氯霉素化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒制造技術(shù)

本實(shí)用新型專利技術(shù)公開(kāi)了一種氯霉素化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，包括盒體和包被有抗原的酶標(biāo)板，盒體內(nèi)設(shè)置存放不同溶液的試劑瓶，試劑瓶分別為酶標(biāo)氯霉素抗體工作液試劑瓶、氯霉素系列標(biāo)準(zhǔn)溶液試劑瓶、濃縮磷酸鹽緩沖溶液試劑瓶、濃縮洗滌液試劑瓶和發(fā)光液試劑瓶。本實(shí)用新型專利技術(shù)操作簡(jiǎn)便，用時(shí)短，無(wú)需長(zhǎng)時(shí)間顯色及終止，且靈敏度高，特異性好，能快速、簡(jiǎn)便、靈敏地用于水產(chǎn)品中氯霉素的檢測(cè)。該試劑盒可檢出的最低檢測(cè)限為0.0125ng/mL，可一次性進(jìn)行多個(gè)樣本的測(cè)定，減少檢測(cè)樣本所需要的時(shí)間。本實(shí)用新型專利技術(shù)具有節(jié)約成本、操作簡(jiǎn)便快速、可在非實(shí)驗(yàn)室條件下進(jìn)行、便于攜帶和運(yùn)輸?shù)奶攸c(diǎn)。（*該技術(shù)在2022年保護(hù)過(guò)期，可自由使用*）

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

氯霉素化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒
本技術(shù)涉及氯霉素的檢測(cè)裝置，具體地指一種氯霉素化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測(cè) 試劑盒。
技術(shù)介紹
氯霉素(Chloramphenicol, CAP)最初是由委內(nèi)瑞拉鏈絲菌的培養(yǎng)基中提取制得, 是一類廣譜抗生素。氯霉素曾在我國(guó)畜牧業(yè)中廣泛應(yīng)用，對(duì)畜禽的疾病控制和治療起到了 重要作用。氯霉素存在著嚴(yán)重的毒副作用，能引起人的再生障礙性貧血，粒狀白細(xì)胞缺乏 癥，新生兒、早產(chǎn)兒灰色綜合癥等，低濃度藥物殘留還會(huì)誘發(fā)致病菌的耐藥性，對(duì)人類的健 康構(gòu)成巨大的潛在威脅。在美國(guó)僅允許氯霉素應(yīng)用于非食用性動(dòng)物，規(guī)定在任何動(dòng)物性食 品中不得檢出氯霉素。歐共體禁止氯霉素應(yīng)用于產(chǎn)奶牛和產(chǎn)蛋雞，在其他動(dòng)物性食品中的 含量也做了限制，規(guī)定最高殘留量為100ng/kg。中國(guó)農(nóng)業(yè)部已將氯霉素從2002年版《中國(guó) 獸藥典》中刪除列為禁藥，近年已規(guī)定在動(dòng)物性食品中不得檢出。作為全國(guó)淡水漁業(yè)第一省的湖北水產(chǎn)業(yè)，續(xù)十三年淡水產(chǎn)品總量保持全國(guó)第一。 我省現(xiàn)有水產(chǎn)加工企業(yè)180家，其中加工出口企業(yè)19家。作為國(guó)家明令禁止使用的獸藥， 在水產(chǎn)品等動(dòng)物源性食品中，氯霉素殘留一直被列為重點(diǎn)必檢項(xiàng)目之一。目前，應(yīng)用廣泛的CAP檢測(cè)技術(shù)有液相色譜法(LC)、質(zhì)譜法(MS)、高效液相色譜法 (HPLC)、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)等。LC等大型儀器分析方法對(duì)設(shè)備和操作者有較高要求， 樣品處理方法復(fù)雜，檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)。但是現(xiàn)有檢測(cè)方法所用的設(shè)備操作復(fù)雜、檢測(cè)費(fèi)用較高， 無(wú)法在非實(shí)驗(yàn)室環(huán)境下進(jìn)行，不適合現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)和大量樣本篩選，使推廣使用受到限制。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本技術(shù)的目的就是要克服現(xiàn)有技術(shù)所存在的不足，提供一種小巧輕便、可現(xiàn) 場(chǎng)檢測(cè)的氯霉素化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，其操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)快速、準(zhǔn)確、靈敏度高，成 本低。