說明，以使本領域的技術人員可以更好的理解本技術并能予以實施，但所舉實施例不作為對本技術的限定。如圖I所示，本技術試劑盒的酶標板，其包括固相載體I和包被層3，固相載體I采用96孔聚苯乙烯酶標板。固相載體I上有多個微孔2，包被層3附著在固相載體上的微孔2上。包被層3是包括抗皮質醇抗體和牛血清白蛋白的復合層。皮質醇酶聯免疫吸附測定試劑盒的研制本試劑盒應用競爭抑制酶聯免疫分析法測定血清或血漿樣本中皮質醇的水平。制備過程如下使用96孔聚苯乙烯酶標板作為固相載體，先將其置于紫外光下輻照2小時，使酶標板活化。在酶標板微孔條上預先包被一定濃度的抗體，4°C過夜，經洗板及牛血清白蛋白封閉處理后制成包被好的酶標板。檢測時，依次加入待測標本及生物素化的，形成待測標本中的皮質醇和生物素化的皮質醇競爭結合酶標板上包被的抗體的局面，再通過親和素化辣根過氧化物酶(HRP)放大信號，以3，3'，5，5'-四甲基聯苯胺(TMB)及硫酸分別作為底物及終止液，完成皮質醇酶聯免疫吸附測定試劑盒的制備。2、經過對試劑盒一系列的質量指標檢測，包括靈敏度、重復性、特異性、回收率及線性測定，表明該檢測體系成熟，本試劑盒各項指標檢測結果a.標準曲線權利要求1.皮質醇酶聯免疫吸附測定試劑盒，包括酶標板，所述酶標板包括固相載體和包被層，其特征在于所述固相載體上設置有多個微孔，所述包被層附著在所述固相載體的微孔表面，所述包被層是由抗皮質醇抗體和牛血清白蛋白依次涂布在所述固相載體的微孔表面上形成的復合層。2.根據權利要求I所述的皮質醇酶聯免疫吸附測定試劑盒，其特征是所述的多個微孔是指96個微孔。3.根據權利要求I所述的皮質醇酶聯免疫吸附測定試劑盒，其特征是所述的固相載體是聚苯乙烯酶標板。專利摘要本技術公開了皮質醇酶聯免疫吸附測定試劑盒，包括酶標板，所述酶標板包括固相載體本文檔來自技高網...

【技術保護點】
皮質醇酶聯免疫吸附測定試劑盒，包括酶標板，所述酶標板包括固相載體和包被層，其特征在于：所述固相載體上設置有多個微孔，所述包被層附著在所述固相載體的微孔表面，所述包被層是由抗皮質醇抗體和牛血清白蛋白依次涂布在所述固相載體的微孔表面上形成的復合層。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：楊娟，李華淵，童曉玲，從旭霞，李慶，何峰容，
申請(專利權)人：武漢優爾生科技股份有限公司，
類型：實用新型
國別省市：