包膜DNA免疫吸附劑及其制備方法技術

本發明專利技術提供一種本發明專利技術提供的技術方案為：包膜DNA免疫吸附劑，包括作為吸附劑載體的碳化樹脂和固載在所述碳化樹脂上的DNA,包膜DNA免疫吸附劑還包括聚乙烯醇縮丁醛膜層，聚乙烯醇縮丁醛膜層對吸附劑載體形成包膜作用。本發明專利技術包膜DNA免疫吸附劑的膜層不但具備優良的親水性和生物相容性，還可有效防止了DNA的脫落。另外，DNA完全裸露于膜層表面，大大提高了免疫吸附劑的吸附性能。此外，還提供一種DNA免疫吸附劑的制備方法。

Coated DNA immune adsorbent and preparation method thereof

The invention provides a method of the invention provides the technical scheme that the coated DNA immune adsorbent, including as carbonized resin adsorbent carrier and immobilized on the resin coated carbide on DNA, DNA immune adsorbent also includes polyvinyl butyral film, polyvinyl butyral film layer is formed on the adsorbent carrier envelope. The coating layer of the DNA immune adsorbent provided by the invention not only has good hydrophilicity and biocompatibility, but also effectively prevents the DNA from falling off. In addition, DNA is completely exposed to the surface of the film, which greatly improves the adsorption performance of the sorbent. In addition, a method for preparing an DNA immune adsorbent is also provided.

