本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種血清降解性載體的脂質(zhì)藥物及其使用方法，屬于制藥技術(shù)領(lǐng)域。一種血清降解性載體的脂質(zhì)藥物，其特征是包括脂質(zhì)體和血清，其中所述的脂質(zhì)體由卵磷脂鋯納米顆粒包裹藥物形成，脂質(zhì)體和血清的用量比為184-191μg∶1.5mL，使用方法是載體或脂質(zhì)體藥物體外注射到血清中。本發(fā)明專利技術(shù)降解產(chǎn)物不會對血細胞造成如酸度、鹽度、氧化代謝物等壓力，可提高藥物對受體細胞定向傳遞和靶向識別的效率，具有機械強度高、包裹藥物的構(gòu)型穩(wěn)定等優(yōu)點，可廣泛用于開發(fā)血細胞免疫響應(yīng)低、無殘留的緩釋藥物，制備關(guān)于核糖體抑制蛋白可控緩釋和高效傳遞的新劑型。
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于制藥
，涉及。技術(shù)背景在真核細胞與哺乳動物細胞的質(zhì)膜中，卵磷脂(磷脂酰膽堿，PO是分布最多的脂類物質(zhì)。大豆卵磷脂(SPC)和蛋黃卵磷脂(EPC)為最常見的PC產(chǎn)品，在m - I -位點和 sn-2 -位點的取代基分別為飽和酰基和不飽和脂肪酸碳鏈(不飽和度等于2)。在PC分子中，脂肪酸的碳鏈不分支、且不飽和鍵屬于順式構(gòu)型，對流動性影響很大。磷脂在細胞質(zhì)膜中以不對稱分布，外微區(qū)主要由PC組成。活性磷脂酶C和D選擇性地合成PC，用來執(zhí)行凋亡細胞的清除以及趨化免疫細胞的吞噬功能。先導(dǎo)類PC用來合成鞘磷脂(SM)、溶血卵磷脂(LPC)和鞘氨醇- I-磷酸 (SlP)0凋亡細胞激活了非鈣依賴型磷脂酶A2 (iPLA2)并釋放LPC，隨后“趨化”結(jié)合單核細胞/巨噬細胞的G-蛋白-耦合受體(G2A)。特異性識別與結(jié)合“開啟” 了免疫細胞吞噬凋亡細胞的功能；THP - I和U937細胞在凋亡時增加鞘氨醇激酶_ I (SphKl)表達、分泌 S1P，并對吞噬細胞發(fā)出“找到我”的趨化信號； Ρ-型ATPase酶、應(yīng)急酶或(ABC)-轉(zhuǎn)運酶的作用下，癌變或感染細胞的血小板迅速將磷脂酰絲氨酸(PS，由PC合成)從質(zhì)膜內(nèi)側(cè)轉(zhuǎn)運到外側(cè)，再與樹突細胞(DCs)、增生單核細胞、成熟巨噬細胞、內(nèi)皮細胞以及活性B細胞等的表面PS進行溶解，協(xié)同“自殺”因子消除病變細胞；另外縮醛磷脂的二酰基具有重要的細胞信號介導(dǎo)功能。在凋亡細胞清除后，免疫細胞的調(diào)節(jié)功能恢復(fù)至正常水平。與病原菌的清除或 FcR-調(diào)節(jié)噬菌相比，凋亡細胞清除的過程具有非炎癥性。在吞噬過程中，巨噬細胞分泌抗炎免疫因子IL- 10，同時降低TNF- a，IL - 1β和IL - 12的表達水平；巨噬細胞在胞外分泌TGF- β，它是一種重要的抗炎免疫因子；然而，只有PS暴露的陰離子脂質(zhì)體才能誘導(dǎo) TGF - β I的胞外表達，PC是一種重要的細胞免疫響應(yīng)阻抑劑。PC不穩(wěn)定易被氧化，氧化過程多數(shù)情況下與入侵細菌、支原體、病毒導(dǎo)致的細胞癌變、感染、慢性免疫缺陷等病變有關(guān)。氧化特異性抗原(OSE)誘導(dǎo)鐸受體、C-反應(yīng)蛋白、補充因子H和原性IgM抗體。免疫細胞的原性模式識別受體以一種內(nèi)源性損傷模式鑒別氧化廢棄物。PC氧化后，極性頭暴露了隱秘表位的識別、結(jié)合受體，并在細胞表面形成“自主”因子和低密度脂蛋白。