分離Tr1細(xì)胞的新方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)涉及用于分離Tr1細(xì)胞、休眠Tr1細(xì)胞和/或活化Tr1細(xì)胞的方法，用于在細(xì)胞群體中富集或去除Tr1細(xì)胞、休眠Tr1細(xì)胞和/或活化Tr1細(xì)胞的方法，以及用于治療慢性炎癥性疾病、自身免疫疾病、過(guò)敏性疾病、癌癥和器官移植病癥的方法和試劑盒。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
【國(guó)外來(lái)華專利技術(shù)】
本專利技術(shù)涉及用于鑒別和/或分離Trl細(xì)胞、休眠Trl細(xì)胞和/或活化Trl細(xì)胞的方法，經(jīng)過(guò)富集的Trl細(xì)胞、休眠Trl細(xì)胞和/或活化Trl細(xì)胞的群體，去除Trl細(xì)胞、休眠Trl細(xì)胞和/或活化Trl細(xì)胞的群體，以及用于診斷或治療慢性炎癥性疾病、自身免疫疾病、過(guò)敏性疾病、癌癥和器官移植病癥的方法和試劑盒。
技術(shù)介紹
免疫系統(tǒng)的體內(nèi)平衡依賴于針對(duì)入侵病原體的免疫應(yīng)答與針對(duì)自身抗原的免疫耐受之間的平衡。中樞和外周耐受都是用于誘導(dǎo)和維持T細(xì)胞耐受的重要機(jī)制。在過(guò)去的十年里，已經(jīng)對(duì)在維持外周免疫耐受方面扮演重要角色的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)給予了眾多關(guān)注。現(xiàn)在已經(jīng)公認(rèn)Treg可以分成兩種不同的亞型天然Treg(nTreg)和誘導(dǎo)型Treg群體，例如TGF-β誘導(dǎo)的Treg細(xì)胞、Trl細(xì)胞或Th3細(xì)胞。因?yàn)檫@些Treg群體在外周免疫 耐受中扮演重要角色，所以能夠鑒別、分離或富集這些不同的Treg亞組以便促進(jìn)對(duì)于免疫病癥(例如慢性炎癥性疾病、自身免疫疾病或過(guò)敏性疾病)的診斷、評(píng)估或治療已經(jīng)變成一個(gè)關(guān)鍵議題。舉例來(lái)說(shuō)，自nTreg被鑒別以來(lái)，其一直是通過(guò)⑶25的表達(dá)來(lái)進(jìn)行鑒別。然而，⑶25也是常規(guī)T細(xì)胞(convT)的一種活化標(biāo)志物，因此不是Treg細(xì)胞所專有的。通過(guò)鑒別例如 Foxp3、CD127(W02007140472)、CD45RA(W02007/117602)、CD 134 (W02009/036521)和⑶49d(W02009/047003)等細(xì)胞表面或細(xì)胞內(nèi)標(biāo)志物已經(jīng)在人類nTreg的辨別方面取得了最新進(jìn)展。關(guān)于Trl細(xì)胞，其特異性鑒別仍然存在困難且主要基于IL-10分泌辨別。因此需要提供用于更好地且更精確地辨別Trl細(xì)胞的方式。此外，Trl細(xì)胞已被證實(shí)可用于細(xì)胞療法中，Trl細(xì)胞注射入患有克羅恩病(Crohn’s disease)的患者體內(nèi)以改善其狀況。鑒于Trl細(xì)胞在細(xì)胞療法中的用途，因此需要更精確地鑒別和分離Trl細(xì)胞。專利技術(shù)人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)可使用⑶127和⑶62L細(xì)胞表面標(biāo)志物特異性地鑒別Trl細(xì)胞。實(shí)際上，除⑶4標(biāo)志物和任選的⑶25標(biāo)志物以外，另外使用⑶127和⑶62L這兩種標(biāo)志物允許在常規(guī)的休眠和活化T細(xì)胞以及休眠和活化nTreg中辨別Trl細(xì)胞。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的一個(gè)目的是一種鑒別Trl細(xì)胞群體的方法，其包含檢測(cè)細(xì)胞群體上的⑶4、⑶127和⑶62L標(biāo)志物的細(xì)胞表面表達(dá)，其中表達(dá)-CD4 和-低水平的CD127，和-低水平的CD62L，的細(xì)胞是Trl細(xì)胞。本專利技術(shù)的另一個(gè)目的是一種鑒別休眠Trl細(xì)胞群體的方法，其包含檢測(cè)細(xì)胞群體上的⑶4、⑶25、以及⑶127和⑶62L標(biāo)志物中至少一種的細(xì)胞表面表達(dá)，其中表達(dá)-CD4 和-低水平的⑶127和⑶62L中的至少一種，且不表達(dá)-CD25，的細(xì)胞是休眠Trl細(xì)胞。