一類(lèi)茚并異喹啉類(lèi)雌激素受體α調(diào)節(jié)劑的抗乳腺癌用途制造技術(shù)

本發(fā)明專(zhuān)利技術(shù)涉及式(I)的雌激素受體調(diào)節(jié)劑或其藥學(xué)上可接受的鹽。此類(lèi)化合物可以與雌激素受體α結(jié)合，有效地產(chǎn)生抗乳腺癌等作用，并同時(shí)在子宮等部位產(chǎn)生調(diào)節(jié)作用。此類(lèi)化合物具有很強(qiáng)的體外結(jié)合雌激素受體α的作用，可以有效的拮抗雌激素與雌激素受體α的結(jié)合，從而治療雌激素過(guò)多引起的乳腺癌，并同時(shí)在子宮等部位產(chǎn)生調(diào)節(jié)作用。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本專(zhuān)利技術(shù)涉及一類(lèi)茚并異喹啉類(lèi)的雌激素受體a調(diào)節(jié)劑及其抗乳腺癌作用，并同時(shí)在子宮等部位產(chǎn)生調(diào)節(jié)作用。
技術(shù)介紹
近年來(lái)，乳腺癌已在女性中成為排名第一的常見(jiàn)惡性腫瘤，抗乳腺癌藥物研究具有重要的學(xué)術(shù)和現(xiàn)實(shí)意義。研究發(fā)現(xiàn),乳腺癌的發(fā)生發(fā)展與雌激素受體(estrogen receptor,ER)有關(guān)。ER是一種核受體，包括ERa和ERP兩種亞型。ERa和ERP的氨基酸序列在DNA結(jié)合域(DNAbinding domain,DBD)和配體結(jié)合域(ligand binding domain, LBD)的同源性分別為 96%和53%。在經(jīng)典的雌二醇作用的靶組織如子宮、乳腺等部位有大量ERa分布，非經(jīng)典的雌二醇作用的靶組織如前列腺、睪丸、卵巢等部位中ERa低表達(dá)或不表達(dá)，而ERP高表達(dá)。此夕卜，ERa和ERP的轉(zhuǎn)錄活性及其與協(xié)同因子的相互作用也往往不同。ERa與雌激素結(jié)合后通過(guò)結(jié)合祀基因上的雌激素應(yīng)答元件(estrogen responseelement, ERE)調(diào)節(jié)基因表達(dá)或與其他核蛋白相互作用以改變基因的轉(zhuǎn)錄活性。許多證據(jù)表明ERa是一個(gè)很有吸引力的抗乳腺癌治療靶標(biāo)。雌激素長(zhǎng)期過(guò)度刺激、ER a表達(dá)水平增高或轉(zhuǎn)錄激活活性增強(qiáng)是導(dǎo)致乳腺 癌的一個(gè)重要因素。首先乳腺癌中存在的ER主要是ERa，當(dāng)正常乳腺組織變成致瘤物時(shí)，ER a的水平增加而ERP水平降低。第二，乳腺癌作為一種激素依賴(lài)性腫瘤，其生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移受雌激素調(diào)節(jié)，而雌激素可通過(guò)其受體活化轉(zhuǎn)錄上調(diào)促細(xì)胞生長(zhǎng)基因的表達(dá)。ERa的調(diào)節(jié)劑能調(diào)節(jié)雌激素作用的機(jī)制是與雌激素競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合受體上的LBD，與ER a結(jié)合形成二聚體復(fù)合物，改變ER a的構(gòu)象，從而阻斷共激活因子與ERa的AF2區(qū)相互作用，阻斷雌激素結(jié)合的ERa在乳腺癌細(xì)胞中的生長(zhǎng)促進(jìn)作用。目前很多公司、科研機(jī)構(gòu)都開(kāi)展了針對(duì)ERa調(diào)節(jié)劑的研究，對(duì)ER的分子生物學(xué)功能的研究文獻(xiàn)日益增多，相關(guān)專(zhuān)利也不斷出現(xiàn)。他莫昔芬(Tamoxifen)是首個(gè)癌癥祀向治療藥物，用于治療乳腺癌，1977年作為選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑獲得FDA的批準(zhǔn)用于絕經(jīng)后晚期乳腺癌的治療。但是它對(duì)子宮細(xì)胞有刺激作用，長(zhǎng)期使用易導(dǎo)致子宮內(nèi)膜增生或子宮內(nèi)膜癌，另外還能導(dǎo)致血管舒張、靜脈血栓等副作用。