PC是莢膜多糖(LPS)的有效組分，能夠誘導(dǎo)細菌的特定共生、細菌-宿主的結(jié)合以及細菌毒素的釋放；陰離子PC激活病原體的表面酰胺酶，介導(dǎo)細菌的繁殖、分化、凋亡、 黏附以及遷移。細菌在復(fù)制、凋亡以及溶解過程中，內(nèi)源因子導(dǎo)致胞壁瓦解，LPS釋放毒性類脂Α。這樣，宿主出現(xiàn)感染、癌變和凋亡響應(yīng)，同時免疫細胞伴隨炎癥反應(yīng)。凝血酶誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞(IL - 8)表達，“趨化因子”激活磷脂水解酶(PLA2),PLA2分為 SPLA2, CPLA2和iPLA2亞型。PC水解產(chǎn)生相應(yīng)的烷酸類炎性介質(zhì)，參與磷脂重建、細胞信號傳遞、宿主反應(yīng)和促進血液凝固等多種作用。同樣，PC介導(dǎo)病原菌與宿主細胞“發(fā)現(xiàn)”藥物分子、“開啟”細菌及其病變細胞的抑制、殺死過程；單核免疫細胞/巨噬細胞的“趨化因子”及時吞噬并清除細菌和細胞凋亡體。在PC的介導(dǎo)下，極性頭的表位結(jié)合模式識別受體實現(xiàn)藥物的定式排列和靶向傳遞。基于PC的“信號傳遞”功能和細胞可代謝特性，制藥工業(yè)已經(jīng)成功開發(fā)了 25種以上的脂質(zhì)商品藥物(FDA認證)，均為化學(xué)治療試劑。通過靜脈注射、肌注、口服和腹腔注射途徑用藥的脂質(zhì)藥物數(shù)量分別為12、2、8和I ;只有I種脂質(zhì)體(前列腺素)以動脈注射方式用藥。PC以其無細胞毒性、生物可降解性和阻抑免疫特性等優(yōu)勢用于包裹藥物的載體。脂質(zhì)體改善了藥物的代謝動力學(xué)，預(yù)防藥物早期降解和靶向細胞失活；此外，脂質(zhì)載體的乳化、分散功能提高了細胞對藥物的可利用度。然而用于包裹極性藥物時，PC的隱秘表位抗原喪失識別能力，從而抑制了免疫細胞對于凋亡細胞的“吞噬”清除功能；由于PC的構(gòu)型易變，介質(zhì)條件對包裹藥物的代謝動力學(xué)和藥效的影響大，藥物穩(wěn)定性不高；pc的機械強度不理想，用于生物藥物的包裹時對其高級構(gòu)型的擾動明顯。本專利技術(shù)研發(fā)了一種新的以體外注射方式使用的脂質(zhì)商品藥物。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的是提供一種血清降解性載體的脂質(zhì)藥物，本專利技術(shù)的另一個目的是提供該藥物的使用方法。本專利技術(shù)是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的 一種血清降解性載體的脂質(zhì)藥物，包括脂質(zhì)體和血清，其中所述的脂質(zhì)體由卵磷脂鋯納米顆粒包裹藥物形成，脂質(zhì)體和血清的用量比為184-191 μ g 1. 5mL。進一步地，所述的卵磷脂鋯納米顆粒為大豆磷脂鋯Zr(SPC)2或蛋黃磷脂鋯Zr (EPC) 2。所述的卵磷脂鋯納米顆粒和血清的用量比為160 μ g :1. 5mL。所述的藥物為核糖體抑制蛋白苦瓜蛋白MAP30或首烏蛋白GAP31。上述的血清降解性載體的脂質(zhì)藥物的使用方法是載體或脂質(zhì)體藥物體外注射到血清中。為了驗證藥物的降解情況，在雞血清中磷脂水解酶的催化下，分別對載體進行降解和測定，然后在體外實驗條件下，分別測定了脂質(zhì)藥物在血清中的釋放和傳遞作用。