一種基于酶促氨基水解反應(yīng)的三聚氰胺比色檢測方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)涉及一種基于酶促氨基水解反應(yīng)的三聚氰胺比色檢測方法。具體地，本發(fā)明專利技術(shù)提供了一種定量檢測樣品中三聚氰胺的方法，包括步驟：樣品純化、酶解反應(yīng)、顯色反應(yīng)、和繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線等。該方法測試過程簡單、快速、易操作，不需要復(fù)雜的專用設(shè)備及專業(yè)的技術(shù)人員，測試結(jié)果直觀清楚，可直接進(jìn)行目測判斷，也可精確定量，重復(fù)性高，不易受雜質(zhì)干擾，還可有效富集低含量樣品中的三聚氰胺，且符合高通量測試的條件，滿足了國內(nèi)一般消費者對三聚氰胺簡便檢測的需求。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)涉及檢測領(lǐng)域，具體地涉及。
技術(shù)介紹
三聚氰胺(Melamine)，結(jié)構(gòu)如式I化合物所示，是一種三嗪類含氮雜環(huán)有機(jī)化合物，化學(xué)式為C3H6N6，俗稱密胺、蛋白精。NH2 N入N I 人人1-feN N' Nl-t三聚氰胺是一種重要的化工原料，用于制造塑料。但是它具有毒性，不允許用作食品添加劑。當(dāng)三聚氰胺被長期反復(fù)攝入后，會造成嚴(yán)重的腎臟和膀胱的損傷，有時候這種損傷是致命的。但是由于三聚氰胺價格低廉，高氮含量，導(dǎo)致它被非法的加入到食品和飼料中來虛假的提高蛋白質(zhì)含量，比如嬰兒奶粉，牛奶，以及其他食品中。隨著國家對食品安全問題的關(guān)注和近年來中國奶業(yè)的三聚氰胺丑聞發(fā)生，三聚氰胺問題成為影響乳和乳制品安全的重要因素之一。目前，國內(nèi)發(fā)布了國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T22388-2008《原料乳與乳制品中三聚氰胺檢測方法》，該標(biāo)準(zhǔn)包括了三種檢測方法高效液相色譜法、液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法。雖然這些國家標(biāo)準(zhǔn)所介紹的方法適用于對不同對象和樣品濃度的檢測，但測試時都需要昂貴的實驗室設(shè)備和專業(yè)技術(shù)人員對樣品進(jìn)行繁瑣處理和分析，并且以上方法每臺儀器一次只能測量一個樣品，難以進(jìn)行大量樣品的高通量檢測。因為價格和通量的問題，以上方法只能對有限的樣品進(jìn)行比較精確的測量。此外，本領(lǐng)域尚缺乏高通量的、檢測低濃度或極低濃度三聚氰胺的、且操作簡便的檢測方法。因此，本領(lǐng)域迫切需要研發(fā)一種樣品處理、測試過程簡單易操作，測試結(jié)果分析簡易，且能滿足高通量測試需求的三聚氰胺的檢測方法。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的是一種三聚氰胺的檢測方法，該方法具有樣品處理、測試過程簡單易操作，測試結(jié)果分析簡易且能滿足高通量測試需求的特點。本專利技術(shù)的另一目的是提供一種適合檢測低濃度或極低濃度三聚氰胺的、且操作簡便的檢測方法。本專利技術(shù)提供了一種定量檢測待測樣品中三聚氰胺的方法，包括步驟(I)將液態(tài)的含三聚氰胺的樣品上樣于陽離子柱，并用含氨水的醇溶液為洗脫液進(jìn)行洗脫，得到含三聚氰胺的洗脫液；(2)去除含氨水的醇溶液，得到經(jīng)濃縮的三聚氰胺；(3)將濃縮的三聚氰胺溶解在惰性溶劑中，在氨基水解酶的催化下反應(yīng)，得到含式II化合物和氨的溶液；權(quán)利要求1.一種定量檢測待測樣品中三聚氰胺的方法，其特征在于，包括步驟 (1)將液態(tài)的含三聚氰胺的樣品上樣于陽離子柱，并用含氨水的醇溶液為洗脫液進(jìn)行洗脫，得到含三聚氰胺的洗脫液； (2)去除含氨水的醇溶液，得到經(jīng)濃縮的三聚氰胺； (3)將濃縮的三聚氰胺溶解在惰性溶劑中，在氨基水解酶的催化下反應(yīng)，得到含式II化合物和氨的溶液；2.如權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，步驟(3)所述反應(yīng)時間為5-40min。3.如權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，在步驟(4)中，包括步驟將測定的氨摩爾濃度或摩爾數(shù)按I:I比例換算為酶解反應(yīng)之前的三聚氰胺的摩爾濃度或摩爾數(shù)。4.如權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，在步驟(4)中，通過比色法測得的吸光度與標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)準(zhǔn)曲線比較，從而換算得到樣品中三聚氰胺的含量或濃度。5.如權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述含氨水的醇溶液包括含氨水的甲醇溶液、含氨水的乙醇溶液、或其組合。6.如權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述含氨水的醇溶液中氨水與醇的體積比例為I : 100-1 5，并且氨水的氨濃度為15wt%至飽和濃度。7.如權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，通過氮氣吹干或者烘干去除含氨水的醇溶液。8.如權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述步驟(I)中液態(tài)的含三聚氰胺的樣品是經(jīng)酸化處理的。9.如權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述待測樣品為飲料、食物、飼料、土壤、水源、或其組合。10.如權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述待測樣品中，三聚氰胺的濃度為O.001-100ppm。全文摘要本專利技術(shù)涉及。具體地，本專利技術(shù)提供了一種定量檢測樣品中三聚氰胺的方法，包括步驟樣品純化、酶解反應(yīng)、顯色反應(yīng)、和繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線等。該方法測試過程簡單、快速、易操作，不需要復(fù)雜的專用設(shè)備及專業(yè)的技術(shù)人員，測試結(jié)果直觀清楚，可直接進(jìn)行目測判斷，也可精確定量，重復(fù)性高，不易受雜質(zhì)干擾，還可有效富集低含量樣品中的三聚氰胺，且符合高通量測試的條件，滿足了國內(nèi)一般消費者對三聚氰胺簡便檢測的需求。文檔編號G01N21/78GK102954959SQ201110251219公開日2013年3月6日 申請日期2011年8月29日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月29日專利技術(shù)者周佳海, 黃維雪, 張志民 申請人:中國科學(xué)院上海有機(jī)化學(xué)研究所本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點】
一種定量檢測待測樣品中三聚氰胺的方法，其特征在于，包括步驟：(1)將液態(tài)的含三聚氰胺的樣品上樣于陽離子柱，并用含氨水的醇溶液為洗脫液進(jìn)行洗脫，得到含三聚氰胺的洗脫液；(2)去除含氨水的醇溶液，得到經(jīng)濃縮的三聚氰胺；(3)將濃縮的三聚氰胺溶解在惰性溶劑中，在氨基水解酶的催化下反應(yīng)，得到含式II化合物和氨的溶液；(4)通過比色法檢測上述溶液中氨的濃度，從而換算得出所述待測樣品中三聚氰胺的含量或濃度。FDA0000087058000000011.tif

【技術(shù)特征摘要】

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：周佳海，黃維雪，張志民，
申請(專利權(quán))人：中國科學(xué)院上海有機(jī)化學(xué)研究所，
類型：發(fā)明
國別省市：