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本技術(shù)所設(shè)計(jì)的氯霉素化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，包 括盒體和包被有抗原的酶標(biāo)板，所述盒體內(nèi)設(shè)置存放不同溶液的試劑瓶，所述試劑瓶分別 為酶標(biāo)氯霉素抗體工作液試劑瓶、氯霉素系列標(biāo)準(zhǔn)溶液試劑瓶、濃縮磷酸鹽緩沖溶液試劑 瓶、濃縮洗滌液試劑瓶和發(fā)光液試劑瓶。優(yōu)選地，所述酶標(biāo)氯霉素抗體工作液試劑瓶為綠色瓶帽的白色塑料瓶，所述氯霉 素系列標(biāo)準(zhǔn)溶液試劑瓶為白色瓶帽的棕色玻璃瓶，所述濃縮磷酸鹽緩沖溶液試劑瓶為藍(lán)色 瓶帽的半透明塑料瓶，所述濃縮洗滌液試劑瓶為透明瓶帽的半透明塑料瓶，所述發(fā)光液試 劑瓶為紅色瓶帽的黑色塑料瓶。這樣，所需試劑用不同顏色的試劑瓶封裝在盒體內(nèi)，易于快 速區(qū)分。上述方案中，所述酶標(biāo)板為設(shè)置有48或96個(gè)反應(yīng)孔的可拆卸微孔板。本技術(shù)中所述酶標(biāo)氯霉素抗體是由辣根過(guò)氧化物酶和氯霉素抗體通過(guò)過(guò)碘酸鈉法偶聯(lián)制成。本技術(shù)中所述抗原是由氯霉素和載體蛋白通過(guò)碳二亞胺法偶聯(lián)制成的完全抗原。本技術(shù)中所述包被有抗原的酶標(biāo)板是將抗原用稀釋液稀釋后，在微孔板中每孔加入50 300 μ L置于4°C包被,次日將抗原的微孔板取出洗漆后每孔加50 300 μ L封閉液，置于25 40°C水浴封閉O. 5^2小時(shí)后再洗滌，拍干，用真空密封在4°C下保存即得。本技術(shù)中濃縮磷酸鹽緩沖溶液每升含NaCl 80g、KH2PO4 2. 0g、 Na2HPO4 ·12Η20 29. 0g、KCl 2. Og的水溶液，使用時(shí)用蒸餾水稀釋10倍作為抗原和酶標(biāo)抗體的稀釋液。本技術(shù)中濃縮洗滌液在上述濃縮磷酸鹽緩沖液中加入體積比為O. 05%的吐溫-20，使用時(shí)用蒸餾水稀釋10倍后作為洗滌液。本技術(shù)中發(fā)光液含有用O. lmol/L pH=8. 5三羥甲基氨基甲烷-HCl緩沖液配制的2mmol/L魯米諾、O. 25mmol/L的對(duì)輕基苯丙烯酸和20mmol/L的過(guò)硼酸鈉。本技術(shù)的有益效果在于本技術(shù)將具有高度靈敏度的化學(xué)發(fā)光測(cè)定技術(shù)與高特異性的免疫反應(yīng)相結(jié)合，操作簡(jiǎn)便，用時(shí)短，無(wú)需長(zhǎng)時(shí)間顯色及終止，且靈敏度高，特異性好，能快速、簡(jiǎn)便、靈敏地用于水產(chǎn)品中氯霉素的檢測(cè)。該試劑盒可檢出的最低檢測(cè)限為O. 0125ng/mL，可一次性進(jìn)行多個(gè)樣本的測(cè)定，減少檢測(cè)樣本所需要的時(shí)間。本技術(shù)具有節(jié)約成本、操作簡(jiǎn)便快速、可在非實(shí)驗(yàn)室條件下進(jìn)行、便于攜帶和運(yùn)輸?shù)奶攸c(diǎn)。附圖說(shuō)明圖1為氯霉素化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒的盒體結(jié)構(gòu)示意圖。圖2為氯霉素化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒的酶標(biāo)板結(jié)構(gòu)示意圖。具體實(shí)施方式以下結(jié)合 附圖和具體實(shí)施例對(duì)本技術(shù)作進(jìn)一步的詳細(xì)描述。圖1、2所示氯霉素化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，包括盒體I和包被有抗原的酶標(biāo)板2。盒體I內(nèi)設(shè)置存放不同溶液的試劑瓶，試劑瓶分別為酶標(biāo)氯霉素抗體工作液試劑瓶3、氯霉素系列標(biāo)準(zhǔn)溶液試劑瓶4一 11、濃縮磷酸鹽緩沖溶液試劑瓶12、濃縮洗滌液試劑瓶13和發(fā)光液試劑瓶14。