確定腫瘤轉移可能性的方法技術

本發明專利技術涉及腫瘤生物學領域。本發明專利技術提供了一種用于確定腫瘤轉移風險的方法，尤其提供了一種用于確定在骨髓中血原性播散和/或歸巢/存活的風險的方法，其中確定從患者獲得的腫瘤樣品中RAI2的表達，及可選擇的其它基因的表達。本發明專利技術進一步提供了一種用于確定RAI2和/或其它基因表達的試劑盒。本發明專利技術公開了一種包括基因或蛋白形式的RAI2的藥物組合物，該藥物組合物尤其用于預防和/或治療腫瘤的轉移。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術涉及腫瘤生物學領域。本專利技術尤其提供了一種用于確定腫瘤早期轉移可能性的方法。本專利技術對作為轉移復發的前提條件的腫瘤細胞的播散及這些細胞在骨髓(BM)和/或遠處器官中的存活具有重要影響。通過確定從患者獲得的腫瘤樣品中RAI2和可選擇的其它基因的表達，以評估患者腫瘤轉移的風險和/或與癌癥相關的死亡的風險。本專利技術進一步提供了一種用于確定RAI2和/或其它基因的表達的試劑盒。本專利技術公開了一種包括基因或蛋白形式的RAI2的藥物組合物，該藥物組合物尤其用于預防和/或治療腫瘤的轉移，且因此用于預防與癌癥相關的死亡。
技術介紹
來源于上皮組織的固體腫瘤(即癌)是工業化國家中癌癥的主要形式，且在德國每年有近380，000件新病例。這些腫瘤發展中的關鍵因素是腫瘤細胞從原發病灶通過血液循環進入遠處器官的全身性擴散。轉移作為與癌癥相關的死亡的主要原因是復雜的多步驟的過程。即使通過高分辨率成像技術也仍檢測不到該關鍵過程的開始(即單個腫瘤細胞的播散)，因為這些技術不能在單個細胞水平檢測正在轉移的細胞(Pantel等，2008)。本專利技術人和其他研究人員已示出播散的腫瘤細胞(DTC)的存在是乳腺癌(Braun等，2005)和其它固體腫瘤(K^Mermarm等，2008 ;Dango等,2008)中轉移復發的獨立的預報因子。這些DTC細胞經過化療后仍可存活，且在BM中以“休眠”狀態存留多年(Janni等，2005)，這表明BM可能是轉移細胞的儲存器(Wikman等，2008 ；Pantel等，2008)。迄今為止，還不清楚是否由于DCT中再次(de novo)發生突變還是來自周圍環境的信號使得這些細胞從休眠狀態中脫出，從而導致增殖和明顯的轉移的形成(Pantel等,2008 ;Wikman等,2008)。已示出在乳腺癌患者的骨髓中檢測到的大部分早期播散的癌細胞具有CD44(+)和CD24(-/低)的表型。該公認的乳腺癌干細胞表型存在于與自我更新和致瘤可能性相關的原發乳腺癌的小部分群體中(Balic等，2006)。迄今為止，幾個重要的致癌基因和腫瘤抑制基因(TSG)對乳腺癌形成是眾所周知的，其中包括HER2、p53和EGFR。但對專一促進或抑制轉移級聯過程關鍵步驟的基因的特異作用卻知道的很少。在這些中，由定義可知，轉移抑制基因(MSG)在轉移級聯過程的任意步驟處抑制轉移，但不會阻止原發腫瘤的生長(Stafford等，2008)。由于這類基因編碼具有廣泛生化活性的蛋白，因此僅通過它們能夠抑制轉移的能力來統一這類基因。已示出正在擴展的轉移抑制基因的名單通過調節信號轉導途徑和通過其它像粘附遷移、凋亡和血管生成一樣多樣性的分子功能來起作用(Stafford等，2008)。此外，MSG對轉移級聯過程的不同階段產生影響，以顯現它們的抑制效果。一些MSG(如E-鈣粘蛋白或凝溶膠蛋白(Gelsolin))抑制原發腫瘤中腫瘤細胞的運動性和侵潤，而其它MSG(如DCC和半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-8)抑制循環中的細胞存活(Eccles等，2007)。已暗示其它MSG在腫瘤休眠中的繼發灶(secondary site)處起作用，從而調節轉移的最終階段。但是由于轉移是癌癥相關死亡的主要原因，且轉移中的每一個步驟均被認為是速率限定性的(Pantel和Brakenhoff，2004)，因此抑制轉移級聯過程中的任一步驟的基因或蛋白的重建均應為癌癥患者的治療提供了有希望的治療窗口。雖然靶定陰性調節因子是具有技術挑戰性的，但最近的工作已成功地重新導入MSG的功能,給予了基因產物本身(Taneka等2007)或被抑制蛋白調節的祀定的可作為藥物的分子(Boucharaba 2006)。雖然這些策略中還沒有一個在常規臨床應用中使用，但正在臨床前和臨床試驗中對這些策略進行試驗。因此，其它MSG的識別可促使發現其它有希望的基于轉移抑制基因的策略。已開發出用于骨髓和外周血中播散的腫瘤細胞的富集、檢測和鑒定的新技術。可在數百萬的正常骨髓或血液細胞的背景下檢測到單個播散的腫瘤細胞(DTC)。使用免疫細胞化學雙染色技術，已描述了 DTC中不同蛋白的表達模式，包括K1-67、pl20、EGFR、Her2、轉移-R、EMMPRIN、uPAR 和 EpCam (Pantel 和 fcakenhoff，2008)。 與未轉移的腫瘤相比，在高轉移的原發性腫瘤中大部分轉移抑制基因表現出表達降低。因此通過對比不同轉移能力的細胞或組織進行識別轉移抑制基因的篩選實驗。在小規模的初步研究中，已示出在來自BM-陽性和BM-陰性患者的原發腫瘤之間顯示出不同的圖譜(Wdfle等，2003)。BM識別標識主要通過轉錄抑制表現出來，且與淋巴轉移相關的表達識別標識不同。因此BM微轉移是具有原發腫瘤特異性分子識別標識的選擇性過程(W6]fle等，2003)。最近描述了肺癌中早期腫瘤播散的基因表達識別標識，其中定義了在初級手術(primary surgery)時將在BM中具有DTC的患者與不具有這樣的細胞的患者區分開的五個基因組區域(Wrage等，2009)。
