醋酸格拉默分子量標記制造技術

本發明專利技術的方面涉及用于精確測定醋酸格拉默的平均分子量的醋酸格拉默分子量標記。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】醋酸格拉默分子量標記引言本專利技術的方面涉及不具有預定氨基酸序列的多肽，其用作醋酸格拉默的分子量標記，并且用于精確測定醋酸格拉默的平均分子量。醋酸格拉默(以前稱為共聚物-1)化學上稱為L-谷氨酸與L-丙氨酸、L-賴氨酸和L-酪氨酸的聚合物的醋酸鹽。其具有式(I)的結構式。(Glu, Ala, Lys, Tyr) x. XCH3COOH(C5H9NO4. C3H7NO2. C6H14N2O2. C9H11NO3) x. XC2H4O2式⑴醋酸格拉默是多肽的合成混合物的乙酸鹽，所述多肽的每一種基本由四種天然氨基酸組成平均摩爾份數分別為0. 141,0. 427,0. 095和0. 338的L-谷氨酸、L-丙氨酸、L-酪氨酸和L-賴氨酸。醋酸格拉默的平均分子量為5，000-9，000道爾頓。醋酸格拉默在美國以 Copaxone (Teva Pharmaceutical Industries Ltd.的注冊商標)銷售。指出醋酸格拉默用于降低患有復發-緩解型多發性硬化癥(RRMS)的患者的復發頻率。第6，514，938號美國專利公開了七種具有在該專利中鑒定的氨基酸序列的多肽。第7，074，580號美國專利公開了用于獲得含有多肽混合物的藥品的方法。每種多肽基本由丙氨酸、谷氨酸、酪氨酸和賴氨酸組成?；旌衔锞哂?000道爾頓至13，000道爾頓的平均分子量，并且在該混合物中，丙氨酸的摩爾份數為0. 427，谷氨酸的摩爾份數為0. 141，賴氨酸的摩爾份數為0. 337，并且酪氨酸的摩爾份數為0. 093。該專利教導了測定某一批次的多肽水性混合物的分子量分布，所述多肽的每一種基本由丙氨酸、谷氨酸、酪氨酸和賴氨酸組成。分子量分布測定使用凝膠滲透色譜柱以測定混合物是否具有用于包含在藥品中的4000道爾頓至13，000道爾頓的平均分子量。測定方法包括使用凝膠滲透色譜柱通過使多種分子量標記在柱上進行層析來建立在柱上的保留時間與分子量之間的關系，從而校準所獲得的分子量，其中所述分子量標記的每一種為基本由丙氨酸、谷氨酸、酪氨酸和賴氨酸組成的多肽。第7，163，802號美國專利公開了用于獲得含多肽混合物的藥品的方法，所述多肽的每一種基本由丙氨酸、谷氨酸、酪氨酸和賴氨酸組成。多肽混合物具有2000道爾頓至40，000道爾頓的平均分子量，并且在該混合物中，丙氨酸的摩爾份數為0. 38至0. 5，谷氨酸的摩爾份數為0. 13至0. 15，酪氨酸的摩爾份數為0. 08至0. 10，并且賴氨酸的摩爾份數為0.3至0.4。在所述方法中，使用凝膠滲透色譜柱檢測某一批次的多肽混合物(所述多肽的每一種基本由丙氨酸、谷氨酸、酪氨酸和賴氨酸組成)以測定混合物是否具有用于包含在藥品中的2000道爾頓至40，000道爾頓的平均分子量。檢測方法包括通過使多種分子量標記(所述分子量標記各自為基本由丙氨酸、谷氨酸、酪氨酸和賴氨酸組成并且具有預定氨基酸序列的多肽)在柱上進行層析來建立在柱上的保留時間與分子量之間的關系，從而校準凝膠滲透色譜柱，所述關系用于測定多肽混合物的平均分子量。仍亟需提供用作用于測定醋酸格拉默多肽組合物的峰值平均分子量(peakaverage molecular weight)的標準的醋酸格拉默分子量標記。專利技術概述本專利技術提供了不具有預定氨基酸序列的多肽，其用作醋酸格拉默的分子量標記，所述分子量標記用作用于測定醋酸格拉默多肽的峰值平均分子量的標準。附圖簡述附圖說明圖1為使用基于保留時間(RT)的算法，本專利技術的分子量標記的RT對那些標記的對數分子量(log molecular weight)的圖。圖2是根據實施例1制備的分子量標記I的MALDI譜的圖示。圖3是根據實施例1制備的分子量標記2的MALDI譜的圖示。圖4是根據實施例1制備的分子量標記3的MALDI譜的圖示。圖5是根據實施例1制備的分子量標記4的MALDI譜的圖不。圖6是Copaxone 的圓二色譜的圖示。圖7是根據實施例1制備的分子量標記2的圓二色譜的圖示。圖8是根據實施例1制備的分子量標記3的圓二色譜的圖示。圖9是根據實施例1制備的分子量標記4的圓二色譜的圖示。專利技術詳述本專利技術提供了不具有預定氨基酸序列的多肽，其用作醋酸格拉默的分子量標記，所述分子量標記用作用于測定醋酸格拉默多肽的峰值平均分子量的標準。