本發明專利技術公開了一種生產二元酸的菌株及其發酵方法，所述菌株為清酒假絲酵母CCTCC?No.M2011489。所述方法包括以下步驟：a）在含至少一種氮源和至少一種有機底物的培養基中培養清酒假絲酵母CCTCC?No.M2011489；和b）從步驟a）中得到的培養液中回收二元酸。使用本發明專利技術的高轉化率的假絲酵母生產長鏈二元酸可以完全取代多步合成的化學法，而且產量高，能耗低，起始原材料可以不采用石化原材料。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于微生物發酵領域，具體地說，是關于。
技術介紹
長鏈二元酸(LCDA ;也稱為長鏈二羧酸和長鏈二酸)包括化學式HOOC(CH2)nCOOH的二元酸，其中η > 7。長鏈二元酸可以用來生產各種產品和中間品，例如生產聚酰胺，也稱尼龍，用于電纜的皮層和牙刷絲；用于生產的共聚酰胺粘合劑和聚酯膠黏劑和高性能涂料； 用于制造汽車輪轂的GMA粉末涂料交聯劑；用于在金屬加工業和工業冷卻系統中使用的防銹劑；用于制造合成潤滑油，例如汽車潤滑油；用于制造各種的個人護理產品以及家庭用品，例如香水和家用清潔劑。本領域存在多種長鏈二元酸的化學合成方法，但使用化學方法工藝復雜且大部分得到的是長鏈二元酸與短鏈二元酸的混合物。因此，用這些方法生產長鏈二元酸時需要進一步純化步驟。本領域熟知有幾種酵母菌在以烷烴或脂肪酸作為碳源時可以生產長鏈二元酸。酵母對烷烴和脂肪酸進行新陳代謝時有三個生物化學過程烷烴至脂肪酸的alpha氧化，脂肪酸至alpha-, omega- 二元酸的omega氧化以及脂肪酸至CO2和水的降解型beta-氧化。相對于非生物轉化方法，生產二元酸的生物轉化方法具有多種潛在優勢。其中主要在于使用可再生的原料作為起始材料以及生產二元酸過程中不產生有害化學副產物的能力。使用生物方法的另一重要優勢在于這種方法可容易地調節以利用相同生物催化劑和相同設備生產多種二元酸。因為現有化學合成法合成僅適于生產單種二元酸，不同二元酸合成將需要針對各二元酸開發新的合成方案。另一方面，酵母生物催化劑可以利用相同設備、培養基和步驟生產各種長度的二元酸，不同之處僅在于給酵母提供不同碳原子長度的底物。 雖然可以利用各種技術來提高現有的酵母例如熱帶假絲酵母(Candida tropicalis)發酵二元酸的產量，但還可以通過提供新的假絲酵母菌株以生產更高產量的長鏈二元酸，包括十二碳二元酸、十三碳二元酸、十四碳二元酸、十五碳二元酸和十六碳二元酸。
技術實現思路
本專利技術的一個目的是提供新的菌株和利用這些菌株生產一種或多種長鏈二元酸的方法。使用該高轉化率的假絲酵母來生產長鏈二元酸可以完全取代多步合成的化學法， 而且產量高，能耗低，起始原材料可以不采用石化原材料，雖然該材料也可用于本專利技術中。本專利技術提供了一株新的清酒假絲酵母菌CAT H430,以及使用CAT H430生產二元酸的方法。在本專利技術的一些實施例中，CAT H430在標準的500mL搖瓶中、按照下面所述的發酵條件下，可以產生至少100g/L的十二碳二元酸。在本專利技術的另一些實施例中，CAT H430 在標準的IOL發酵罐中、按照下面所述的發酵條件下，可以產生至少100g/L的十二碳二元酸，且達到90%以上的重量轉化率(w/w，烷烴轉換為二元酸的重量百分比)。在本專利技術的其他一些實施例中，CAT H430在標準的200M3發酵罐中、按照下面所述的發酵條件下，可以產生至少100g/L的十二碳二元酸，且達到90%以上的重量轉化率(w/w，烷烴轉換為二元酸的重量百分比)。在本專利技術的一些實施例中，CAT H430可以生產的二元酸的化學式為 H00C (CH2)nCOOH,其中η彡2。在本專利技術的一些實施例中，二元酸可以是丁二酸、戊二酸、己二酸、庚二酸、辛二酸、壬二酸、癸二酸、i^一碳二元酸、十二碳二元酸、十三碳二元酸、十四碳二元酸、十五碳二元酸、十六碳二元酸、十七碳二元酸、十八碳二元酸，或其組合物。在本專利技術的一些實施例中，提供了用于生產二元酸的方法，所述方法包括以下步驟a)、在含有至少一種氮源和至少一種有機底物的培養基中培養清酒假絲酵母CAT H430 ;和b)、從步驟a)中得到的培養液中回收二元酸。