1997年禮來(lái)公司的雷洛昔芬獲得FDA批準(zhǔn)用于治療骨質(zhì)疏松，2007年FDA批準(zhǔn)了其新適應(yīng)證，用于降低絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松女性患者的乳腺癌風(fēng)險(xiǎn)。但雷洛昔芬被警告可增加卒中相關(guān)死亡風(fēng)險(xiǎn)。雷洛昔芬是第二代選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑，可以預(yù)防乳腺癌而不增加患子宮內(nèi)膜癌風(fēng)險(xiǎn)。托瑞米芬是他莫昔芬的結(jié)構(gòu)類(lèi)似物，目前已經(jīng)在美國(guó)等國(guó)家被批準(zhǔn)用于治療浸潤(rùn)性乳腺癌，較他莫昔芬有更小的潛在具遺傳毒性作用，引起繼發(fā)性子宮內(nèi)膜癌的風(fēng)險(xiǎn)要小于他莫昔芬。由于雌激素替代療法治療更年期綜合征、骨質(zhì)疏松、老年癡呆癥和心血管系統(tǒng)等疾病時(shí)能夠顯著降低絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松性骨折和冠心病的發(fā)生率，但是可能誘發(fā)乳腺癌和子宮內(nèi)膜癌；為克服雌激素致癌變的不良反應(yīng)采取雌、孕激素聯(lián)合使用的性激素替代療法仍可能增加乳腺癌的發(fā)生率，還能導(dǎo)致的子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生，這些不良反應(yīng)促使人們尋找一種對(duì)子宮和乳腺表現(xiàn)出抗雌激素作用而對(duì)骨髂和心血管系統(tǒng)具有雌激素樣作用的藥物。因此研究抗乳腺癌作用的ER a調(diào)節(jié)劑是研究選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑的重要基礎(chǔ)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專(zhuān)利技術(shù)的目的在于開(kāi)發(fā)一類(lèi)雌激素受體a調(diào)節(jié)劑在乳腺癌治療中的應(yīng)用。本專(zhuān)利技術(shù)篩選的化合物為一批定向合成的可結(jié)合ER a靶點(diǎn)的化合物，利用熒光偏振方法建立的高通量篩選模型對(duì)該批化合物進(jìn)行體外篩選，通過(guò)功能性驗(yàn)證尋找先導(dǎo)化合物和候選藥物，同時(shí)對(duì)篩選所得活性化合物進(jìn)行初步藥效學(xué)和機(jī)制研究，找到一類(lèi)茚并異喹啉類(lèi)結(jié)構(gòu)的ER a調(diào)節(jié)劑，為抗乳腺癌治療提供候選藥物，并同時(shí)在子宮等部位產(chǎn)生調(diào)節(jié)作用。該類(lèi)化合物由中國(guó)藥科大學(xué)藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室合成，其中待測(cè)化合物001672和001626合成方法可從專(zhuān)利向華，王天麟，肖紅，尤啟冬，姚瑤，李驍博，廖清江.茚并異喹啉酮衍生物、其制備方法及其醫(yī)藥用途 ZL 20091 0233991. 7 和 Hua Xiang, Tianlin Wang, Hong Xiao,Qidong You, Yao Yao, Xiaobo Li, QingjiangLiao.1ndenoisoquinolinone derivatives,manufacturing method and medical use thereof. W02011047515A1.中獲得。本專(zhuān)利技術(shù)的技術(shù)方案為建立ERa受體靶向調(diào)節(jié)劑篩選模型，初篩，復(fù)篩，構(gòu)效關(guān)系分析，得到一類(lèi)具有抗乳腺癌作用的候選藥物。具體步驟如下步驟一建立ER a調(diào)節(jié)劑高通量篩選模型。 步驟二 通過(guò)陽(yáng)性藥驗(yàn)證模型。步驟三使用ERa調(diào)節(jié)劑高通量篩選模型對(duì)待測(cè)化合物進(jìn)行初篩、復(fù)篩，繪制待測(cè)化合物拮抗雌二醇與ERa結(jié)合曲線(xiàn)并測(cè)定IC5tl值。本專(zhuān)利技術(shù)提供上述化合物或其藥學(xué)上可接受鹽及其藥用組合物的醫(yī)療用途，尤其是在預(yù)防、延緩或治療ERa參與介導(dǎo)的疾病，特別是抗乳腺癌藥物中的用途。