本發明專利技術公開了Paa蛋白及由其制備的抗體與應用。本發明專利技術提供Paa蛋白在制備具有如下1）-3）中至少一種功能的產品中的應用：1）預防和/或治療由病原菌EHEC引發疾病；2）降低病原菌EHEC腸道感染損傷；3）降低病原菌EHEC在腸道定值力；所述Paa蛋白的氨基酸序列為序列表中的序列2。本發明專利技術的實驗證明，本發明專利技術通過基因工程技術克隆獲取Paa蛋白的編碼基因、重組表達和純化Paa蛋白，體內外評估Paa蛋白的免疫學功能等實驗研究，Paa蛋白可被O157：H7感染血清所特異的、高效的識別，是EHEC病原菌重要的核心抗原，可作為抗原試劑用于感染診斷；Paa蛋白免疫的小鼠可以抵制O157：H7攻毒，表明該蛋白可以作為針對EHEC引發疾病的疫苗。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物
，尤其涉及Paa蛋白及由其制備的抗體與應用。
技術介紹
腸出血性大腸桿菌(enterohemorrhage E. coli,EHEC)是毒力最強、致病性也最強的大腸桿菌，受到廣泛的關注。EHEC感染可使人患腹瀉、出血性結腸炎(HC)，還可引發溶血性尿毒綜合癥(HUS)及血栓性血小板減少紫癜(TTP)等嚴重并發癥，嚴重者可導致死亡，致死率達5% 10%。2011年4月，德國暴發了腸出血性大腸桿菌0104 :H4感染和溶血性尿毒綜合征(HUS)疫情，蔓延到歐洲和北美洲的16個國家。同年四、五月間，日本富山地區暴發了新感染疫情，血清型為0111，某些病例在引起HUS之后，出現了神經癥狀，并發彌散型血管內凝血和腦病。在EHEC中，致病性強、危害大的還有0157 :H7。自1975年被首次分離、1982年被確認為致病菌以來的20多年中，世界各地包括中國都有不同規模的暴發流行。 1999年在我國江蘇、安徽兩省有過大規模暴發流行，患者超過2萬例，死亡177例。EHEC感染已經成為歐美國家兒童腎衰的首位病因，對人們的健康構成了巨大威脅。另外，作為一種重要的人獸共患病病原體，EHEC病原菌可長期駐留于牛、羊、豬、雞等家畜家禽的腸道中，造成動物的腹瀉，并污染畜禽的肉奶蛋制品以及水源和農作物等，給農牧業生產造成巨大的損失。因此，EHEC感染已經成為全球性的公共衛生問題。目前，臨床針對EHEC感染主要采取對癥治療，因為抗生素治療具有加劇病情的危險性而被謹慎使用，沒有可以使用的疫苗和特異治療藥物。疫苗被認為是應對EHEC暴發流行和散發感染最簡單，經濟，快捷的手段。如果能發現和獲得核心抗原或優勢保護性抗原，就可以進一步發展為新型疫苗。黏附定植是細菌感染損傷的關鍵環節，細菌黏附于宿主上皮細胞導致A/E(Attaching and effacing, Α/E)病變。Tir、Intimin、Map、EspF、EspG、EspH、SepZ、EspB都是已被公認的由LEE編碼的效應分子，都參與EHEC的Α/E損傷。但研究人員發現仍然存在另一些非LEE編碼的效應分子。Paa (porcine attaching and effacing associated)為 753bp 基因編碼的27. 6kDa蛋白，序列分析發現paa基因編碼蛋白的氨基酸序列在0157 H7EDL933和Saikai中完全一致。染色體定位技術發現包含paa基因的區域位于染色體上,在yciD和yciE之間。Theresa等發現paa基因的EHEC缺失突變株會降低對hela細胞的黏附，同時也會降低某些細胞表面蛋白的分泌，這些蛋白有些對EHEC的分泌系統是不可或缺的，而這些分泌系統是EHEC黏附細胞的重要保障，所以Paa與EHEC的黏附有著某些關系。目前，多國科學家針對Paa蛋白的黏附功能和分子機制正展開研究，但迄今為止，還沒有從免疫學角度上證實Paa分子在細菌感染檢測、免疫防護方面的作用和功能。
技術實現思路
