包含修飾的抗原的生物綴合物及其用途制造技術(shù)

本文提供了大腸桿菌的修飾的抗原，即O抗原O121。本文還提供了修飾的O121抗原的用途，如所述修飾的O121抗原在治療和/或預(yù)防疾病中的用途，例如，治療和/或預(yù)防由腸道沙門氏菌引起的疾病，包括由傷寒沙門氏菌(S.typhi)引起的疾病。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
【國外來華專利技術(shù)】【專利說明】包含修飾的抗原的生物綴合物及其用途 本申請要求于2012年9月10日提交的美國臨時(shí)專利申請?zhí)?1/698,843的優(yōu)先 權(quán)，將其公開內(nèi)容以其整體通過引用結(jié)合于此。 1?引言 本文提供了一種大腸桿菌（Escherichia coli)的修飾的抗原，來自大腸桿菌 (E. coli)血清型0121的0抗原。本文還提供了所述修飾的大腸桿菌0121 0-抗原的用途， 如所述修飾的大腸桿菌0121 0-抗原在治療和/或預(yù)防疾病中的用途，例如，治療和/或預(yù) 防由腸道沙門氏菌（Salmonella enterica)引起的疾病，包括由傷寒沙門氏菌（S.typhi) 引起的疾病。 2.
技術(shù)介紹
傷寒癥仍然是一種嚴(yán)重的公眾健康問題，其每年發(fā)生2200-3300萬病例，包括約 216, 000-500, 000 例死亡。 這種人類全身感染的病原體傷寒沙門氏菌（S.typhi)是通過污染的水和食物經(jīng)口 (feco-orally)傳播的。因此，傷寒癥是衛(wèi)生條件仍然較差的較不發(fā)達(dá)地區(qū)中的地方 性疾病。包括亞洲、非洲和南美洲在內(nèi)的許多國家的學(xué)生和年輕人最經(jīng)常受到影響 。傷寒熱的抗微生物治療通過出現(xiàn)傷寒沙門氏菌 的多藥抗性菌株而日漸變得復(fù)雜。 高危險(xiǎn)人群的疫苗接種被認(rèn)為是用于控制和預(yù)防傷寒癥的最有前景策略。目 前，有兩種被許可的傷寒疫苗：經(jīng)口施用的、全細(xì)胞減毒活疫苗Ty21a和純化的Vi多 糖腸胃外疫苗。Ty21a疫苗具有多種缺點(diǎn)：（i)有助于這種傷寒沙門氏菌菌株的減毒 表型的突變未被充分定義，（ii)減毒菌株理論上可以恢復(fù)為病毒性，和（iii) Ty21a是僅適度免疫原性的并且每5年需要三至四個(gè)初始劑量和加強(qiáng)劑量。 Vi多糖疫苗的有用性受其年齡相關(guān)的免疫原性和針對多糖的免疫應(yīng)答是T細(xì)胞無關(guān) 這一事實(shí)所限制。因此，不能建立免疫記憶并且再接種疫苗不會(huì)引起任何加強(qiáng)應(yīng)答 。由于這些缺陷，所以期望用良好定義的、良好耐受的 且高度免疫原性的疫苗替代當(dāng)前的傷寒疫苗。 多糖疫苗的缺點(diǎn)可以通過將糖綴合至蛋白質(zhì)載體（綴合物疫苗）而克服。在 綴合后，多糖的行為類似于T細(xì)胞依賴性抗原。已證實(shí)，共價(jià)連接至重組綠膿假單胞 菌（Pseudomonas aeruginosa)外毒素A (EPA)的純化的Vi多糖在幼兒中誘發(fā)針對 傷寒沙門氏菌的保護(hù)性免疫應(yīng)答\ D. , Shiloach, J. , Sadoff, J. C. , Bryla, D. A. , Robbins, J. B. !Laboratory and preliminary clinical characterization of Vi capsular polysaccharide-protein conjugate vaccines (Vi莢膜多糖-蛋白質(zhì)綴合物疫苗的實(shí)驗(yàn)室和初步臨床表征）.Infect Immun 62 (10), 4440-4444 (1994) ；Lin, F. Y. , Ho, V. A. , Khiem, H. B. , Trach, D. D. , Bay, P. V. , Thanh, T. C. , Kossaczka, Z. , Bryla, D. A. , Shiloach, J. , Robbins, J. B. , Schneerson, R. , Szu, S. C. :The efficacy of a Salmonella typhi Vi conjugate vaccine in tw〇-t〇-five_year-〇ld children (傷寒沙門氏菌Vi綴合物疫苗在二至五歲兒 童中的效力）.N Engl J Med 344(17)，1263-1269(2001)]。