一種脂微球/脂質乳劑微觀結構的測定方法技術

一種采用掃描電鏡測定具有軟質外殼結構的脂微球/脂質乳劑微觀形態的方法，包括將待測樣品稀釋分散、用負離子裝置進行處理，使待測樣品或承載待測樣品的載樣容器帶正電荷，通過電子束能量的變化來掃描出樣品表面的微觀結構，從而獲得重現性好、穩定、清晰的脂微球/脂質乳劑微觀結構的掃描電鏡（TEM）譜圖的測定方法。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及，具體涉及一種采用負離子發生裝置處理待測樣品及其掃描電鏡中的載樣金屬網，來測定具有軟質外殼結構的脂微球/脂質乳劑的微觀形態的方法。
技術介紹
掃描電子顯微鏡是1965年專利技術的較現代的細胞生物學研究工具，主要是利用二次電子信號成像來觀察樣品的表面形態，即用極狹窄的電子束去掃描樣品，通過電子束與 樣品的相互作用產生各種效應，其中主要是樣品的二次電子發射。二次電子能夠產生樣品表面放大的形貌像，這個像是在樣品被掃描時按時序建立起來的，即使用逐點成像的方法獲得放大像。掃描電鏡是一種用途廣泛的多功能儀器，具有很多優越的性能，它可以進行三維形貌的觀摩和分析，在觀察形貌的同時進行微區的成分分析。其應用主要表現在兩個方面材料形貌觀察分析和成分分析。掃描電子顯微鏡由三大部分組成真空系統，電子束系統以及成像系統。掃描電鏡觀察樣品要求在高真空中進行，無論是水或脫水溶液，在高真空中都會產生劇烈地汽化，不僅影響真空度、污染樣品，還會破壞樣品的微細結構。因此，樣品在用電鏡觀察之前必須進行干燥。脂微球/脂質乳劑是將藥物溶于脂肪油中經磷脂乳化分散于水相后制成的脂質乳劑，是一種以脂肪油為軟基質并被磷脂膜包封的微粒體分散系，其平均粒徑200nm，稱為脂微球。脂微球/脂質乳劑作為藥物載體，靶向聚集于病變部位實現了藥物的“靶向治療”。通過掃描電鏡(TEM)，可以觀察脂微球/脂質乳劑的微觀結構，掃描電鏡主要通過高能電子束穿過非常薄的固體樣品表面，通過電子束能量的變化來掃描出樣品表面的微觀結構。使用TEM進行試驗時，為了防止空氣中離子及水對于電子束的干擾，因此需要在真空室中進行掃描，這樣就必需使用完全干燥的固體樣品，而脂微球/脂質乳劑中微粒的形態比較不穩定，干燥后如果濃度過大，則會發生脂微球變形或聚合的作用，這樣就無法觀測到脂微球的真實結構。而如果使用濃度較低的脂微球/脂質乳劑溶液樣品，因為脂微球是由磷脂包裹油脂構成的，因此表面為磷脂的親水基團，主要為膽堿(-N (CH4)3)或氨基(-NH2),這些基團在水溶液中溶解后帶有正電荷，會吸附電子束的高能電子，因此在電鏡圖譜中為黑色球體，白色背景，這與大家對于電鏡圖譜的普遍認知不同。為了解決這個問題，需要使用染色劑對樣品進行染色。染色劑主要是帶有正電荷的基團，在水溶液中電離后與微球表面的磷脂負電荷基團結合，使干燥后的樣品帶有正電荷，這樣就會出現黑色的背景及白色的球體。但是由于TEM試驗使用的聚合物或者金屬制細網作為樣品載體，聚合物或者金屬均帶有正電荷，對于樣品微粒帶有一定的電排斥而樣品溶液本身的濃度又比較稀，因此試驗的成功率非常低，重現性很差，經常多個樣品中均無法觀察到任何脂微球。本專利技術人通過潛心研究發現，通過采用在天平稱量中使用避免造成天平稱量漂移現象的負離子發生裝置可以解決目前現有技術中采用掃描電鏡測定脂微球/脂質乳劑微觀結構中存在的缺陷，采用電解空氣產生臭氧離子的原理產生負離子氣流，從而中和樣品或容器中的正電荷。同時采用負離子發生裝置對樣品金屬制或聚酯制的載樣容器進行處理后再利用掃描電鏡進行觀察，可以穩定的獲得清晰的脂微球/脂質乳劑微觀結構的TEM譜圖
技術實現思路
