一種用于鵝肉表面細菌數直接計數的無損檢測方法技術

一種用于鵝肉表面細菌數直接計數的無損檢測方法，涉及生肉以及加工制熟后產品的微生物學檢驗的技術領域，將經消毒的血球計數板對著鵝肉表面作輕觸按壓制成觸片，涼干后，經火焰固定、染色、水洗、瀝干后鏡檢，最后利用血球計數板固有的格的面積換算出樣品中單位面積的細菌個數。本發明專利技術具有在線、實時、無損取樣、耗材少特點以及操作方便、省時優點，應用于生產過程中對不同品質肉類原料、中間產品與制成品的細菌數在線檢測，尤其適合于非標準化原料加工的整鵝類產品如風鵝、鹽水鵝、咸鵝的工廠化生產，可提高監控效率與水平，減少腐敗食品損失率。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及生肉以及加工制熟后產品的微生物學檢驗的
，特別涉及鵝肉加工前、后的細菌數測定方法。
技術介紹
食品所含細菌數常以細菌總數或菌落總數表示，是食品衛生學中的重要微生物指標，主要作為判別食品被污染程度的一個重要標志。具體應用于觀察食品中細菌繁殖動態、食品的新鮮程度、預測食品的衛生質量、預測食品的存放期限，以及對食品及其生產進行衛生學的總體評價。食品細菌數測定法，有現行列入我國國家標準方法的細菌菌落總數測定——平板菌落計數法，其檢驗方法是：在玻璃平皿內，接種1ml水浸樣或稀釋水浸樣于加熱液化的營養瓊脂培養基中，冷卻凝固后在37℃培養24h，培養基上的菌落數乘以水樣的稀釋倍數即為食品的細菌總數。有的國家把培養溫度定為35℃或其他溫度，也有把培養時間定為48h的。這種方法精度高，但耗時需要一天以上，難以滿足在線檢測的實際工作需要，加之取樣會破壞樣品組織結構，增加了樣品成本。近年來國內外報道的新方法還有阻抗檢測法、SimplateTM全平皿計數法、微菌落培養計數法、紙片法等檢測方法，但這些方法都至少需要為時4h的微生物培養時間，其取樣均采用稱量法，對整禽來說，會破壞外表結構，影響造型，無法滿足生產車間在線監測、即時報告的要求。表面積取樣法屬于無損取樣法，我國規定允許應用于食品器具、餐具的采樣，有濾紙黏貼法，棉棒涂布法。濾紙黏貼法要消耗一定規格的專用無菌濾紙，對不同部位進行涂布，棉棒涂布法需要將專用規格板貼于肉表面，使用的無菌棉棒只能一次性使用。濾紙黏貼法、棉棒涂布法兩種采樣法得到的樣品均需以無菌水洗滌、稀釋、培養24h后計數,因而不能用于生產車間的在線快速檢測。對于來自健康動物的肉品，其微生物往往先污染表面，并逐漸由外而內，在污染初期，肉中心的細菌數低于表面，但在保藏的中后期，特別是接近腐敗變質時，兩者細菌數相當，而在腐敗后，可能由于表面較為干燥等原因（如風鵝），分布于表面的細菌數低于肉中心的細菌數。對于車間生產的食品，如果接近腐敗變質，則用表面取樣代替中心取樣計數是可行的，也是國外通用的方法，其細菌數標準（個/cm2）往往比中心取樣的標準（個/g）高出一個數量級。肉品表面細菌數的測定，國內外均使用濾紙粘貼取樣法，其所得樣品需經無菌水浸漬、振搖、樣品稀釋、傾注平板、控溫培養等，顯然不屬于快速檢測范疇。以觸片鏡檢觀察細菌的形態與大小，是獸醫臨床微生物學檢驗
為確診致病原提供初步線索的一種定性檢測的方法，由于以普通的載玻片制作觸片，因而只能以一個視野為單位，顯然不能滿足細菌數以肉制品表面每cm2為計數單位的要求。如何能快速地檢測肉類食品的細菌數，為廣大肉制品加工業提供不破壞樣品組織結構，具有在線、實時、無損取樣、耗材少特點，操作方便、省時，可使用于生產過程中對食品新鮮度評價與在線檢測的實用技術，是食品衛生檢驗領域面臨的一個長期未得到解決的嚴峻的技術問題。
技術實現思路
