莢膜革蘭氏陽性細菌生物綴合物疫苗制造技術

本發明專利技術的一種實施方式涉及新的金黃色葡萄球菌生物綴合物疫苗。更通常地，本發明專利技術涉及革蘭氏陽性和其他生物綴合物疫苗，包含：包含插入的核酸共有序列的蛋白載體；至少一個連接至共有序列的多糖例如莢膜革蘭氏陽性多糖；以及可選地佐劑或藥學上可接受的載體。在進一步的方面，本發明專利技術涉及一種生產革蘭氏陽性和其他生物綴合物疫苗的方法。在另一個方面，本發明專利技術提供了N-糖基化蛋白，其包含一種或多種多糖，例如革蘭氏陽性多糖。本發明專利技術還涉及工程化的原核生物體，其包含編碼第一原核生物體的糖基轉移酶和第二原核生物體的糖基轉移酶的核酸序列。本發明專利技術進一步包括質粒和用質粒轉化的原核細胞，所述質粒編碼多糖或生產N-糖基化蛋白和/或生物綴合物疫苗的酶。進一步地，本發明專利技術涉及在哺乳動物中誘導免疫應答的方法，包含給藥所述生物綴合物疫苗。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】莢膜革蘭氏陽性細菌生物綴合物疫苗相關申請的引用本申請根據35U.S.C.§119(e)要求于2010年5月6日提交的美國臨時專利申請No.61/332,170的優先權，以其全文整體并入本文作為參考。聯邦政府資助研究的聲明本專利技術的一些方面是在國立衛生研究院（NationalinstitutesofHealth）授予的授權號1R01AI088754-2，子授權號105699的政府支持下做出的。政府在本專利技術的這些方面具有某些權利。序列表本申請包含序列表，其通過EFS-Web以ASCII格式下提交，并以其整體并入本文作為參考。所述ASCII的拷貝于2011年5月2日建立，命名為031229US.txt，大小為206,590字節。
技術介紹
疫苗是現代醫學公共衛生領域中最重大的專利技術之一，并且已經拯救了數百萬條生命。免疫已被證明是預防和控制感染的理想途徑。疫苗每年能夠使多達三百萬人免于死亡，并使750,000名兒童免于殘疾。（GlobalAllianceforVaccinesandImmunization-PressReleases（2006年3月11日）網址：www.gavialliance.org/media_centre/press_releases/2006_03_09_en_pr_queenrania_delhi.php）。在1999年，CDC宣布免疫是20世紀最偉大的公共衛生成就（Tengreatpublichealthachievements-UnitedStates，1900-1999.MMWRMorbMortalWklyRep48:241-3（1999年4月2日））。一些細菌，諸如引起破傷風和白喉的細菌，產生在很大程度上引起這些疾病的毒素。該毒素能夠以減毒形式被用作疫苗。然而，對于大多數細菌而言，并沒有能夠用于開發疫苗的單一毒素。最成功的疫苗是諸如流感嗜血桿菌（Haemophilusinfluenzae）、腦膜炎奈瑟菌（Neisseriameningitidis）和肺炎鏈球菌（Streptococcuspneumoniae）的細菌病原體的綴合至載體蛋白的表面多糖。這些細菌被莢膜所包圍，其促進了微生物的致病性和對吞噬細胞殺傷的抗性，并保護其免于干燥。如果細菌多糖偶聯至含有T細胞表位的蛋白載體，其就能夠引起人類的長期免疫應答。這一觀點在80年前就已被闡明（Avery，O.T.和W.F.Goebel.1929.Chemo-immunologicalstudiesonconjugatedcarbohydrate-proteins.IIImmunologicalspecificityofsyntheticsugar-proteins.J.Exp.Med.50:521-533），并且之后被聯至蛋白載體白喉毒素的B型流感嗜血桿菌（HaemophilusinfluenzaetypeB，HIB）的多糖偶所證實（Anderson，P.1983.AntibodyresponsestoHaemophilusinfluenzaetypebanddiphtheriatoxininducedbyconjugatesofoligosaccharidesofthetypebcapsulewiththenontoxicproteinCRM197.InfectImmun39:233-8；Schneerson，R.，O.Barrera，A.Sutton和B.Robbins.1980.Preparation，characterization，andimmunogenicityofHaemophilusinfluenzaetypebpolysaccharide-proteinconjugates.JExpMed152:361-76）。