本專利技術(shù)的另一個(gè)目的是一種鑒別休眠Trl細(xì)胞群體的方法，其包含檢測(cè)細(xì)胞群體上的⑶4、⑶25、⑶127和⑶62L標(biāo)志物的細(xì)胞表面表達(dá)，其中表達(dá)·-CD4 和-低水平的CD 127，-低水平的CD62L，且不表達(dá)-CD25，的細(xì)胞是休眠Trl細(xì)胞。本專利技術(shù)的另一個(gè)目的是一種鑒別活化Trl細(xì)胞群體的方法，其包含檢測(cè)細(xì)胞群體上的⑶4、⑶25、⑶127和⑶62L標(biāo)志物的細(xì)胞表面表達(dá)，其中表達(dá)-CD4，-CD25，-低水平的CD127，和-低水平的CD62L，的細(xì)胞是活化Trl細(xì)胞。本專利技術(shù)的另一個(gè)目的是一種用于分離休眠或活化Trl細(xì)胞群體的方法，其包含如上所述鑒別休眠Trl細(xì)胞群體或活化Trl細(xì)胞群體，和分離所述群體。本專利技術(shù)的另一個(gè)目的是一種分離的休眠Trl細(xì)胞或活化Trl細(xì)胞群體，其是通過(guò)如上所述的方法獲得。本專利技術(shù)的另一個(gè)目的是一種經(jīng)過(guò)分離的Trl細(xì)胞群體，其是通過(guò)如上所述的方法獲得。本專利技術(shù)的另一個(gè)目的是一種經(jīng)過(guò)分離的休眠Trl細(xì)胞群體，其是通過(guò)如上所述的方法獲得。本專利技術(shù)的另一個(gè)目的是一種經(jīng)過(guò)分離的活化Trl細(xì)胞群體，其是通過(guò)如上所述的方法獲得。本專利技術(shù)的另一個(gè)目的是一種用于富集細(xì)胞群體中的Trl細(xì)胞的方法，其包含-鑒別表達(dá)⑶4、低水平的⑶127和低水平的⑶62L的細(xì)胞，-選擇所述細(xì)胞，從而獲得Trl細(xì)胞被富集的細(xì)胞群體，其中Trl細(xì)胞的百分比是富集之前Trl細(xì)胞的百分比的至少兩倍。本專利技術(shù)的另一個(gè)目的是一種用于富集細(xì)胞群體中的休眠Trl細(xì)胞的方法，其包含-鑒別表達(dá)⑶4以及低水平的⑶127和⑶62L中的至少一種，且不表達(dá)⑶25的細(xì)胞，-選擇所述細(xì)胞，從而獲得休眠Trl細(xì)胞被富集的細(xì)胞群體，其中休眠Trl細(xì)胞的百分比是富集之前休眠Trl細(xì)胞的百分比的至少兩倍。本專利技術(shù)的另一個(gè)目的是一種用于富集細(xì)胞群體中的活化Trl細(xì)胞的方法，其包含-鑒別表達(dá)⑶4、⑶25且表達(dá)低水平的⑶127和低水平的⑶62L的細(xì)胞，-選擇所述細(xì)胞， 從而獲得活化Trl細(xì)胞被富集的細(xì)胞群體，其中活化Trl細(xì)胞的百分比是富集之前活化Trl細(xì)胞的百分比的至少兩倍。本專利技術(shù)的另一個(gè)目的是一種用于富集細(xì)胞群體中的休眠和/或活化Trl細(xì)胞的方法，其包含如上所述鑒別休眠和/或活化Trl細(xì)胞，和選擇所述細(xì)胞，從而獲得休眠和/或活化Trl細(xì)胞被富集的細(xì)胞群體，其中休眠和/或活化Trl細(xì)胞的百分比是富集之前休眠和/或活化Trl細(xì)胞的百分比的至少兩倍。本專利技術(shù)的另一個(gè)目的是一種經(jīng)過(guò)富集的Trl細(xì)胞、休眠Trl細(xì)胞或活化Trl細(xì)胞的群體，其是根據(jù)如上所述的方法獲得。本專利技術(shù)的另一個(gè)目的是一種用于去除細(xì)胞群體中的Trl細(xì)胞、休眠Trl細(xì)胞或活化Trl細(xì)胞的方法，其包含-根據(jù)本專利技術(shù)鑒別Trl細(xì)胞、休眠Trl細(xì)胞或活化Trl細(xì)胞，-去除所述細(xì)胞，從而獲得Trl細(xì)胞、休眠Trl細(xì)胞或活化Trl細(xì)胞被去除的細(xì)胞群體，其中Trl細(xì)胞、休眠Trl細(xì)胞或活化Trl細(xì)胞的百分比是去除之前Trl細(xì)胞、休眠Trl細(xì)胞或活化Trl細(xì)胞的百分比的至多O. 5倍。本專利技術(shù)的另一個(gè)目的是一種用于去除細(xì)胞群體中的休眠Trl細(xì)胞和/或活化Trl細(xì)胞的方法，其包含如上文所定義那樣鑒別休眠Trl細(xì)胞和/或活化Trl細(xì)胞，和去除所述細(xì)胞，從而獲得休眠和/或活化Trl細(xì)胞被去除的細(xì)胞群體，其中休眠和/或活化Trl的百分比是去除之前休眠和/或活化Trl細(xì)胞的百分比的至多O. 