本專利技術的目的是提供一種通過對檢測樣品和載樣容器用負離子發生裝置處理后，采用掃描電鏡測定具有軟質結構的脂微球/脂質乳劑微觀結構的方法。該方法克服了現有技術中對脂微球/脂質乳劑微觀結構中存在的成功率低、重現性差、對樣品破壞嚴重、樣品用量大、不能真實反映樣品微觀結構的缺陷。本專利技術提供的脂微球/脂質乳劑微觀結構的測定方法包括將待測樣品用稀釋液稀釋成一定的濃度，干燥后用染色劑染色，采用負離子發生裝置處理染色后的樣品和掃描電鏡的載樣容器后通過掃描電鏡測定。其中，待測樣品的稀釋液為水。其中，樣品的稀釋濃度為500 5000倍。其中，染色劑為磷鑰酸或磷鎢酸或醋酸鈾。其中，負離子發生裝置為日本島津公司Stablo除電器或德國梅特勒公司ANTIST-KIT-UN去靜電裝置或德國賽多利斯公司YSTPOl去靜電筆。其中，樣品的干燥方式為真空減壓干燥或紅外燈干燥或自然風干。附圖說明圖I為比較例I的電鏡照片。圖2為比較例2的電鏡照片。圖3為比較例3的電鏡照片。圖4為比較例4的電鏡照片。圖5為實施例I的電競照片。圖6為實施例2的電鏡照片。圖7為實施例3的電鏡照片。具體實施例方式以下通過實施例形式的具體實施方式，對本專利技術的內容作進一步的詳細說明。但不應將此理解為本專利技術的范圍僅限于以下實施例。凡基于本專利技術的內容所實現的技術均屬于本專利技術的范圍。顯然，根據本專利技術的內容，按照本領域的普通技術知識和慣用手段，在不脫離本專利技術的基本技術思想的前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。比較例I 樣品未經過復染法處理的前列地爾脂微球制劑電鏡照片，稀釋倍數約500倍，結果如圖I所示。由圖I可知在未經負染處理的情況下，樣品中的微球呈黑色，且聚合在一起，視野中可以觀察到的微球數量也比較少。比較例2樣品復染法處理后較小稀釋倍數下前列地爾脂微球制劑電鏡照片，稀釋倍數約500倍，結果如圖2所不。由圖2可以觀察到脂微球的聚合現象比較明顯，無法辨認其微觀結構。比較例3 樣品復染法處理后較大稀釋倍數下前列地爾脂微球制劑電鏡照片，稀釋倍數約1000倍，結果如圖3所不。由圖3可以觀察到脂微球聚合較少，但有部分變形，與載網的結合較差，重復測定后，重現性差。 比較例4 樣品復染法處理后較大稀釋倍數通過負離子發生裝置得到的前列地爾脂微球制劑電鏡照片，稀釋倍數約2500倍，結果如圖4所示。由圖4可以觀察到脂微球聚合較少，形變較小，并可以觀察到部分微觀結構，重復測定后，圖片一致，重現性好。實施例I 樣品前列地爾注射液(商品名凱時)，負染劑磷鑰酸，稀釋倍數約2500倍，負離子發生裝置為日本島津公司Stablo除電器，干燥方式為真空減壓干燥，測試結果如圖5所示。實施例2 樣品氟比洛芬酯注射液(商品名凱紛)，負染劑磷鎢酸，稀釋倍數約1000倍，負離子發生裝置為德國梅特勒公司ANTIST-KIT-UN去靜電裝置，干燥方式為真空減壓干燥，測試結果如圖6所不。實施例3 樣品脂肪乳注射液(商品名英脫利匹特)，負染劑醋酸鈾，稀釋倍數約4000倍，負離子發生裝置為YSTPOl去靜電筆，干燥方式為紅外燈干燥，測試結果如圖7所示。由圖5、6、7可知，在采用本專利技術方法測定的3份市售樣品中，脂微球/脂質乳劑的微粒圓整、清晰、分離性好，微觀形態清楚、不聚合粘連，多次測定的重復性好。權利要求1.，其特征在于將待測樣品用稀釋液稀釋成一定的濃度，干燥后用染色劑染色，采用負離子發生裝置處理染色后的樣品和掃描電鏡的載樣容器后通過掃描電鏡測定。2.根據權利要求I所述的脂微球/脂質乳劑微觀結構的測定方法，其特征在于待測樣品的稀釋液為水。3.根據權利要求I所述的脂微球/脂質乳劑微觀結構的測定方法，其特征在于樣品的稀釋濃度為500-5000倍。4.根據權利要求I所述的脂微球/脂質乳劑微觀結構的測定方法，其特征在于染色劑為磷鑰酸，磷鎢酸，醋酸鈾。5.根據權利要求I所述的脂微球/脂質乳劑微觀結構的測定方法，其特征在于負離子發生裝置為日本島津公司Stablo除電器或德國梅特勒公司ANTIST-KIT-UN去靜電裝置或德國本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種脂微球/脂質乳劑微觀結構的測定方法，其特征在于將待測樣品用稀釋液稀釋成一定的濃度，干燥后用染色劑染色，采用負離子發生裝置處理染色后的樣品和掃描電鏡的載樣容器后通過掃描電鏡測定。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：程櫟，王偉，肖萱，劉玉靜，張偉強，楊青松，
申請(專利權)人：北京泰德制藥股份有限公司，
類型：發明
國別省市：