技術實現思路
根據現有技術的現狀，本專利技術人解決了提供作為腫瘤轉移發展中的關鍵步驟的血源性播散和骨髓中的歸巢/存活的風險的新標志物(marker)的問題。本專利技術人進一步解決了提供用于評估轉移風險的一組標志物的問題。識別出的標志物還可用作癌癥治療途徑中的靶點。本專利技術提供了一種確定患者發生腫瘤轉移的風險的方法，尤其提供了一種確定腫瘤細胞播散的風險的方法，其中確定從患者獲得的腫瘤樣品中RAI2(視黃酸誘導的基因2)的表達。本專利技術人發現RAI2(之前根本難以分析的基因)的低表達指示了轉移的高風險，尤其指示早期腫瘤細胞的轉移結果(諸如腫瘤細胞的播散)(附圖說明圖1)。在DTC-陽性的患者中(即在具有轉移發展高風險的患者中)，與例如正常的肺和永生化的正常上皮乳腺癌細胞系和肺癌細胞系相比，如通過定量RT-PCR確定的，顯示出RAI2的表達在腫瘤組織中非常低(圖3、4、15，表B)。本專利技術人已發現僅對RAI2表達(作為與其它基因表達無關的因素)的分析可進行重要的預測。雖然轉移的形成毫無疑問地對患者的存活，相對的與癌癥相關的死亡是決定性的，但通過評估轉移的風險，尤其通過評估原發性播散和骨髓中的歸巢/存活的風險，本專利技術能檢測腫瘤轉移發展中的關鍵步驟，這樣能比檢測僅與患者的總體存活或復發相關的因素進行早得多的干預。如果患者樣品中的RAI2的表達低于標準細胞系(例如市場上購買的永生化的正常人上皮乳腺細胞系和肺細胞系MCFlOA和BEAS2B)中的表達，或低于源自與患者相同物種的健康受試者的一般組織樣品中的表達，則評定該患者樣品中的RAI2的表達為“低”。為了對比，可使用普遍人類參照(UHR)作為參照。可通過使用Λ ACt方法，與相同樣品中的參照基因RPLPO (60S酸性核糖體蛋白PO)的表達對比進行標準化來進行RT-PCR數據的評定。(可如 Molloy 等(Breast Cancer Res Treat. 2008Nov ；112(2) :297-307)講授的方法進行數據評定方法)。來自患者的樣品中RAI2的表達越低，則轉移的風險越高。在覆蓋整個基因組的基因表達譜的本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】2010.04.20 EP 10004180.51.一種確定患者發生腫瘤轉移和/或與腫瘤相關的死亡的風險的方法，包括確定從所述患者獲得的腫瘤樣品中RAI2(視黃酸誘導的基因2)的表達。2.根據權利要求1所述的方法，其中獲得所述樣品的腫瘤是原發腫瘤。3.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述腫瘤選自包括乳腺癌和結直腸癌的組。4.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中基于蛋白或RNA水平確定RAI2的表達。5.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中通過RT-PCR、基因芯片分析、雜交、ELISA、蛋白質印跡、斑點印跡、免疫熒光方法或FACS確定RAI2的表達。6.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中RAI2的低表達指示轉移的高風險。7.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中確定所述樣品中RAI2的表達和IRX2的表達。8.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中額外地確定所述樣品中選自包括APM2、AQPl、CDOl、CYP2B7P1、PLAC9、PPP1R14A、RGS16、SCGB3A1、SERP2、FBXOl5, HSD17B1、INHBB, IRX2、MAOB, RBP7、RERG, RLN2、ST3GAL1、ABCC8、A⑶1、ANXA3、ASB13、CD44、C0X7A1、FHL2、HSDl 1B2...

【專利技術屬性】
技術研發人員：哈里耶特·維克曼，克勞斯·潘特爾，斯特凡·沃納，
申請(專利權)人：漢堡艾本德大學醫學中心，
類型：
國別省市：