75倍。本專利技術(shù)的另一個(gè)目的是一種休眠和/或活化Trl細(xì)胞被去除的細(xì)胞群體，其是根據(jù)上述方法獲得。本專利技術(shù)的另一個(gè)目的是一種Trl細(xì)胞、休眠Trl細(xì)胞或活化Trl細(xì)胞被去除的細(xì)胞群體，其是根據(jù)上述方法獲得。本專利技術(shù)的另一個(gè)目的是一種用于鑒別或分離Trl細(xì)胞群體、休眠Trl細(xì)胞群體或活化Trl細(xì)胞群體的試劑盒，其包含用于檢測(cè)⑶4、⑶25、⑶127和⑶62L的細(xì)胞表面表達(dá)的工具。本專利技術(shù)的另一個(gè)目的是一種醫(yī)藥組合物，其包含如上所述的經(jīng)過(guò)分離的休眠和/或活化Trl細(xì)胞群體,或如上所述的經(jīng)過(guò)富集的休眠和/或活化Trl細(xì)胞群體,或如上所述的休眠和/或活化Trl細(xì)胞被去除的細(xì)胞群體。在一個(gè)實(shí)施方案中，包含如上所述的經(jīng)過(guò)分離的休眠和/或活化Trl細(xì)胞群體或如上所述的經(jīng)過(guò)富集的休眠和/或活化Trl細(xì)胞群體的醫(yī)藥組合物是用于預(yù)防或治療與感染或移植或過(guò)敏性疾病有關(guān)的免疫應(yīng)答，或用于預(yù)防或治療炎癥性病癥或自身免疫病癥。本專利技術(shù)的另一個(gè)目的是一種如上所述的經(jīng)過(guò)分離和/或富集的Trl本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】

【技術(shù)特征摘要】
【國(guó)外來(lái)華專利技術(shù)】2010.04.15 EP 10368021.1;2010.04.15 US 61/324,4501.一種鑒別休眠Trl細(xì)胞群體的方法，其包括檢測(cè)細(xì)胞群體上的⑶4、⑶25、⑶127和⑶62L標(biāo)志物的細(xì)胞表面表達(dá)，其中表達(dá) -CD4 和 -低水平的CD 127， -低水平的⑶62L， 且不表達(dá)-CD25, 的細(xì)胞是休眠Trl細(xì)胞。2.一種鑒別活化Trl細(xì)胞群體的方法，其包括檢測(cè)細(xì)胞群體上的⑶4、⑶25、⑶127和⑶62L標(biāo)志物的細(xì)胞表面表達(dá)，其中表達(dá)-CD4，-CD25, -低水平的⑶127，和 -低水平的⑶62L， 的細(xì)胞是活化Trl細(xì)胞。3.一種用于分離休眠Trl細(xì)胞群體或活化Trl細(xì)胞群體的方法,其包括 -根據(jù)權(quán)利要求I或2鑒別休眠Trl細(xì)胞群體或活化Trl細(xì)胞群體，和 -分離所述群體。4.一種分離的休眠Trl細(xì)胞群體或活化Trl細(xì)胞群體，其是通過(guò)根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法獲得的。5.一種用于富集細(xì)胞群體中的休眠Trl細(xì)胞和/或活化Trl細(xì)胞的方法，其包括 -根據(jù)權(quán)利要求I或2鑒別休眠Trl細(xì)胞和/或活化Trl細(xì)胞， -選擇所述細(xì)胞， 從而獲得休眠Trl細(xì)胞和/或活化Trl細(xì)胞被富集的細(xì)胞群體，其中休眠Trl細(xì)胞和/或活化Trl細(xì)胞的百分比是富集之前休眠Trl細(xì)胞和/或活化Trl細(xì)胞的百分比的至少兩倍。6.一種富集的休眠Trl細(xì)胞群體，其是根據(jù)權(quán)利要求5獲得的。7.一種用于去除細(xì)胞群體中的休眠Trl細(xì)胞和/或活化Trl細(xì)胞的方法，其包括 -根據(jù)權(quán)利要求I鑒別休眠Trl細(xì)胞和/或根據(jù)權(quán)利要求2鑒別活化Trl細(xì)胞， -去除所述細(xì)胞， 從而獲得休眠Trl細(xì)胞和/或活化Trl細(xì)胞被去...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：阿爾諾·福薩特，瓦萊麗·布魯恩，納薩莉·貝爾蒙特，埃爾韋·巴斯蒂安，布里吉特·夸坦尼恩斯，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：特克賽爾公司，
類型：
國(guó)別省市：