【技術實現步驟摘要】
包膜DNA免疫吸附劑及其制備方法
本專利技術涉及血液凈化領域，具體涉及碳化樹脂DNA免疫吸附劑及其制備方法。
技術介紹
系統性紅斑狼瘡(systemiclupuserythematosus,以下簡稱SLE)是一種常見的累及多系統多器官的自身免疫性疾病。由于患者機體免疫調節障礙及自身免疫耐受狀態被打破，產生多種針對自身組織的抗體，導致組織和器官的損傷，這些抗體主要是抗Sm抗體、抗核抗體以及抗DNA抗體。其中抗DNA抗體可分為抗單鏈DNA抗體(抗ss-DNA抗體)和抗雙鏈DNA抗體(抗ds-DNA抗體)。根據國內外臨床及基礎研究表明，抗ds-DNA抗體的滴度與疾病嚴重程度及活動性呈正相關。最近幾年，激素及免疫抑制劑的應用使SLE患者的愈后效果得到明顯改善，但依舊存在很多患者藥物療效不顯著的現象，過度的免疫抑制治療所引起的感染是引起SLE患者死亡的主要原因。另外，多方面研究證實，抗雙鏈DNA抗體(抗ds-DNA抗體)與DNA結合成為免疫復合物在腎小球基底膜沉積，或ds-DNA抗體直接作用于腎小球抗原，從而造成SLE患者的腎損傷。使用DNA免疫吸附(IA)對患者進行血液灌流，是近二、三十年發展起來的新型療法。Jones,FrankR(EP0272792A1,1987)對這種方法作了詳細說明。DNA免疫吸附劑的吸附作用是依靠DNA對致病性抗ds-DNA抗體的特異識別作用，清除患者血液中的致病物質，緩解病情，改善患者的免疫功能，從而逐漸恢復健康。美國的TermanDS等人(Lancet,1979,2(8147):824-7)首次使用活性炭為載體材料，采用火棉膠包膜固定DNA，得到DNA免疫吸附劑用于血液灌流治療一名重度SLE患者，使患者生命延長，從此開辟了DNA吸附劑治療SLE的先河。使用火棉膠的包膜，使DNA免疫吸附劑的安全有效性得到了保證。但是該方法得到的包膜DNA免疫吸附劑中DNA系通過物理包埋作用固載在樹脂上，DNA的有效固載率和固載穩定性并不十分理想吸附劑的吸附率僅能達到50％左右。
技術實現思路
本專利技術要解決的技術問題是針對現有技術的缺陷，提供一種吸附率高的包膜DNA免疫吸附劑。為解決上述技術問題，本專利技術提供的技術方案為：包膜DNA免疫吸附劑，包括作為吸附劑載體的碳化樹脂和固載在碳化樹脂上的DNA,包膜DNA免疫吸附劑還包括聚乙烯醇縮丁醛膜層，聚乙烯醇縮丁醛膜層對吸附劑載體形成包膜作用。聚乙烯醇縮丁醛(以下簡稱PVB)是由聚乙烯醇與正丁醛在酸催化下的縮合產物，其分子鏈中含有羥基、丁醛基和乙酸酯基三種不同的官能團。其中，PVB結構中含有的縮丁醛獨特的六元環結構提高了分子鏈的強度及耐熱性，結構中含有的大量的羥基，使得膜層具備優良的親水性和生物相容性。PVB結構中羥基可提高吸附劑的環氧功能化效果。具有聚乙烯醇縮丁醛膜層的包膜DNA包膜吸附劑，由于該膜層表面含有大量的親水性的羥基，大大提高了免疫吸附劑的生物相容性，另一方面，膜層表面的羥基通過與帶有環氧基團的分子如環氧氯丙烷反應將環氧基團引入膜層表面，DNA通過與環氧基團的開環反應固載于膜層表面，一方面有效防止了DNA的脫落，另一方面DNA完全裸露于膜層表面，大大提高了免疫吸附劑的吸附性能。本專利技術要解決的另一技術問題是提供一種新的包膜DNA免疫吸附劑的制備方法。為解決上述技術問題，本專利技術提供的技術方案為：包膜DNA免疫吸附劑的制備方法，包括以下步驟：步驟一：用聚乙烯醇縮丁醛與有機溶劑的混合溶液作為包膜溶液，對碳化樹脂進行包膜處理制得包膜吸附劑；步驟二：將步驟一得到的包膜吸附劑進行環氧活化處理；步驟三：將環氧活化后的包膜吸附劑與DNA緩沖溶液混合，進行DNA接枝反應，反應結束后將所得產物烘干、冷卻，最后制得所述包膜DNA免疫吸附劑。聚乙烯醇縮丁醛(以下簡稱PVB)是由聚乙烯醇與正丁醛在酸催化下的縮合產物，其分子鏈中含有羥基、丁醛基和乙酸酯基三種不同的官能團。其中，PVB結構中含有的縮丁醛獨特的六元環結構提高了分子鏈的強度及耐熱性，結構中含有的大量的羥基，使得膜層具備優良的親水性和生物相容性。此外，PVB結構中羥基可提高吸附劑的環氧功能化效果。具有聚乙烯醇縮丁醛膜層的包膜DNA包膜吸附劑，不但可提高吸附劑的強度，也可有效提高吸附劑的吸附效率。較好的方案為聚乙烯醇縮丁醛的羥基含量為15％-30％。PVB的羥基含量的增加可提高環氧活化效果，進而可以提高DNA的固載量，但PVB中羥基占比過高，將導致PVB的親水性增大，膜層的機械性能、耐磨強度將會減小。優選的，PVB中羥基占比為15％-30％，即可保證膜層的機械性能和耐磨強度，又可獲得較高的DNA固載量，使吸附劑的吸附效率得到保障。更好的方案為步驟一中所述包膜溶液中聚乙烯醇縮丁醛的質量濃度為0.5％-1％。更好的方案為步驟一中所述包膜溶液與所述碳化樹脂的體積比為(2-3)：1，所述包膜溶液中聚乙烯醇縮丁醛的質量濃度為0.5％-1％。籍此獲得的包膜DNA免疫吸附劑的包膜層厚度適中，吸附效率高。更好的方案為步驟三中，環氧活化后的包膜吸附劑與DNA緩沖溶液的體積比為1：(2.5-5)，其中所述DNA緩沖溶液中DNA的濃度為1-2mg/ml。借此獲得的包膜DNA免疫吸附劑DNA固載量高，吸附效率高。另一更好的方案為步驟三中，接枝反應溫度為70℃-85℃，反應時間為12-24h。在接枝反應溫度在70-85℃之間時包膜DNA免疫吸附劑的吸附性能均達到了90％以上，吸附性能優。另一更好的方案為步驟三中，烘干溫度為50℃-60℃。另一更好的方案為步驟二中進行環氧活化處理所用的環氧活化物選自乙二醇雙縮水甘油醚、1,4-丁二醇雙縮水甘油醚、1,6-己二醇雙縮水甘油醚和環氧氯丙烷中的任一一種。包膜吸附劑通過其膜層上的羥基與單環或雙環氧基團物質上的環氧基團(氯基)的開環反應(取代反應)可以實現包膜吸附劑的環氧化，DNA分子通過其堿基對與環氧基團的開環反應固定于包膜吸附劑上。另一更好的方案為步驟二中進行所述環氧活化處理的方法為：將步驟一制成的包膜吸附劑加入到環氧活化物和NaOH溶液中，其中包膜吸附劑、環氧活化物和NaOH溶液的體積比為1:(0.5-2):1，在40-50℃下反應1-2h，反應結束后使用純化水洗滌，獲得環氧活化后的包膜吸附劑。本專利技術環氧活化處理的方法還可以是現有技術中的其它方法，對此沒有嚴格的限制。在環氧活化后的包膜吸附劑與DNA緩沖溶液混合前，還可以先用0.1mol/LTris-HCl緩沖液洗滌。本專利技術對包膜溶液中有機溶劑的選擇沒有嚴格的限制，可使用醇類溶劑，如甲醇、乙醇、丙醇、丁醇等，亦可以使用酮類溶劑，如丙酮、環己酮等，還可以使用酯類溶劑或醚類溶劑，如乙酸乙酯、乙酸丁酯、乙醚、丙醚等。優選乙醇。本專利技術對作為吸附劑載體的碳化樹脂的選擇沒有嚴格的限制，可以通過商業途徑購買，可以通過任何公知的方法制備，亦可以通過以下方法制得：以苯乙烯和二乙烯苯為單體，二乙烯苯占混合單體總質量的0.5％，以三倍于單體(重量比)的甲苯為致孔劑，以過氧化苯甲酰為引發劑，用量為混合單體總質量的1％，以1％明膠水溶液為分散介質，進行懸浮聚合，在80℃下反應5小時，獲得大孔樹脂；將上述制備的樹脂放入電阻爐中，在惰性氣體保護下，在300℃的溫度下燒灼10小本文檔來自技高網...