然而，綴合物疫苗的生產(chǎn)是一 個(gè)復(fù)雜的多步驟過程。首先，必須培育產(chǎn)生重組蛋白質(zhì)載體和多糖抗原的分離的細(xì)菌菌株。 多糖和蛋白質(zhì)載體在該兩種組分進(jìn)行化學(xué)偶合之前必須通過不同的程序純化。最后的步驟 涉及用于獲得最終產(chǎn)物的額外純化步驟。該費(fèi)力的生產(chǎn)過程具有以下缺點(diǎn)：（i)需要多個(gè) 純化步驟，其中可能出現(xiàn)相當(dāng)大的損失和（ii)由于化學(xué)偶合的隨機(jī)性，所以產(chǎn)物不是均一 結(jié)構(gòu)而是不同糖綴合物的混合物，具有潛在的不同效力分布曲線。 因此，仍然需要對感染了腸道沙門氏菌，包括傷寒沙門氏菌的受試者進(jìn)行治療和 預(yù)防的改進(jìn)方法。 3?概述 在一個(gè)方面，本文提供了包含載體蛋白和修飾的大腸桿菌0121 0-抗原的生物綴 合物。 在某些實(shí)施方式中，本文提供的生物綴合物的修飾的大腸桿菌0121 0-抗原共價(jià) 結(jié)合至載體蛋白的糖基化位點(diǎn)內(nèi)的天冬酰胺殘基（Asn)，其中所述糖基化位點(diǎn)包含氨基酸 序列Asp/Glu-X-Asn-Z-Ser/Thr，其中X和Z可以是除Pro之外的任何氨基酸。在某些實(shí)施 方式中，本文提供的生物綴合物的載體蛋白不是天然地（例如，在其正常/天然的或"野生 型"狀態(tài)）包含糖基化位點(diǎn)。在某些實(shí)施方式中，本文提供的生物綴合物的載體蛋白被改造 成包含一個(gè)或多個(gè)糖基化位點(diǎn)，例如，所述載體蛋白被改造成包含一個(gè)或多個(gè)糖基化位點(diǎn)， 該糖基化位點(diǎn)包含氨基酸序列Asp/Glu-X-Asn-Z-Ser/Thr，其中X和Z可以是除Pro之外的 任何氨基酸。例如，根據(jù)本文描述的方法使用的載體蛋白可以包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10 個(gè)或更多個(gè)糖基化位點(diǎn)，每一個(gè)糖基化位點(diǎn)具有氨基酸序列Asp/Glu-X-Asn-Z-Ser/Thr，其 中X和Z可以是除Pro之外的任何氨基酸；并且其中一些（例如，1、2、3、4、5、6、7、8或9個(gè)） 或全部糖基化位點(diǎn)已被重組地引入到所述載體蛋白中。 適合用于本文描述的方法（例如，治療和/或預(yù)防傷寒沙門氏菌感染）中的任何 載體蛋白可以在本文描述的生物綴合物的生產(chǎn)中使用。示例性載體蛋白包括，但不限于，銅 綠假單胞菌（P. aeruginosa)的外毒素 A (EPA)、CRM197、白喉類毒素（Diphtheria toxoid)、 破傷風(fēng)類毒素（tetanus toxoid)、金黃色葡萄球菌（S. aureus)的解毒溶血素A、聚集因子 (clumping factor)A、聚集因子B、大腸桿菌FimH、大腸桿菌FimHC、大腸桿菌不耐熱腸毒素 (E.coli heat labile enterotoxin)、大腸桿菌不耐熱腸毒素的解毒變體、霍亂毒素B亞基 (Cholera toxin B subunit) (CTB)、霍亂毒素、霍亂毒素的解毒變體、大腸桿菌sat蛋白、大 腸桿菌sat蛋白的效應(yīng)結(jié)構(gòu)域、空腸彎曲桿菌AcrA(C. jejuni AcrA)和空腸彎曲桿菌天然 糖蛋白。 在一種【具體實(shí)施方式】中，本文提供了一種包含載體蛋白和修飾的大腸桿菌0121 0-抗原的生物綴合物，其中所述修飾的大腸桿菌0121 0-抗原包含： - 4)- a -D-GalNAcA-(1 - 4)- a -D-GalNAcA-(1 - 在另一種【具體實(shí)施方式】中，本文提供了一種包含載體蛋白和修飾的大腸桿菌0121 0-抗原的生物綴合物，其中所述修飾的大腸桿菌0121 0-抗原包含： 在另一種【具體實(shí)施方式】中，本文提供了一種包含載體蛋白和修飾的大腸桿菌0121 0-本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種生物綴合物，包含載體蛋白和修飾的大腸桿菌O121?O?抗原。

【技術(shù)特征摘要】
【國外來華專利技術(shù)】...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：M·瓦克，邁克爾·科瓦里克，邁克爾·韋特，
申請(專利權(quán))人：格林考瓦因有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：瑞士;CH