以上提及的定向合成的化合物在乳腺癌治療中的作用屬于本專(zhuān)利技術(shù)的保護(hù)范圍。附圖說(shuō)明圖1:陽(yáng)性藥4-0^3111( 1€611拮抗雌二醇與￡1^結(jié)合的抑制曲線(xiàn)圖。圖2 :待測(cè)化合物001672拮抗雌二醇與ERa結(jié)合的抑制曲線(xiàn)圖。圖3 :待測(cè)化合物001626拮抗雌二醇與ERa結(jié)合的抑制曲線(xiàn)圖。圖4 :待測(cè)化合物000394拮抗雌二醇與ERa結(jié)合的抑制曲線(xiàn)圖。圖5 :待測(cè)化合物000356拮抗雌二醇與ERa結(jié)合的抑制曲線(xiàn)圖。具體實(shí)施例方式以下結(jié)合附圖說(shuō)明本專(zhuān)利技術(shù)的具體實(shí)施例方式1.待測(cè)化合物拮抗雌二醇與ERa結(jié)合活性測(cè)試I)實(shí)驗(yàn)材料Estrogen Receptor-alpha(ER a ) Human Recombinant(Invitrogen，USA)、FluormoneTMES2 (Invitrogen, USA)、ES2Screening Buffer (Invitrogen, USA)、Estradiol為本室保存標(biāo)準(zhǔn)品，國(guó)產(chǎn)分析純、Tamoxifen為中國(guó)藥科大學(xué)藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供的標(biāo)準(zhǔn)品、384 孔黑色微孔板(Corning, USA)、槍頭(Axygen, USA)。2)實(shí)驗(yàn)步驟 待測(cè)化合物每種精確稱(chēng)量，加入DMSO溶劑成母液，然后使用ES2SCreeningBuffer配制待測(cè)化合物溶液至所需濃度，初篩濃度約為lX10_3mol/L。 溶液配制 2X Fluormone ES2/ER a Complex :使用 ES2Screening Buffer 配制2XFluormone 混合液使最終 FluormoneTM ES2 濃度為 9nM，ER a 濃度為 30nM。 進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合實(shí)驗(yàn)先在384孔黑色微孔板每孔加入50 U I化合物，再每孔加A 50ul 2XFluormone ES2與ER a混合溶液。同時(shí)加入50 U I雌二醇溶液(InM), 50 U I2X Fluornone ES2與ER a混合溶液作為100%競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合對(duì)照、加入50 Buffer, 50 u I2X Fluormone ES2與ERa混合溶液作為0%競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合對(duì)照以及加入100 Buffe本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
下式化合物或其藥學(xué)上可以接受的鹽：其中：R1、R2各自獨(dú)立的表示H、?OH、C1?C4烷氧基或C1?C6烷氧羰基；R3、R4各自獨(dú)立的表示CO(CH2)2CH3、CO(CH2)3CH3或C1?C6烷基；或R3和R4及與其相連的氮原子結(jié)合成哌啶基、2?甲基哌啶基、高哌啶基、嗎啉基、吡咯烷基、3?甲基吡咯烷基、3，3?二甲基吡咯烷基、3，4?二甲基吡咯烷基、哌嗪基、N?甲基哌嗪基、N?乙基哌嗪基、N?苯基哌嗪基或N?芐基哌嗪基；X表示O、S、NH、CH2或?CO?；m＝0或1；n＝2或3。FSA00000823941200011.tif

【技術(shù)特征摘要】
1.下式化合物或其藥學(xué)上可以接受的鹽2.權(quán)利要求1要求保護(hù)的式(I)的化合物或其藥學(xué)上可以接受的鹽用于制備雌激素受體α調(diào)節(jié)劑的用途...

【專(zhuān)利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：嚴(yán)明，向華，張陸勇，苗靖姍，唐智超，
申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人：中國(guó)藥科大學(xué)，
類(lèi)型：發(fā)明
國(guó)別省市：