【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及一種從植物中分離化合物單體的方法，具體來(lái)說(shuō)，涉及一種從野菊花中提取蒙花苷單體的分離純化方法，屬于化合物單體的分離純化
技術(shù)介紹
野菊花(Flowerof Indian Dendranthema, Wild chrysanthemum)為菊科多年生草本植物野菊的頭狀花序，外形與菊花相似。產(chǎn)品以色黃無(wú)梗、完整、氣香、花未全開(kāi)者為佳。野菊花可廣泛用于治療疔瘡癰腫、咽喉腫痛、風(fēng)火赤眼、頭痛眩暈等病證。同時(shí)又有很好的降壓作用，可用于高血壓病的輔助治療。蒙花苷是野菊花的特征性化學(xué)成分，也是野菊花中活性最高的黃酮類成分，其英文名為 Buddleoside,化學(xué)名為:7-[[6-0-(6-deoxy-alpha-L_mannopyranosyl)-beta-D-glucopyranosyl]oxy]-5_hydroxy-4’ -methoxyflavone,分子式為 C28H32O14,分子量為592.54,屬于Flavonoids黃酮類,其結(jié)構(gòu)式如下:·
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種蒙花苷單體的分離純化方法，其特征在于包括如下工藝步驟：（1）提取將野菊花藥材粉碎成直徑3mm的粗粉，按照藥材重量:乙醇溶液體積=1Kg:10L計(jì)算，加入體積百分比為95%的乙醇溶液，回流提取3～4次，每次2小時(shí)，過(guò)濾，收集、合并濾液；（2）濃縮將步驟（1）收集、合并的濾液回收乙醇，濃縮至原濾液體積的10%，常溫下靜置析晶10～12小時(shí)，過(guò)濾收集沉淀，除去濾液，將沉淀60℃烘干后進(jìn)行下一步洗滌處理；（3）溶劑洗滌向步驟（2）經(jīng)烘干后的沉淀中加入10倍量體積的甲醇進(jìn)行超聲波洗滌，待產(chǎn)品與甲醇成混懸液后用中速濾紙過(guò)濾，收集過(guò)濾固體，60℃烘干后待下一步處理；（4）溶解、過(guò)濾將步驟（3）經(jīng)烘干后的固體中，按照固體物質(zhì)量:溶劑體積=1g:10mL，加入有機(jī)溶劑溶解，溶解后的溶液用有機(jī)膜過(guò)濾，濾除顆粒雜質(zhì)，收集濾液；（5）高效制備液相色譜分離取步驟（4）所得的濾液進(jìn)樣，用反相高效液相色譜法（RP?HPLC）制備分離蒙花苷單體，紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)，針對(duì)性收集蒙花苷單體的制備餾分溶液，得蒙花苷單體溶液；所述反相高效液相色譜法的色譜條件如下：采用填料為C18的色譜柱；以乙腈?0.3wt%醋酸水溶液V...
【技術(shù)特征摘要】
1.一種蒙花苷單體的分離純化方法，其特征在于包括如下工藝步驟: (1)提取 將野菊花藥材粉碎成直徑3mm的粗粉，按照藥材重量:乙醇溶液體積=IKg:1OL計(jì)算，加入體積百分比為95%的乙醇溶液，回流提取3 4次，每次2小時(shí)，過(guò)濾，收集、合并濾液； (2)濃縮 將步驟(I)收集、合并的濾液回收乙醇，濃縮至原濾液體積的10%，常溫下靜置析晶10 12小時(shí)，過(guò)濾收集沉淀，除去濾液，將沉淀60°C烘干后進(jìn)行下一步洗滌處理； (3)溶劑洗滌 向步驟(2 )經(jīng)烘干后的沉淀中加入IO倍量體積的甲醇進(jìn)行超聲波洗滌，待產(chǎn)品與甲醇成混懸液后用中速濾紙過(guò)濾,收集過(guò)濾固體,60°C烘干后待下一步處理； (4)溶解、過(guò)濾 將步驟(3)經(jīng)烘干后的固體中，按照固體物質(zhì)量:溶劑體積=Ig: 10mL，加入有機(jī)溶劑溶解，溶解后的溶液用有機(jī)膜過(guò)濾，濾除顆粒雜質(zhì)，收集濾液； (5)高效制備液相色譜分離 取步驟(4)所得的濾液進(jìn)樣，用反相高效液相色譜法(RP-HPLC)制備分離蒙花苷單體，紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)，針對(duì)性收集蒙花苷單體的制備餾分溶液，得蒙花苷單體溶液； 所述反相高效液相色譜法的色譜條件如下: 采用填料為C18的色譜柱；以乙腈-0.3wt%醋酸水溶液V/V=30:70為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為 334 nm ； (6)產(chǎn)品回收 將步驟(5)高效制備液相色譜分離得到的蒙花苷單體溶液加熱回收乙腈，蒙花苷單體在剩余醋酸水溶液中析出，放置室溫后用漏斗過(guò)濾析出固體，固體65°C干燥至干，即得到蒙花苷單體產(chǎn)品。