本專利技術目的是提出一種快速、準確、適合在線檢測的用于鵝肉表面細菌數直接計數的無損檢測方法。本專利技術的技術方案是：將經消毒的血球計數板對著鵝肉表面作輕觸按壓制成觸片，涼干后，經火焰固定、染色、水洗、瀝干后鏡檢，最后利用血球計數板固有的格的面積換算出樣品中單位面積的細菌個數。本專利技術通過構建一種以血球計數板為載體的觸片計數新方法，只花費極短時間在顯微鏡下操作，稍加計算便可得出結果。本專利技術優點：1、選用血球計數板為載體制作細菌觸片，一是利用其固有的格的面積換算出單位面積肉類食品的細菌總數，避免了使用模具和涂布棒（表面涂布法，需要預消毒）、量剪濾紙（濾紙黏貼法，需要預消毒）操作，提高了數據精確度（普通載玻片只能以（個/視野）為單位概略定量），二是計數板可以重復利用，降低采樣耗材。2、本專利技術取樣操作在瞬間完成（比表面涂布法省時3min，比濾紙黏貼法省時10min），只要根據食品的流量準備計數板，可在較短時間內完成對多個可疑單元食品的同時取樣，取樣的時效性強。3、原食品保持完好無損（優于重量法），有利于新鮮合格食品的進一步加工，減少樣品耗材。4、觸片經染色后在顯微鏡下觀察，即行直接計數，每個樣品檢測時間低于1h（其他表面積法均需要將樣品控溫培養4h-24h），具有在線監測的功能。5、可采用以一個計數板的兩個計數室的計數值的平均值報告結果，滿足統計學要求。6、能及時在許多食品單元中高效剔除變質個體，尤其適合于重量不一的非標準化原料加工的整禽類產品，如風鵝、板鵝、咸鵝和相關禽類產品的工廠化生產在線篩查。具體實施方式實例1：光鵝表面細菌數測定待檢樣品制作：活鵝經宰殺，放血，脫毛，凈膛，瀝干，置37℃下，每隔2h取出，備檢。血球計數板預處理：對血球計數板以流動水沖洗后滴上數滴95%的乙醇，揮發后備用。制片：將經消毒后的血球計數板對著鵝肉表面作輕觸按壓制成觸片，涼干后經火焰固定、革蘭氏染色、水洗、瀝干后，用于鏡檢。利用血球計數板固有的格的面積換算出樣品中單位面積的細菌個數。同時與標準面積濾紙粘貼法的比較，結果見表1、表2。用SPSS11.5軟件行二元變量相關分析顯示：光鵝血球計數板觸片法取樣測定細菌數與標準面積濾紙黏貼法取樣測定細菌數的Pearson相關系數為0.903（P=0.02，＜0.05）。表1??光鵝血球計數板觸片法細菌數測定結果時間(h)細菌數(個/cm2)時間(h)細菌數(個/cm2)02.7×10387.6×10425.9×103108.8×10448.2×103122.4×10669.4×103144.4×106表2???光鵝標準面積濾紙黏貼法細菌數測定結果時間(h)細菌數(個/cm2)時間(h)細菌數(個/cm2)03.8×10286.4×10429.8×102101.9×10541.8×103126.8×10562.0×103149.1×106實例2：鹽水鵝表面細菌數測定待檢樣品制作：將光鵝經腌制后加入有一定比例的食鹽、香料鹵煮45min至熟，撈出，瀝干，置37℃下，每隔2h取出，備檢。血球計數板預處理：對血球計數板以流動水沖洗后滴上數滴丙酮，待揮發后備用。制片：將經消毒后的血球計數板對著鵝肉表面作輕觸按壓制成觸片，涼干后經火焰固定、結晶紫染色、水洗、瀝干后，用于鏡檢。利用血球計數板固有的格的面積換算出樣品中單位面積的細菌個數。同時與標準面積濾紙粘貼法的比較，結果見表3、表4。用SPSS11.5軟件進行二元變量相關分析顯示：鹽水鵝血球計數板觸片法取樣測定細菌數與標準面積濾紙黏貼法取樣測定細菌數的Pearson相關系數為0.778（P=0.04，＜0.05）。表3??鹽水鵝血球計數板觸片法細菌數測定結果時間(h)細菌數(個/cm2)時間(h)細菌數(個/cm2)02.9×10382.4×10621.6×104102.5×10645.5×104123.9×10666.9×10414多不可計表4??鹽水鵝標準面積濾紙黏貼法細本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種用于鵝肉表面細菌數直接計數的無損檢測方法，其特征在于：將經消毒的血球計數板對著鵝肉表面作輕觸按壓制成觸片，涼干后，經火焰固定、染色、水洗、瀝干后鏡檢，最后利用血球計數板固有的格的面積換算出樣品中單位面積的細菌個數。

【技術特征摘要】
1.一種用于鵝肉表面細菌數直接計數的無損檢測方法，其特征在于：將經消毒的血球計數板對著鵝肉表面作輕觸按壓制成觸片，...

【專利技術屬性】
技術研發人員：韋金榮，蔣云升，汪志君，葛慶豐，董杰，薛菲，
申請(專利權)人：揚州口緣食品有限公司，
類型：發明
國別省市：