新多肽的制備及在治療中的應用制造技術

本發明專利技術公開了一種具有組織保護活性的新的多肽。本發明專利技術公開了多肽的序列，結構以及制備生產辦法。本發明專利技術多肽具有良好的組織，器官保護作用。尤其對多種組織的炎癥，具有良好的治愈作用。本發明專利技術多肽無毒、安全，具有廣泛的藥用，醫療使用前景。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于醫藥生物
，本專利技術多肽作為組織保護性多肽，能夠保護機體幾乎所有的器官和組織，尤其對于多種組織炎癥，具有良好的保護，治療和治愈作用。本專利技術涉及多肽固相化學合成、多肽大規模純化及凍干、理化性質測定、治療應用等技術。
技術介紹
炎癥是機體對各種物理、化學、生物等有害刺激所產生的一種以防御為主的病理反應。機體組織受損傷時所發生的一系列保護性應答，以局部血管為中心，典型特征是紅、腫、熱、痛和功能障礙，可參與清除異物和修補組織等。炎癥是十分常見而又重要的基本病理過程，體表的外傷感染和各器官的大部分常見病和多發病(如癤、癰、肺炎、肝炎、腎炎等)都屬于炎癥性疾病。在炎癥過程中，一方面損傷因子直接或間接造成組織和細胞的破壞，另一方面通過炎癥充血和滲出反應，以稀釋、殺傷和包圍損傷因子。同時通過實質和間質細胞的再生使受損的組織得以修復和愈合。因此可以說炎癥是損傷和抗損傷的統一過程。以血管系統改變為中心的一系列局部反應，有利于清除消滅致病因子，液體的滲出可稀釋毒素，吞噬搬運壞死組織以利于再生和修復，使致病因子局限在炎癥部位而不致蔓延全身。因此，炎癥是機體的防御性反應，通常對機體是有利的，如果沒有炎癥反應，人們將不能長期生存于這個充滿致炎因子的自然環境中。但是炎癥對機體也有潛在的很大危害性，嚴重的過敏反應可危及病人的生命。目前用于治療炎癥的抗炎藥如免疫抑制劑、非甾類抗炎藥、環氧合酶(C0X-2)抑制劑和蛋白酶抑制劑。但這些抗炎藥中許多具有副作用和毒性。因此需要新的治療方法和抗炎藥物，同時不會導致不良副反應的產生。
技術實現思路
本專利技術涉及了一種新的具有組織保護活性的多肽。該多肽含有8-15個氨基酸殘基、分子量為900-1600道爾頓并且具有多種組織保護活性。本專利技術公布了其序列、化學合成方法及其在治療中的應用。同時公布了采用本專利技術多肽與一種或多種藥物載體組合制備各種藥物機型的方法以及本專利技術多肽對于各種組織炎癥具有良好的保護，治療和治愈作用。雖然具體的作用機理還不明確，本專利技術多肽以多種方式給予很低劑量(通常為毫克或納克/公斤體重)時即對幾乎所有的器官和組織顯示出保護作用。多項動物實驗表明，本專利技術的多肽可以削弱由化學誘導引起的肝、肺、結腸和胃等組織的損傷，抑制炎性反應，減少消化道潰瘍，減少肝臟和膽道的損傷，還具有抗焦慮和抗抑郁作用。可以促進血管生成、促進創傷愈合等，可以逆轉由神經毒素MPTP誘導的帕金森癥模型中的異常。另外，對于胃粘膜具有顯著的保護作用，還可以緩解炎癥反應。本專利技術公布的多肽序列具有以下結構通式Xaa Zaa Pro Pro Pro Xaa Yaa Pro Ala Asp Zaa Ala Xaa Xaa Xaa或者[Zaa Pro Pro Pro Xaa Yaa Pro Ala]其中Xaa是中性脂肪族氨基酸殘基，特別是Ala、bAla、Leu、lie、Gly、Val.Nle或Nva,Yaa是堿性氨基酸殘基，特別是Lys、Arg、Orn或His，Zaa是酸性氨基酸殘基，特別是Glu、Asp、Aad或Apm。本專利技術多肽的氨基酸序列的具體組合記錄于序列表中。本專利技術的多肽合成后，可以做成游離態形式，也可以做成陽離子鹽，如TFA鹽(三氟乙酸鹽)，HCl鹽(鹽酸鹽)，醋酸鹽形式。本專利技術的多肽，可以選擇和一種或多種藥物載體組合，制成多種藥物劑型，用于治療。這些藥物劑型涵蓋注射溶液、片劑、霜劑、膠囊、軟膏、洗劑、舌含片等劑型局部或全身給藥。劑量優選在10-5 10-2mg/kg體重的范圍內，以0. 1% -0. 