【技術保護點】
包膜DNA免疫吸附劑，包括作為吸附劑載體的碳化樹脂和固載在所述碳化樹脂上的DNA,其特征在于：包膜DNA免疫吸附劑還包括聚乙烯醇縮丁醛膜層，所述聚乙烯醇縮丁醛膜層對所述吸附劑載體形成包膜作用。

【技術特征摘要】
1.包膜DNA免疫吸附劑，包括作為吸附劑載體的碳化樹脂和固載在所述碳化樹脂上的DNA,其特征在于：包膜DNA免疫吸附劑還包括聚乙烯醇縮丁醛膜層，所述聚乙烯醇縮丁醛膜層對所述吸附劑載體形成包膜作用。2.包膜DNA免疫吸附劑的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：步驟一：用聚乙烯醇縮丁醛與有機溶劑的混合溶液作為包膜溶液，對碳化樹脂進行包膜處理制得包膜吸附劑；步驟二：將步驟一得到的包膜吸附劑進行環氧活化處理；步驟三：將環氧活化后的包膜吸附劑與DNA緩沖溶液混合，進行DNA接枝反應，反應結束后將所得產物烘干、冷卻，最后制得所述包膜DNA免疫吸附劑。3.根據權利要求2所述包膜DNA免疫吸附劑的制備方法，其特征在于：所述聚乙烯醇縮丁醛的羥基含量為15％-30％。4.根據權利要求2所述包膜DNA免疫吸附劑的制備方法，其特征在于：所述步驟一中的所述包膜溶液中所述聚乙烯醇縮丁醛的質量濃度為0.5％-1％。5.根據權利要求2所述包膜DNA免疫吸附劑的制備方法，其特征在于：所述步驟一中所述包膜溶液與所述碳化樹脂的體積比為(2-3)：1，所述包膜溶液中聚乙烯醇縮丁醛的質量濃度為0.5％-1％。...

【專利技術屬性】
技術研發人員：董凡，謝高峰，邵柯，
申請(專利權)人：珠海健帆生物科技股份有限公司，
類型：發明
國別省市：廣東,44