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蒙花苷單體的分離純化方法，其特征在于步驟(4)所述有機(jī)溶劑為吡唆、四氫呋喃或DMF。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蒙花苷單體的分離純化方法，其特征在于所述蒙花苷單體進(jìn)行高效制備液相色譜分離前，采用液-質(zhì)聯(lián)用(HPLC-MS)方法或氣-質(zhì)聯(lián)用、核磁共振碳譜、氫譜確定高效液相色譜中蒙花苷單體的峰形。4.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的蒙花苷單體的分離純化方法，其特征在于所述液-質(zhì)聯(lián)用(HPLC-MS)方法采用填料為C18的色譜柱，流動(dòng)相組成及流速與步驟(4)所述反相高效制備液相色譜法相同，柱溫為室溫，檢測(cè)波長(zhǎng)為334nm，紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)，根據(jù)色譜峰峰形和質(zhì)譜檢測(cè)結(jié)果，確定蒙花苷單體在液相色譜中所對(duì)應(yīng)的峰形與位置。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蒙花苷單體的分離純化方法，其特征在于包括如下工藝步驟:(1)、提取 取野菊花藥材1kg，粉碎成直徑3mm的粗粉，加入IOL體積百分比為95%的乙醇溶液，回流提取3次，每次2小時(shí)，過(guò)濾，收集、合并濾液； (2)、濃縮 將步驟(I)收集、合并的濾液回收乙醇，濃縮至3L時(shí)，常溫下靜置析晶12小時(shí)，過(guò)濾收集沉淀，除去濾液，將60°C烘干后的18克沉淀進(jìn)行下一步溶劑洗滌處理；(3)、溶劑洗滌 向步驟(2)所得的沉淀中加入ISOmL甲醇進(jìn)行超聲洗滌，待產(chǎn)品與甲醇成混懸液后用中速濾紙過(guò)濾,收集過(guò)濾固體，60°C烘干后固體為11克,待下一步處理； (4)、溶解、過(guò)濾 將步驟(3)過(guò)濾后所得的固體加IlOmL DMF溶解，溶解后的溶液用0.45 μ m納米有機(jī)膜過(guò)濾，濾液作為下一步制備蒙花苷單體的原料； (5 )、高效制備液相色譜分離 采用填料為C18的色譜柱，柱規(guī)格為50cmX5cm ； 流動(dòng)相組成為:乙腈-0.3%醋酸水溶液，體積比為30:70 ; 流速為60mL/min ； 檢測(cè)波長(zhǎng)為334nm，室溫操作； 取步驟(4)所得的濾液進(jìn)樣，每一針進(jìn)樣量3克，紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)，針對(duì)性收集蒙花苷單體的制備餾分溶液，得蒙花苷單體溶液，重復(fù)此操作，直至制備完成； (6)、產(chǎn)品回收 將步驟(5)高效制備液相色譜分離得到的蒙花苷單體溶液加熱回收乙腈，得到析出產(chǎn)品水溶液1.4L，放置室溫后用漏斗過(guò)濾蒙花苷晶體，過(guò)濾固體于65°C干燥12小時(shí)，得到蒙花苷單體產(chǎn)品6.2克； 整個(gè)生產(chǎn)流程用時(shí)3天； 計(jì)算得產(chǎn)品收率為(6.2/10000) X 100%=0.62% ； 通過(guò)更換流動(dòng)相組分，利用反相分析型液相色譜(RP-HPLC)復(fù)檢產(chǎn)品純度，測(cè)得結(jié)...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：白蘭輝，文煥松，夏柯，郭建華，劉丁，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：成都普思生物科技有限公司，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：
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