在本專利技術的一些實施例中，所述的至少一種有機底物，從如下物質中選擇具有4 到22個碳原子的烷烴，具有4到22個碳原子的羧酸(例如具有10到22個碳原子的脂肪酸)，具有I到12個碳原子的醇與具有10到22個碳原子的脂肪酸經酯化反應得到的脂肪酸烷基酯。在本專利技術的一些實施例中，所述的二元酸可以是丁二酸、戊二酸、己二酸、庚二酸、 辛二酸、壬二酸、癸二酸、i^一碳二元酸，十二碳二元酸、十三碳二元酸、十四碳二元酸、十五碳二元酸、十六碳二元酸、十七碳二元酸、十八碳二元酸，或其組合物。本專利技術的其他目的和優勢可以在下文展現，也有可能在實施過程中得到展現。本專利技術的目的和優勢通過技術特征及其結合得到，特別能從權利要求中體現這點。應理解，上文的總體描述和下文的具體描述僅僅是對本專利技術的解釋和示范，不應被認為是對本專利技術的限制。附圖說明 圖1為清酒假絲酵母CAT H430的篩選流程圖。具體實施方式生物保藏信息清酒假絲酵母CAT H430 (Candida sake CAT H430)根據《布達佩斯協議》于2011 年12月29日保藏在中國典型培養物保藏中心(CCTCC)，地址中國武漢，武漢大學，保藏編號為 M2011489。長鏈二元酸(LCDA ;也稱為長鏈二羧酸和長鏈二酸)包括化學式HOOC(CH2)nCOOH 的二元酸，其中η彡7。LCDA的例子包括i^一碳二元酸(H00C(CH2)9C00H，1，9-九碳二羧酸或1，11-1^一碳二元酸，本專利技術中標記為“DC11”)，十二碳二元酸(H00C(CH2)ltlCOOH, 1，10-十碳二羧酸或1，12-十二碳二元酸，本專利技術中標記為“DC12”)，十三碳二元酸 (H00C(CH2)nC00H,l, 11-^^一碳二羧酸或I, 13-十三碳二元酸，本專利技術中標記為“DC13”)， 十四碳二元酸(HOOC(CH2) 12C00H，1，12-十二碳二羧酸或1，14-十四碳二元酸，本專利技術中標記為“DC14”)，十五碳二元酸(HOOC(CH2) 13C00H，1，13-十三碳二羧酸或I, 15-十五碳二元酸，本專利技術中標記為“DC15”)，十六碳二元酸(H00C(CH2)14COOH, I，14-十四碳二羧酸或1，16-十六碳二元酸，本專利技術中標記為“DC16”)，十七碳二元酸(H00C(CH2)15COOH, 1，15-十五碳二羧酸或1，17-十七碳二元酸，本專利技術中標記為“DC17”)，十八碳二元酸 (H00C(CH2)16C00H,1, 16-十六碳二羧酸或1，18-十八碳二元酸，本專利技術中標記為“DC18”)。清酒假絲酵母CAT H430在不同的發酵過程中可以產生各種二元酸，尤其是長鏈二元酸。在本專利技術的一些實施例中，長鏈二元酸生產過程是在含有至少一種氮源和至少一種有機底物的培養基中培養清酒假絲酵母CAT H430。在本專利技術的一些實施例中，所述的至少一種有機底物可以是具有4到22個碳原子的烷烴，具有4到22個碳原子的羧酸(例如具有10至22個碳原子的脂肪酸)，具有從I到12個碳原子的醇與具有10到22個碳原子的脂肪酸經酯化反應得到的脂肪酸烷基酯。本專利技術所述的菌株CAT H430是從山東省濱州市郊區勝利油田采集的樣品中分離得到的。首先，將所采集得到的所有樣品用O. 7%NaCl溶液稀釋1000倍；稀釋得到的樣品經過培養，并分離得到單菌落；測試分離得到的單菌落的產長鏈二元酸的能力；得到一株產長碳鏈二元酸含量最高的菌株，并命名為清酒假絲酵母CAT H400 ;并以此菌株作為出發菌進行誘變篩選，誘變方法主本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種生產二元酸的菌株，其特征在于，所述菌株為清酒假絲酵母CCTCC?No.M2011489。
【技術特征摘要】
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【專利技術屬性】
技術研發人員：劉馳，廖錦繡，汪江林，秦海斌，李乃強，
申請(專利權)人：上海凱賽生物技術研發中心有限公司，山東凱賽生物科技材料有限公司，上海凱賽生物科技有限公司，凱賽生物產業有限公司，
類型：發明
國別省市：
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