一種細菌耐藥性診斷試劑盒制造技術

本實用新型專利技術提供了一種細菌耐藥性診斷試劑盒，其特征在于，它包括：長方形盒體（1）及與其一側邊彎折連體的盒蓋（2），而在盒體內放置有試劑架（3），試劑架上形成有分別放置熒光底物瓶（4）、雙蒸餾水瓶（5）、非變性細胞裂解緩沖液瓶（6）、樣品瓶（7）和空白對照瓶（8）以及相應的5個長方體插孔（9）。本實用新型專利技術提供細菌耐藥性診斷試劑盒可以檢測出市售產品所不能檢測的頭孢3、4代耐藥菌，且可達到105～108個耐藥菌的檢測值，填補了市場空白，為臨床中抗生素的使用提供了更有效的監測方法和使用向導，具有極大的實用價值。（*該技術在2022年保護過期，可自由使用*）

【技術實現步驟摘要】

本技術涉及生物
，具體地說是涉及一種熒光檢測細菌耐藥性診斷試劑盒，更具體地說是涉及一種熒光檢測β內酰胺類抗生素治療的細菌耐藥性診斷試劑盒。技術背景 自從人類在上世紀20年代首次發現以青霉素為代表的β_內酰胺類抗生素以來，它們已經成為治療細菌感染的一線藥物，挽救了無數人的生命。同其它類別的抗生素相比，β -內酰胺類抗生素具有療效高，毒性低的特性。但是，細菌也在不斷的進化各種抗藥機制。目前，抗藥性細菌感染已經成為全球性的問題。特別是在中國，印度，已經其他一些國家，由于存在著濫用抗生素的現象，出現超級抗藥性細菌，從而導致無藥可治的可能性是不容忽視的。細菌對抗β -內酰胺類抗生素的最主要機制是通過β -內酰胺酶實現的。它們可以有效的分解內酰胺類抗生素。為抵消這些酶的作用，在臨床上可以采取了兩種方法。第一，共同使用β_內酰胺類藥物和β_內酰胺酶抑制劑。一些處方藥利用這一策略，包括(氨芐青霉素+舒巴克坦)和(阿莫西林+克拉維酸鉀)。第二是開發不被普通β-內酰胺酶降解的藥物，比如許多第三和第四代的廣譜頭孢菌素。然而，抗生素的發展和抗藥性細菌的出現是一個矛和盾的關系。目前，許多在臨床上檢測到的細菌已經具有了分解第三和第四代的頭孢菌素的能力。這主要是由廣譜內酰胺酶所造成的。由于細菌耐藥性的發展與誤用/濫用抗生素是緊密相關的，為延長廣譜抗生素的有效使用期，在臨床上治療細菌感染應該盡可能的做到對癥下藥，避免使用無必要的廣譜抗生素。為了實現這一目標，快速，靈敏，和準確診斷細菌菌株對各種內酰胺類藥物的藥敏程度是必須的步驟。在西方發達國家，抗生素的使用受到嚴格控制。但在中國，印度，以及發展中國家，抗生素被大大濫用和誤用，其后果是抗藥性細菌的不斷出現。2009年在印度出現的新德里金屬內酰胺酶，NDM-1，是一個典型的例子。這個蛋白質酶可以水解目前所有的β-內酰胺類抗生素。換句話說，含有NDM-I的細菌可以抵御任何β-內酰胺類抗生素。同時，由于全球的交通便利，在一地得到的抗藥性細菌可以很容易的傳播到世界各地，從而造成大規模的微生物感染。為盡可能的延緩抗藥性細菌的出現和延長現有抗生素的使用壽命，防止抗生素的濫用和誤用是一個有力的手段。這要求在臨床治療細菌感染過程中，能夠盡快確定細菌對不同抗生素的抗藥和敏感程度，以防止過分使用，或者無效使用抗生素。另外，在治療敗血癥病人時，由于及早使用正確的抗生素和病人的生存率直接掛鉤，這也需要盡快確定細菌對不同抗生素的抗藥和敏感程度。β -內酰胺類抗生素被廣泛應用在臨床和畜牧業中用來治療細菌感染。特別是第三四代頭孢菌素是一線抗生素藥物。但是，廣譜內酰胺酶的出現使得三四代頭孢菌素不再是治療細菌感染的萬能妙藥。在臨床上迫切需要一種快速的能夠確定細菌是否對三四代頭孢菌素具有抗藥性的分析方法。利用β-內酰胺酶的熒光底物來檢測β-內酰胺酶的存在是一個普遍的分析方法。事實上，目前許多現有的熒光β-內酰胺酶的底物可以做到高靈敏度和實時的對β-內酰胺酶進行檢測。然而，所以這些分子都不具有選擇性，即不可能區分普通和廣譜β-內酰胺酶。由于含有普通內酰胺酶的細菌對第三四代廣譜頭孢菌素敏感，而含有廣譜β_內酰胺酶的細菌對第三 代廣譜頭孢菌素具有抗藥性。我們希望能夠有一種快捷的方法來區分這兩類細菌，從而可以盡快確定臨床細菌感染是否可以用第三四代廣譜頭孢菌素來治療。目前，國內外用來檢測細菌抗藥性的方法可以分成3大類。第一類是基于傳統的微生物培養技術，又可以分為液體培養基和固態培養基的方法。液體培養基方法可以準確測定一種抗生素的最低抑菌濃度。但是，當待測抗生素品種較多時，此方法工作量大，所以已經逐漸被固態培養基方法所取代。