酶標(biāo)氯霉素抗體工作液試劑瓶3為綠色瓶帽的白色塑料瓶，氯霉素系列標(biāo)準(zhǔn)溶液試劑瓶4一 11為白色瓶帽的棕色玻璃瓶，濃縮磷酸鹽緩沖溶液試劑瓶12 為藍(lán)色瓶帽的半透明塑料瓶，濃縮洗滌液試劑瓶13為透明瓶帽的半透明塑料瓶，發(fā)光液試劑瓶14為紅色瓶帽的黑色塑料瓶。如圖2所示酶標(biāo)板2為設(shè)置有96個(gè)反應(yīng)孔的可拆卸微孔板。濃縮磷酸鹽緩沖溶液每升含NaCl 80g、KH2PO4 2. 0g、Na2HPO4 · 12H20 29. 0g、KCl 2. Og的水溶液，使用時(shí)用蒸餾水稀釋10倍作為抗原和酶標(biāo)抗體的稀釋液。濃縮洗滌液在上述濃縮磷酸鹽緩沖液中加入體積比為O. 05%的吐溫-20，使用時(shí)用蒸餾水稀釋10倍后作為洗滌液。發(fā)光液含有用O. lmol/L pH=8. 5三羥甲基氨基甲烷-HCl緩沖液配制的2mmol/ L魯米諾、0. 25mmol/L的對(duì)輕基苯丙烯酸和20mmol/L的過(guò)硼酸鈉。氯霉素系列標(biāo)準(zhǔn)溶液試劑瓶4一 11中的氯霉素濃度分別為0ng/ml、0. 0125ng/ml、 0. 025ng/ml、0. 05ng/ml、0. 15ng/ml、0. 45ng/ml>1. 35ng/ml、4. 05ng/mlo1、試劑盒中抗原的制備稱取牛血清白蛋白(BSA)以超純水溶解，配制成濃度為5 30mg/mL的BSA溶液。稱取氯霉素(CAP)以超純水溶解，配制成濃度為f5mg/mL的CAP溶液。稱取1_(3_ 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)，加超純水溶解，配制成濃度為f 5mg/mL的EDC溶液。 向EDC溶液中加入O. 1-0. 5mL CAP溶液，混合2min，再將已活化的CAP溶液加入到O. 5mL BSA溶液中，上下混合均勻后，室溫避光混合2h，收集偶聯(lián)產(chǎn)物轉(zhuǎn)移至30kDa超濾管，于冷凍離心機(jī)4°C下3000rpm離心5min,加等體積甘油混勻，-20°C凍存。2、試劑盒中酶標(biāo)抗體的制備稱取辣根過(guò)氧化物酶(HRP)溶解于超純水中，配制成濃度為f 10mg/mL的HRP溶液，4°C靜置過(guò)夜，使之充分溶解；次日取上述HRP溶液0. 5mL并向其中加入0. 025 1mL新配的0. 0f lmol/L NaIO4水溶液，混勻后放置冰箱避光攪拌5 20分鐘后取出。取出反應(yīng)液裝入透析袋中，4°C對(duì)pH=4. O的醋酸溶液透析過(guò)夜。次日將透析后的混合物取出，調(diào)節(jié)混合物pH值，使其接近9.6 ;立即將0.5 5mg本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種氯霉素化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，包括盒體（1）和包被有抗原的酶標(biāo)板（2），其特征在于：所述盒體（1）內(nèi)設(shè)置存放不同溶液的試劑瓶，所述試劑瓶分別為酶標(biāo)氯霉素抗體工作液試劑瓶（3）、氯霉素系列標(biāo)準(zhǔn)溶液試劑瓶（4—11）、濃縮磷酸鹽緩沖溶液試劑瓶（12）、濃縮洗滌液試劑瓶（13）和發(fā)光液試劑瓶（14）。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種氯霉素化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，包括盒體(I)和包被有抗原的酶標(biāo)板(2)，其特征在于所述盒體(I)內(nèi)設(shè)置存放不同溶液的試劑瓶，所述試劑瓶分別為酶標(biāo)氯霉素抗體工作液試劑瓶(3)、氯霉素系列標(biāo)準(zhǔn)溶液試劑瓶(4 一 11)、濃縮磷酸鹽緩沖溶液試劑瓶(12)、濃縮洗滌液試劑瓶(13)和發(fā)光液試劑瓶(14)。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述氯霉素化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于所述酶標(biāo)氯霉素抗體...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：陳建軍，金偉，余浩，李娟娟，馮漢利，曾憲東，楊海，王振華，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：湖北出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心，武漢百仕康生物科技有限公司，
類型：實(shí)用新型
國(guó)別省市：