一種高純度米卡芬凈前體化合物的制備方法技術

本發明專利技術公開了一種利用鞘莖點霉屬(Coleophoma?sp.)發酵培養物制備米卡芬凈前體化合物的方法。該方法包括對鞘莖點霉屬發酵培養物進行過濾、浸提、樹脂吸附、解吸、濃縮等步驟，得到FR901379的粗提物；再經硅膠層析對FR901379粗提物進一步純化，得到高純度的米卡芬凈前體化合物FR901379產品。本發明專利技術的優點在于采用樹脂吸附、硅膠層析提取分離FR901379，可以制備得到高純度的米卡芬凈前體化合物FR901379，工藝簡單易行，適宜于工業化生產。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于工業微生物
，具體涉及一種高純度米卡芬凈前體化合物FR901379的制備方法。
技術介紹
近年來，隨著廣譜抗菌藥物和免疫抑制劑的大量應用、腫瘤化療、器官移植以及艾滋病的蔓延等，導致免疫系統受到抑制的人群不斷增多，深部真菌感染的發病率開始呈現明顯的上升趨勢，且隨著抗真菌藥物的運用，真菌的耐藥性也越來越強，使得抗真菌藥物的應用有迅猛增加的趨勢。因此，抗深部真菌感染的藥物已成為抗感染藥的研究熱點之一，日益引起人們的關注。 棘白菌素是一類新型的抗真菌藥，與目前臨床常用抗真菌藥物的作用機制明顯不同，是β-1，3-葡聚糖合成酶的抑制劑，作用于真菌的細胞壁。細胞壁是真菌與哺乳動物細胞之間最大的差別，所以干擾細胞壁的合成，影響細胞壁的完整性將導致真菌細胞死亡而對人無傷害，因此副作用較小，安全性較高。目前棘白菌素類藥物已經有3個品種上市，即卡泊芬凈、米卡芬凈和阿尼芬凈。其中米卡芬凈為日本藤澤公司研制開發，2005年通過美國FDA認證，是繼卡泊芬凈之后FDA批準的第2種棘白菌素類抗真菌藥物。對念珠菌屬、曲霉菌屬引起的深部真菌感染有廣泛抗菌作用；對耐唑類藥物的白色念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌和其他念珠菌均有良好的抗菌活性。同時，米卡芬凈無腎毒性，并且與其他藥物幾乎無相互作用，因此有很好的臨床應用前景。米卡芬凈是一種水溶性半合成棘白菌素類抗真菌藥物，由前體化合物FR901379經脫酰基化酶水解后合成得到。米卡芬凈前體化合物FR901379是鞘莖點霉屬(Coleophoma sp.)的發酵代謝產物,是合成米卡芬凈的主要原料,其結構式如下權利要求1.一種高純度米卡芬凈前體化合物FR901379的制備方法，包括下述步驟 1)對米卡芬凈前體化合物FR901379發酵液進行固液分離，得到固形發酵培養物； 2)固形發酵培養物中加入極性溶劑攪拌浸提，浸提完成后進行固液分離，得到米卡芬凈前體化合物FR901379浸提液； 3)調低米卡芬凈前體化合物FR901379浸提液中極性溶劑濃度，導入吸附樹脂吸附； 4)吸附樹脂用含極性溶劑的解吸液以梯度濃度解吸； 5)將米卡芬凈前體化合物FR901379解吸液濃縮脫去極性溶劑，過濾，得米卡芬凈前體化合物FR901379粗提物； 6)將米卡芬凈前體化合物FR901379的粗提物進行硅膠層析分離，用混合溶劑洗脫； 7)硅膠層析洗脫液濃縮后，用溶劑結晶，經過濾、干燥，得到高純度的米卡芬凈前體化合物 FR901379。2.根據權利要求I所述的方法，其中步驟2)、4)所述的極性溶劑為甲醇或乙醇。3.根據權利要求I所述的方法，其中步驟2)所述的極性溶劑加入量與發酵液的體積比為 I : 2-1 : 5。4.根據權利要求I所述的方法，其中步驟3)所述的極性溶劑濃度降低至20-40%。5.根據權利要求I所述的方法，其中步驟3)所述的吸附樹脂為孔隙半徑20-300A的吸附樹脂，優選為HZ-816或D312大孔吸附樹脂。6.根據權利要求I所述的方法，其中步驟4)所述的解吸液以梯度濃度解吸，過程為40-60%濃度的解吸液洗脫1-3倍柱體積后，70-90%濃度的解吸液洗脫至米卡芬凈前體化合物FR901379全部洗脫完畢。7.根據權利要求I所述的方法，其中步驟6)所述的混合溶劑為體積比7 3的乙酸乙酯-石油醚或體積比64的丙酮-石油醚。8.根據權利要求I所述的方法，其中步驟7)所述的結晶使用的溶劑為石油醚或異丙醚，加入量為濃縮物重量的3-8倍。9.根據權利要求I所述的方法，其中步驟7)所述的結晶溫度為0-10°C。全文摘要本專利技術公開了一種利用鞘莖點霉屬(Coleophoma sp.)發酵培養物制備米卡芬凈前體化合物的方法。該方法包括對鞘莖點霉屬發酵培養物進行過濾、浸提、樹脂吸附、解吸、濃縮等步驟，得到FR901379的粗提物；再經硅膠層析對FR901379粗提物進一步純化，得到高純度的米卡芬凈前體化合物FR901379產品。本專利技術的優點在于采用樹脂吸附、硅膠層析提取分離FR901379，可以制備得到高純度的米卡芬凈前體化合物FR901379，工藝簡單易行，適宜于工業化生產。文檔編號C07K1/22GK102952179SQ20111024430公開日2013年3月6日 申請日期2011年8月24日 優先權日2011年8月24日專利技術者李寧, 張雪霞, 李曉露, 王海燕, 林毅, 張金娟, 林旸, 張麗, 任風芝, 成曉迅, 陳書紅, 張艷哲, 張艷立, 李岳, 段寶玲 申請人:華北制藥集團新藥研究開發有限責任公司本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種高純度米卡芬凈前體化合物FR901379的制備方法，包括下述步驟：1)對米卡芬凈前體化合物FR901379發酵液進行固液分離，得到固形發酵培養物；2)固形發酵培養物中加入極性溶劑攪拌浸提，浸提完成后進行固液分離，得到米卡芬凈前體化合物FR901379浸提液；3)調低米卡芬凈前體化合物FR901379浸提液中極性溶劑濃度，導入吸附樹脂吸附；4)吸附樹脂用含極性溶劑的解吸液以梯度濃度解吸；5)將米卡芬凈前體化合物FR901379解吸液濃縮脫去極性溶劑，過濾，得米卡芬凈前體化合物FR901379粗提物；6)將米卡芬凈前體化合物FR901379的粗提物進行硅膠層析分離，用混合溶劑洗脫；7)硅膠層析洗脫液濃縮后，用溶劑結晶，經過濾、干燥，得到高純度的米卡芬凈前體化合物FR901379。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：李寧，張雪霞，李曉露，王海燕，林毅，張金娟，林旸，張麗，任風芝，成曉迅，陳書紅，張艷哲，張艷立，李岳，段寶玲，
申請(專利權)人：華北制藥集團新藥研究開發有限責任公司，
類型：發明
國別省市：