本專利技術的一個目的是提供Paa蛋白的新用途。本專利技術提供的Paa蛋白在制備具有如下I) _3)中至少一種功能的產品中的應用I)預防和/或治療由病原菌EHEC感染或引發的疾病；2)降低病原菌EHEC對腸道感染損傷；3)降低病原菌EHEC在腸道定值力；所述Paa蛋白的氨基酸序列為序列表中的序列2。上述應用中,所述產品為疫苗或藥物。上述應用中，所述腸道為人或動物腸道，在本專利技術的實施例中動物腸道為小鼠腸道；所述病原菌EHEC為EHEC 0157 :H7。 Paa蛋白作為靶標或檢測標志物在開發或制備診斷感染病原菌EHEC的產品中的應用也是本專利技術保護的范圍；在上述應用中，所述Paa蛋白的氣基酸序列為序列表中的序列2。本專利技術的另一個目的是提供一種產品。本專利技術提供的產品，其活性成分為Paa蛋白；所述產品為具有如下I) -3)中至少一種功能的產品I)預防和/或治療由病原菌EHEC引發疾病；2)降低病原菌EHEC對腸道感染損傷；3)降低病原菌EHEC在腸道定值力。4)檢測病原菌EHEC的感染。由Paa蛋白作為抗原制備的抗體也是本專利技術保護的范圍；所述Paa蛋白的氨基酸序列為序列表中的序列2。上述抗體為多克隆抗體或單克隆抗體。檢測Paa蛋白的產品在制備用于診斷病原菌EHEC產品中的應用也是本專利技術保護的范圍；所述病原菌EHEC具體為EHEC 0157 H7 ;上述檢測Paa蛋白的產品具體為上述的抗體。上述的抗體在制備提高宿主抗病原菌EHEC感染產品或提高宿主抗病原菌EHEC黏附產品中的應用也是本專利技術保護的范圍；上述應用中，所述宿主具體為人或動物；宿主尤其具體為人或動物內的細胞；所述病原菌EHEC具體為EHEC 0157 H7 ;在本專利技術的實施例中，用來證明提高宿主抗病原菌EHEC黏附是通過hela細胞作為宿主進行試驗的。本專利技術的第三個目的是提供一種產品。本專利技術提供的產品，其活性成分為上述的抗體；所述產品為具有如下I) -3)中至少一種功能的產品I)用于檢測病原菌EHEC ；2)提高宿主抗病原菌EHEC感染；3)提高宿主抗病原菌EHEC黏附；其中宿主具體為人或動物；宿主尤其具體為人或動物內的細胞；所述病原菌EHEC具體為EHEC 0157 H7 ;在本專利技術的實施例中，用來證明提高宿主抗病原菌EHEC黏附是通過hela細胞作為宿主進行試驗的。本專利技術的實驗證明，本專利技術通過基因工程技術克隆獲取Paa蛋白的編碼基因、重組表達和純化Paa蛋白，體內外評估Paa蛋白的免疫學功能等實驗研究,證實(I) Paa蛋白可被0157 :H7感染血清所特異的、高效的識別，是EHEC病原菌重要的核心抗原，可作為抗原試劑用于感染診斷；(2)Paa免疫的小鼠能夠減少腸道里EHEC的定植；(3)Paa蛋白免疫的小鼠可以抵制0157 H7攻毒，表明該蛋白可以作為針對EHEC弓丨發疾病的疫苗；(4) Paa蛋白可用來制備抗體或抗血清，該抗體或抗血清可以特異識別EHEC菌體蛋白，能夠作為抗體試劑檢測EHEC病原菌；(5)Paa蛋白的抗體或抗血清能夠拮抗EHEC病原菌對靶細胞的黏附效應，有效干預病原菌在腸道的定植，從而顯著減低或幾乎完全抑制病原菌感染對機體造成的損傷；(6) Paa蛋白可激發機體產生特異應答，具有高水平的免疫原性，通過誘導高效免疫效應，抵抗病原菌感染所造成的損傷或死亡。附圖說明圖I為Paa的純化蛋白及WB印跡圖2為抗體效價隨免疫次數及間隔時間變化監測圖3為免疫小鼠血清中IgA及IgG亞型的檢測·圖4為攻毒后小鼠排泄物中排菌量的檢測圖5為抗Paa抗血清的WB檢驗圖6為Paa抗血清對細胞的抗黏附率具體實施例方式下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規方法。下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業途徑得到。部分材料如下I、載體與菌株EHEC 0157 :H7EDL933株可由ATCC提供，目錄號700927 ;公眾也可從中國人民解放軍軍事醫學科學院微生物流行病研究所獲得，該菌株EDL933株記載在L. ff. Riley,R. S. Remis, S. D. Helgerson, H. B. McGee, J. G. Wells, B. R. Davis, R. J.本文檔來自技高網...
【技術保護點】
Paa蛋白在制備具有如下1）?3）中至少一種功能的產品中的應用：1）預防和/或治療由病原菌EHEC感染或引發的疾病；2）降低病原菌EHEC對腸道感染損傷；3）降低病原菌EHEC在腸道定值力；所述Paa蛋白的氨基酸序列為序列表中的序列2。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：王慧，李濤，王琴，韓燃，
申請(專利權)人：中國人民解放軍軍事醫學科學院微生物流行病研究所，
類型：發明
國別省市：
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