本專利技術提供了用作用于測定醋酸格拉默多肽的峰值平均分子量的醋酸格拉默分子量標記的多肽。一方面，本專利技術提供了具有與醋酸格拉默多肽對應的氨基酸組成且經鑒定的分子量(identified molecular weight)為約2，000道爾頓至約40，000道爾頓或約2，000道爾頓至約20，000道爾頓或約2，000道爾頓至約15，000道爾頓或約2，000道爾頓至約10，000道爾頓的多肽，其用作用于測定多肽的平均分子量的分子量標記?！矫?，本專利技術提供了具有與醋酸格拉默對應的氨基酸組成且經鑒定的分子量為約2，000道爾頓至約40，000道爾頓或約2，000道爾頓至約20，000道爾頓或約2，000道爾頓至約15，000道爾頓或約2，000道爾頓至約10，000道爾頓的多肽，其用作用于測定醋酸格拉默的平均分子量的分子量標記。一方面，本專利技術提供基本由以下氨基酸組成的多肽丙氨酸、谷氨酸、酪氨酸和賴氨酸，所述氨基酸的摩爾份數為約0. 38至約0. 50的丙氨酸、約0. 13至約0. 155的谷氨酸、約0. 08至約0. 12的酪氨酸和約0. 28至約0. 4的賴氨酸,其用作用于測定多肽的平均分子量的分子量標記。一方面，本專利技術提供基本由以下氨基酸組成的多肽丙氨酸、谷氨酸、酪氨酸和賴氨酸，所述氨基酸的摩爾份數為約0. 38的丙氨酸至約0. 50的丙氨酸、約0. 13的谷氨酸至約0. 155的谷氨酸、約0. 08的酪氨酸至約0. 12的酪氨酸和約0. 28的賴氨酸至約0. 4的賴氨酸組成，其用作用于測定醋酸格拉默的平均分子量的分子量標記。一方面，本專利技術提供了制備本專利技術的分子量標記的方法，其包括單獨的或以所述順序進行的下列步驟中的一步或多步(a)將醋酸格拉默多肽在凝膠滲透色譜(GPC)柱中分級；(b)使步驟(a)中收集的流份通過分子量截留膜；以及(c)通過將從步驟(b)收集的流份凍干來分離所述分子量標記。一方面，本專利技術提供了制備本專利技術的分子量標記的方法，其包括單獨的或以所述順序進行的下列步驟中的一步或多步(a)將醋酸格拉默在凝膠滲透色譜(GPC)柱中分級；(b)使步驟(a)中收集的流份通過分子量截留膜；以及(C)通過將從步驟(b)收集的流份凍干來分離所述分子量標記。步驟(a)包括在凝膠滲透色譜(GPC)柱中分級醋酸格拉默樣品?？梢栽诓襟E(a)中使用的用于凝膠過濾的合適的色譜介質包括但不限于Superdex 、Sephacryl 、Superose 和Sephadex 等。Superdex 是基于已與葡聚糖共價結合的高度交聯的多孔瓊脂糖顆粒的復合介質。Superdex 是GEHealthcare公司的商標。Sephacryl 是與N，N，-亞甲基雙丙烯酰胺交聯的烯丙基葡聚糖。Sephacryl 是GE Healthcare的商標。Superose 是基于高度交聯的多孔瓊脂糖顆粒的具有高度物理和化學穩本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】2010.07.29 IN 2146/CHE/2010;2010.10.04 US 61/389,31.分子量標記，其具有與醋酸格拉默對應的氨基酸組成和約2，OOO道爾頓至約40，000道爾頓的經鑒定的分子量。2.如權利要求1所述的分子量標記，其中所述經鑒定的分子量為約2，000道爾頓至約20, 000道爾頓。3.如權利要求1所述的分子量標記，其中所述經鑒定的分子量為約2，000道爾頓至約15,000道爾頓。4.如權利要求1所述的分子量標記，其中所述經鑒定的分子量為約2，000道爾頓至約10,000道爾頓。5.如權利要求1所述的分子量標記，其基本由以下氨基酸組成:丙氨酸、谷氨酸、酪氨酸和賴氨酸，所述氨基酸的摩爾份數為約0.38至約0.50的丙氨酸、約0.13至約0.15的谷氨酸、約0.08至約0.10的酪氨酸和約0.3至約0.4的賴氨酸。6.如權利要求1所述的分子量標記，其為峰值平均分子量為16833道爾頓的分子量標記1、峰值平均分子量為8908道爾頓的分子量標記2、峰值平均分子量為5006道爾頓的分子量標記3或峰值平均分子量為3709道爾頓的分子量標...

【專利技術屬性】
技術研發人員：S·斯里尼瓦桑，K·拉瑪薩米，C·K·N·哈勒姆，Y·K·K·科馬拉沃盧，S·R·卡勒姆，B·H·V·甘吉，R·C·鮑托朱，B·戴維，
申請(專利權)人：雷迪博士實驗室有限公司，雷迪博士實驗室公司，
類型：
國別省市：