固態培養基方法又可以分為若干類，主要有紙片擴散法，E-test，等等。比如，在紙片擴散中，不同的抗生素藥片被放置在固態培養基表面。當細菌在培養基表面生長時，如果對某種抗生素敏感，這在此藥片周圍形成一個清晰的環狀無菌帶。其大小受細菌對抗生素的敏感程度所決定。如果細菌對此抗生素有抗藥性，這不會形成此無菌帶。這類基于微生物培養技術的方法目前是細菌抗藥性檢測的主流方法。但是，由于細菌生長需要時間，此類方法至少需要48-72小時。對于生長緩慢的細菌，比如結核分支桿菌，需要的時間更長，因此對于需要盡快知道細菌抗藥性的情況，例如敗血癥病人的治療，這類方法無法及時提供選擇抗生素的必要信息。第二類方法是基于聚合酶鏈反應的基因方法。病人樣品可以用針對β -內酰胺酶基因的特定探針進行基因擴增，然后來檢測得到抗藥性的基因變異。此類方法快速，靈敏。但是，由于此類方法不是功能性測定，所以只能用來檢測已知的耐藥機制，而不能確定以往未知的全新抗藥機理。第三類方法是直接測定β -內酰胺酶的降解β -內酰胺類抗生素的功能。目前有多種內酰胺酶的熒光底物可以選擇。這類底物本身沒有熒光，但是，當它們被內酰胺酶分解后，會有熒光產品出現。通過觀測熒光強度變化，可以確定內酰胺酶的存在。但是，現有內酰胺酶底物無法區分普通和廣譜內酰胺酶。所以并不能夠起到指導抗生素選擇的作用。概括而言，雖然目前的相關技術在它們的適用領域中有無可取代的位置，但在特定的應用中，特別是在處理治療敗血癥病人的過程中，它們也有著種種局限。所以，一種可以快速區分普通和廣譜β_內酰胺酶的檢驗方法是迫切需要的。在國內外尚無同類產品。類似產品有日本Kanto Chemical公司生產的Cica-β-test試劑。Cica-β-test試劑也可以用來檢測細菌是否對三四代頭孢菌素具有抗藥性。但是，由于Cica-β-test試劑檢測依賴于顏色變化(陽性樣品的顏色從黃色變到紅色)，靈敏度至少要比本產品的熒光檢測法低一個數量級，同時也不能直接用于血液檢測。另外一個類似產品是美國LifeTechnologies公司生產的GeneBLAze試劑。GeneBLAze試劑也是基于突光檢測，但是，此試劑只能用來無差別的檢測所有的β_內酰胺酶的存在，而不能特異性的檢測能夠降解三四代頭孢菌的廣譜內酰胺酶。此外，GeneBLAze試劑只是一個研究用產品，用來進行一些真核細胞的光學顯像實驗，而不是在臨床上用于檢測細菌抗藥性。
技術實現思路
本技術所需要解決的技術問題是提供了新的廣譜內酰胺酶耐藥性診斷試劑，以克服現有技術存在的上述缺陷。為實現上述目的，本技術提供如下技術方案一種細菌耐藥性診斷試劑盒，包括長方形盒體(I)及與其一側邊彎折連體的盒蓋(2),而在盒體內放置有試劑架(3),試劑架上形成有分別放置熒光底物瓶(4)、雙蒸懼水瓶(5)、非變性細胞裂解緩沖液瓶(6)、樣品瓶(7)和空白對照瓶(8)以及相應的5個長方體插孔(9)。優選地，所述的熒光底物包含以下化合物(I)或其對映體、消旋體或非對映異構體 H3CO2C^Y、K I0優選地，所述的非變性細胞緩沖液包括pH值7. 5的磷酸鈉緩沖液、氯化鈉、聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)。優選地，所述的非變性細胞緩沖液包括20毫摩爾/升pH值7. 5的磷酸鈉緩沖液、150毫摩爾/升的氯化鈉、1%的聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)。與現有技術相比，本技術具有如下技術特長本技術為醫藥等行業提供了一種新的細菌耐藥性熒光本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種細菌耐藥性診斷試劑盒，其特征在于，它包括：長方形盒體（1）及與其一側邊彎折連體的盒蓋（2），而在盒體內放置有試劑架（3），試劑架上形成有分別放置熒光底物瓶（4）、雙蒸餾水瓶（5）、非變性細胞裂解緩沖液瓶（6）、樣品瓶（7）和空白對照瓶（8）以及相應的5個長方體插孔（9）。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：王郁生，
申請(專利權)人：上海百可生物科技有限公司，
類型：實用新型
國別省市：