該糖綴合物（glycoconjugate）也是于1987年在美國被許可的第一種綴合物疫苗，并在之后不久就引入美國嬰兒免疫計劃。除了HIB之外，綴合物疫苗也被成功用于對抗莢膜內人病原體腦膜炎奈瑟菌（N.meningitidis）和肺炎鏈球菌（S.pneumoniae）。這些疫苗的常規應用導致了鼻咽部定植和感染的減少。目前大約25%的全球疫苗市場包含綴合物疫苗。革蘭氏陽性細菌具有被莢膜多糖包圍的細胞膜。葡萄球菌（Staphylococcus）就是一類這樣的革蘭氏陽性細菌。金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）引起感染。金黃色葡萄球菌是一種機會性細菌病原體，是引起廣譜的人類疾病的原因。盡管金黃色葡萄球菌可以在正常人的黏膜表面定植，但其也是傷口感染的主要原因，并具有引發嚴重感染的侵襲能力，包括骨髓炎、心內膜炎和菌血癥并伴有代謝性并發癥（Lowy，F.D.1998.Staphylococcusaureusinfections.NewEnglJMed339:520-32）。金黃色葡萄球菌是涉及呼吸機相關性肺炎的最常見媒介之一，并且其也是社區獲得性肺炎的重要的和新興的起因，影響之前身體健康的成人和缺乏預防風險因素的兒童（Kollef，M.H.，A.Shorr，Y.P.Tabak，V.Gupta，L.Z.Liu和R.S.Johannes.2005.Epidemiologyandoutcomesofhealth-care-associatedpneumonia:resultsfromalargeUSdatabaseofculture-positivepneumonia.Chest128:3854-62；Shorr，A.F.2007.Epidemiologyandeconomicimpactofmeticillin-resistantStaphylococcusaureus:reviewandanalysisoftheliterature.Pharmacoeconomics25:751-68）。金黃色葡萄球菌是醫院內菌血癥（nosocomialbecteremia）的第二常見的起因，并且耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（methicillin-resistantS.aureus，MRSA）菌株占據了美國加護病房的所有感染的50%以上。醫院和社區的金黃色葡萄球菌的感染還在增加。MRSA菌株在1974年從2%的葡萄球菌感染一級在2004年從63%的葡萄球菌感染中被分離出來。許多醫院內MRSA菌株是耐多藥的，并且即使甲氧西林敏感性菌株也可以是致死性的。一份最近的報告利用基于種群的活性實例發現，其顯示2005年在美國發生了94,360例侵襲性MRSA感染，并且這些大部分（58%）發生在醫院外（Klevens，R.M.，M.A.Morrison，J.Nadle，S.Petit，K.Gershman，S.Ray，L.H.Harrison，R.Lynfield，G.Dumyati，J.M.Townes，A.S.Craig，E.R.Zell，G.E.Fosheim，L.K.McDougal，R.B.Carey和S.K.Fridkin.2007.Invasivemethicillin-resistantStaphylococcusaureusinfectionsintheUnitedStates.JAMA298:1763-本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】2010.05.06 US 61/332,1701.一種革蘭氏陰性宿主原核生物，其中所述宿主生物是大腸桿菌（E.coli），其包含：（i）編碼至少一種來自革蘭氏陽性細菌的糖基轉移酶的核苷酸序列，其中所述革蘭氏陽性細菌是金黃色葡萄球菌（S.aureus）；（ii）編碼至少一種來自革蘭氏陰性細菌的糖基轉移酶的核苷酸序列，其中所述革蘭氏陰性細菌是銅綠色假單胞菌（P.aeruginosa）；（iii）編碼載體蛋白的核苷酸序列，其中所述載體蛋白包含氨基酸共有序列D/E-X-N-Z-S/T，其中X和Z可以是除脯氨酸之外的任何天然氨基酸；和（iv）編碼寡糖基轉移酶的核苷酸序列。2.根據權利...

【專利技術屬性】
技術研發人員：M·瓦克，邁克爾·科瓦里克，邁克爾·韋特，
申請(專利權)人：格林考瓦因有限公司，
類型：
國別省市：