·載體的降解 血漿采自一月齡的雛雞；在無菌的2 ml離心管中，高速離心新鮮的血漿；分離沉降的血細胞，收集上清液、得到透明的血清樣品，在4°C下短期儲藏、備用；21*(5 02和Zr(EPC)2固體顆粒經(jīng)冷凍干燥后低溫儲藏；載體定量加入到血清中，在3000 rpm/min條件下攪拌分散固體顆粒，置于37°C恒溫振蕩器內(nèi)進行降解；定時取樣，高速離心(16000 rpm/min) 20分鐘、測定上清液中磷的含量，根據(jù)測定結(jié)果計算載體的降解效率；采用磷鑰藍分光光度(入=700 nm)以標準曲線法測定磷的含量。脂質(zhì)蛋白的緩釋 Zr (SPC)2和Zr (EPC)2載體分別包裹MAP30和GAP31的脂質(zhì)體經(jīng)低溫冷凍干燥后儲藏備用，預(yù)先測定脂質(zhì)體中的蛋白質(zhì)含量；在四個血清樣品的離心管中，分別定量加入脂質(zhì)蛋白藥物，高速分散至懸浮半透明溶液；在37 °〇恒溫振蕩器內(nèi)振蕩緩釋；在預(yù)定的時間間隔內(nèi)取樣，高速離心(16000 rpm/min) 20分鐘、測定上清液中的蛋白含量,計算緩釋率；蛋白含量通過考馬斯藍染色的分光光度法測定(λ =595 nm)。免疫細胞的共聚焦顯微觀察 小膠質(zhì)細胞(⑶11)分離自新生小鼠的視網(wǎng)膜組織；取適量用含10 % (體積分數(shù))雞血清的培養(yǎng)液混懸，調(diào)整細胞密度至2X IO5 / ml ;將IOml細胞懸液接種到多聚賴氨酸包被的T75細胞培養(yǎng)瓶中(培養(yǎng)液DMEM/F12)，在CO2 (體積分數(shù)5 %)的孵箱中、37°C下培養(yǎng)24 11;用0.01 M磷酸鹽緩沖溶液洗滌細胞，將細胞種植在六孔的無菌板(孔中放置一塊多聚賴氨酸處理的蓋玻片)中，種植密度為4X105 /孔；含10 %血清的培養(yǎng)液培養(yǎng)24h ;用(LysoTracker Red DND - 99)標記溶酶體 I h,分別用 Hoechst 33342 和抗-HLA - DR 單抗體脫色細胞核和細胞膜，磷酸緩沖溶液洗滌；分別加入定量的載體和脂質(zhì)體，培養(yǎng)2 h ；洗滌后以2 %(體積分數(shù))多聚甲醛溶液室溫固定30 min ;用特異性山羊二抗(Alexa Fluor本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護點】
一種血清降解性載體的脂質(zhì)藥物，其特征是包括脂質(zhì)體和血清，其中所述的脂質(zhì)體由卵磷脂鋯納米顆粒包裹藥物形成，脂質(zhì)體和血清的用量比為184？191μg？：1.5mL。
【技術(shù)特征摘要】
1.一種血清降解性載體的脂質(zhì)藥物，其特征是包括脂質(zhì)體和血清，其中所述的脂質(zhì)體由卵磷脂錯納米顆粒包裹藥物形成，脂質(zhì)體和血清的用量比為184-191 μ g 1. 5mL。2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種血清降解性載體的脂質(zhì)藥物，其特征是所述的卵磷脂鋯納米顆粒為大豆磷脂鋯Zr (SPC) 2或蛋黃磷脂鋯Zr (EPC) 2。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種血清降解性載體的脂質(zhì)藥物，其特征是所述的卵...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：薛金輝，喬元彪，霍宇平，郭彩珍，翟言強，衛(wèi)英慧，李彥威，
申請(專利權(quán))人：呂梁學(xué)院，
類型：發(fā)明
國別省市：
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