5%的較高濃度全身或局部給藥。對于具體治療的最佳劑量的確定是本領域技術人員熟知的。具體實施方法下面結合具體的實施方法對本發多肽的合成、純化及理化性能及在炎癥中的治療做進一步的闡述。實施例1 :多肽的化學合成及純化以SEQ ID No所示的氨基酸序列為例化學合成多肽。采用Fmoc固相法合成采用固相合成儀器，選用0. 5克的val-2氯三苯甲基樹脂為起始樹脂，合成反應管中依次加入Fmoc-arg(pbf)-OH, Fmoc-Gln(trt)-OH, Fmoc-1ys(boc)-OH, Fmoc-cys(trt)-OH,Fmoc-phe-OH, Fmoc-arg(pbf) -OH, Fmoc-arg(pbf) -OH, Fmoc-arg(pbf) -OH,Fmoc-cys (trt) -OH, Fmoc-asn (trt) -OH, Fmoc-tyr (tbu) -OH, Fmoc-1le-OH試劑瓶中加入DIC/DMF溶液和H0BT/DMF溶液和DMF溶液。啟動合成儀器連接電腦，輸入合成程序，開始合成。合成的后處理把樹脂從合成反應柱中取出，放入一底部有燒結玻璃濾片的玻璃容器中，分別依次用DMF ( 二甲基甲酰胺)，DCM( 二氯甲烷)，MeOH(甲醇)，DCM, Me0H5_10倍的樹脂體積沖洗樹脂。沖洗后的樹脂冷凍干燥。樹脂沖洗完畢，另取一帶玻璃塞的試管，配置20毫升裂解試劑，配置方式如下(1):加17. 5毫升TFA (三氟乙酸)于試管中(TFA有強腐蝕性和揮發性，應在通風廚中操作)(2):加 EDC0. 5 毫升(3):加 thioanisole 1 毫升(4):加 anisole 0.4 毫升以上試劑都加入后，輕微震蕩混勻，加入放入樹脂的玻璃容器中。反應2. 5小時。待反應完畢，用真空抽濾的辦法分離樹脂和裂解試劑。把裂解試劑放入一球形燒瓶中，用旋轉蒸發的辦法減壓蒸去液體物質，只留下固體。另取100毫升的冷乙醚加入球形燒瓶中，此時有大量的白色沉淀物質，為粗多肽。離心分離乙醚和多肽。丟棄上清乙醚，多肽繼續用冷乙醚洗滌，離心，得到多肽粗品。多肽粗品用凍干機凍干，用于下一步純化。合成產物的純化多肽粗品I克，溶于5毫升的純水中，過濾，上制備級高效液相色譜。色譜配40*250mm的C18反相柱。流動相A相O.1 %的TFA+水B 相 O.1 % 的 TFA+ 乙腈。采用程序B在40分鐘內從5%上升到55%，收集主峰，得到溶于流動相的多肽純品O上述溶液狀態的多肽，采用低溫旋轉蒸發方式初步濃縮，然后用凍干機冷凍干燥。得到純品。 純品的質譜附圖說明圖1及HPLC圖2見說明書附圖。實施例2 :穩定性試驗將本專利技術多肽于40°C保溫76天和120天測試其穩定性。穩定性試驗采用HPLC方法進行測定。水溶液中多肽的濃度為O. 2% (w/v):柱，Kromasill00，5u，250x 4. 6mm ;流動相，O.1 %三氟乙酸的水/乙睛溶液(O至50vol. %)，在25分鐘內梯度洗脫，流速lml/min ；檢測UV，218nm。為了進行比較，使用游離的多肽及其單乙酸鹽。表I本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種多肽，其特征是，所述多肽的氨基酸序列選自SEQ?ID?No所示的氨基酸序列的多肽。

【技術特征摘要】
1.一種多肽，其特征是，所述多肽的氨基酸序列選自SEQ ID No所示的氨基酸序列的多肽。2.權利要求1記載的多肽，其特征是，含有8-15個氨基酸殘基、分子量為900-1600道爾頓并且具有多種組織保護活性。所述多肽具有結構通式Xaa Zaa Pro Pro Pro Xaa YaaPro Ala Asp Zaa Ala Xaa XaaXaa或者[Zaa Pro Pro Pro Xaa Yaa Pro Ala], 其中乂8&是中性脂肪族氨基酸殘基，特別是41...

【專利技術屬性】
技術研發人員：不公告發明人，
申請(專利權)人：李萍，
類型：發明
國別省市：